DBS13004-2015 食品中11种双酚类物质的测定--高效液相色谱-串联质谱法

0附件 4DBS13河北省地方标准DBS13/004-2015食品中 11 种双酚类物质的测定-高效液相色谱-串联质谱法2016-xx-xx 发布                                2016-xx-xx 实施1河北省卫生和计划生育委员会 发布前 言本标准按照 GB/T 1.1标准化工作导则  第 1 部分：标准的结构和编写给出的规则起草。本标准的附录 A、附录 B、附录 C、附录 D 为资料性附录。本标准由河北省卫生和计划生育委员会提出并归口。本标准起草单位：河北科技大学、石家庄君乐宝乳业有限公司。本标准主要起草人：高文惠、柴艳兵、高林、张耀广、刘丽、李亚丽、赵春娟、池肖娜。本标准于2016年月日首次发布。0食品安全地方标准食品中 11 种双酚类物质的测定高效液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了食品中11种双酚类物质含量的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS ）测定方法。本标准适用于肉及肉制品、鱼类水产品、乳及乳制品、水果制品、蔬菜制品、饮料和饮用水等七类包装食品中11种双酚类物质含量的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3原理样品中的双酚A、双酚A-二缩水甘油醚、双酚F、双酚F-二缩水甘油醚及其衍生物用叔丁基甲醚或乙腈提取，HLB固相萃取小柱净化，高效液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，本标准所用水均为GB/T 6682规定的一级水，试剂均为HPLC级。4.1甲醇。4.2乙腈。4.3叔丁基甲醚。4.4正己烷：分析纯。4.5乙酸：分析纯。4.6氯化钠：分析纯。4.711 种双酚类标准品：双酚 A-二缩水甘油醚（BADGE）、双酚 A-(2,3-二羟基丙基) 缩水甘油醚（BADGEH 2O）、双酚 A-(3-氯-2-羟丙基) 缩水甘油醚（BADGEHCl）、双酚 A-双(2,3-二羟基丙基)醚（BADGE2H 2O）、双酚 A-双(3-氯-2-羟丙基) 甘油醚（BADGE2HCl）、双酚 A-(3-氯-2-羟丙基) (2,3-二羟基丙基)醚（BADGEH 2OHCl）、双酚 F-二缩水甘油醚（BFDGE）、双酚 F-双(2,3-二羟基丙基)醚（BFDGE2H 2O）、双酚 F-双(3-氯-2-羟丙基) 甘油醚（BFDGE2HCl）、双酚A（BPA）、双酚 F（BPF），其纯度及其他信息参见附录 A。4.8氯化钠饱和溶液：室温下，向一定体积的水中加入过量的氯化钠（4.6）。4.90.1%（v/v）乙酸的乙腈溶液：取 0.1 mL 乙酸（4.5），用乙腈（4.2）定容至 100 mL。4.10甲醇-水溶液（80+20，v/v）：取甲醇 80 mL，水 20 mL，混合均匀。4.11HLB 固相萃取柱：60，3 mL，填料为亲脂性二乙烯苯和亲水性 N-乙烯基吡咯烷酮两种单体按一定比例聚合成的大孔共聚物，或相当者。使用前分别用 5 mL 甲醇和 5 mL 水预淋洗并保持柱体湿润。4.12标准储备液：称取适量标准品（精确至 0.0001g），分别用甲醇溶解配制浓度为 1.0/mL 的标准储备液，保存于-18 冰箱内。4.13混合标准工作液：用甲醇将各项标准储备液混合稀释成 10.0 g/mL 的标准工作溶液。保存于4冰箱内。4.14基质标准工作液：准确移取一定体积的标准中间工作液，根据需要用空白样品提取液稀释成适当浓度的标准工作溶液，现用现配。4.15微孔滤膜：有机系，0.22 m。5仪器5.1液相色谱-三重四级杆串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。15.2固相萃取装置。5.3超声波振荡器。5.4高速离心机。5.5旋转蒸发器。5.6氮吹仪。5.7涡旋混合器。5.8玻璃离心管。5.9分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。6分析步骤6.1试样制备取有代表性固态样品100 g、液态样品100 mL，固态样品用组织捣碎机充分捣碎混匀，液态样品混合均匀，碳酸饮料需预先除气，待用。6.2试样处理6.2.1提取6.2.1.1 果蔬制品、饮料、饮用水样品称取样品2g（精确至0.01 g）于50 mL离心管内，向其中加入 15 mL叔丁基甲醚，超声振荡提取10 min。在12000 r/min下离心3  min，转移叔丁基甲醚层至 100 mL浓缩瓶中，再用15 mL叔丁基甲醚重复提取一次，合并提取液于浓缩瓶中。于45 下减压浓缩至干。加入5 mL甲醇-水溶液（4.10）溶解，溶解液再加入10 mL水混匀。6.2.1.2 肉及肉制品、鱼类水产品样品称取样品 2g（精确至 0.01 g）于 50 mL 离心管内，向其中加入 15 mL 叔丁基甲醚，超声振荡提取 10 min。在 12000 r/min 下离心 3 min，转移叔丁基甲醚层至 100 mL 浓缩瓶中，剩余残渣再次用 15 mL 叔丁基甲醚提取一次，合并提取液，于 45 下减压浓缩至干。加入 5 mL 甲醇-水溶液（4.10）溶解后，再加入 10 mL 水，混匀。加入 5 mL 正己烷，振荡 10 min 后，于 12000 r/min 下离心 3 min，弃去正己烷层，下层待净化。6.2.1.3 乳及乳制品样品称取液态乳样品2 g（固态样品0.25 g，精确至0.01 g）于50 mL离心管内（固态样品需加水至2 g，混合均匀），向其中依次加入15 mL 0.1%乙酸的乙腈溶液（ 4.9）、5 mL饱和NaCl溶液（4.8），混匀，超声振荡提取10 min。在12000  r/min下离心3 min，转移上清液（乙腈层）至100 mL浓缩瓶中，剩余部分再次加入15 mL 0.1%乙酸乙腈溶液提取，合并提取液。于 55 下减压浓缩至干。加入5 mL甲醇-水溶液（4.10）溶解后，再加入10 mL水，混匀。6.2.2净化将上述提取液过已活化的HLB固相萃取柱，加5 mL水淋洗。待淋洗液全部流出后，弃去全部流出液，减压抽干3 min。用5mL甲醇洗脱，接取全部洗脱液。将洗脱液在40 下用氮气吹干，再以5.0 mL甲醇-水溶液（4.10）溶解残渣，混匀，微孔滤膜过滤，滤液供液相色谱-串联质谱测定。6.3测定6.3.1液相色谱条件液相色谱条件如下：a） 色谱柱：C 18柱，柱长100 mm，内径3.0 mm，粒径2.7 m，或相当者。b） 流动相：A为水，B为甲醇。梯度洗脱条件见表1。2表1 液相色谱梯度洗脱程序时间minA%B%0 95 50.5 95 55 20 8010 20 8010.5 95 515 95 5c） 流速：0.4 mL/min。d） 进样量：5 L。e） 柱温：30 。6.3.2质谱条件a） 离子源：电喷雾离子源（ESI）。b） 扫描方式：正离子扫描和负离子扫描。c） 检测方式：多反应监测（MRM）。d） 其他参考质谱条件参见附录B。6.3.3定量测定根据样液中被测物含量选定浓度相近的基质标准溶液一起进行色谱分析。基质标准溶液和样液中被测物的响应值均应在仪器检测线性响应范围内。对基质标准溶液和样液等体积进样测定。在6.3.1色谱条件下，11种被测物的保留时间参见附录B，二级质谱图参见附录C图C.1 C.11，多反应监测（MRM）色谱图参见附录D图D.1 D.11。6.3.4定性测定被测组分选择1个母离子、2个子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与基质标准工作液中对应的保留时间偏差在2.5%之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/% 50 2050 1020 10允许的相对偏差/% 20 25 30 506.4空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。7结果计算试样中的被测物含量按式（1）计算，计算结果需扣除空白值：（1）isic10mAVX式中：试样中被测物含量，单位为微克每千克（g/kg）；iX样液中被测物的峰面积；iA3基质标准溶液中被测物的峰面积；sA基质标准溶液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；sc样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；V最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。m计算结果保留三位有效数字。8检出限和定量限8.1检出限（LOD）七类包装食品（包括肉及肉制品、鱼类水产品、乳及乳制品、水果制品、蔬菜制品、饮料和饮用水）中 BADGE、BADGEH 2O、BADGEHCl、BADGEH 2OHCl 和 BFDGE2H2O 的检出限为 1.5 g/kg，BADGE2H 2O、BFDGE 和 BFDGE2HCl 的检出限为 3 g/kg，BADGE2HCl、BPA 和 BPF 的检出限为 6 g/kg。8.2定量限（LOQ）七类包装食品（包括肉及肉制品、鱼类水产品、乳及乳制品、水果制品、蔬菜制品、饮料和饮用水）中 BADGE、BADGEH 2O、BADGEHCl、BADGEH 2OHCl 和 BFDGE2H2O 的定量限为 5 g/kg，BADGE2H 2O、BFDGE 和 BFDGE2HCl 的定量限为 10 g/kg，BADGE2HCl、BPA 和 BPF 的定量限为20 g/kg。4A A附 录 A（资料性附录）标准物质基本信息表A.1 11种双酚类化合物基本信息序号 中文名称 英文名称 简称 CAS 号化学分子式相对分子质量纯度%1 双酚 A 二缩水甘油醚 Bisphenol A diglycidyl ether BADGE 1675-54-3 C21H24O4 340.41 952双酚 A(2,3-二羟基丙基) 缩水甘油醚Bisphenol A(2，3-dihydroxypropyl)glycidyl etherBADGEH2O 76002-91-0 C21H26O5 358.43 953双酚 A(3-氯-2-羟丙基) 缩水甘油醚Bisphenol A(3-chloro-2-hydroxypropyl) glycidyl etherBADGEHCl 13836-48-1 C21H25ClO4 376.87 954双酚 A-双(2,3-二羟基丙基)醚Bisphenol A bis(2，3-dihydroxypropyl)etherBADGE2H2O 5581-32-8 C21H28O6 376.44 955双酚 A-双(3-氯-2-羟丙基)甘油醚Bisphenol A bis(3-chloro-2-hydroxypropyl)etherBADGE2HCl 4809-35-2 C21H26Cl2O4 413.33 956双酚 A(3-氯-2-羟丙基) (2,3-二羟基丙基)醚Bisphenol A bis(3-chloro-2-hydroxypropyl) (2，3-dihydroxypropyl)etherBADGEH2OHCl 227947-06-0 C21H27ClO5 394.89 957 双酚 F 二缩水甘油醚 Bisphenol F diglycidyl ether BFDGE 2095-03-6 C19H20O4 312.36 958双酚 F(2,3-二羟基丙基)醚Bisphenol F bis(2，3-dihydroxypropyl) etherBFDGE2H2O 72406-26-9 C19H24O6 348.39 959双酚 F(3-氯-2-羟丙基) 甘油醚Bisphenol F bis(3-chloro-2-hydroxypropyl)etherBFDGE2HCl 无 CAS 号 C19H22Cl2O4 385.28 9510 双酚 A Bisphenol A BPA 80-05-7 C15H16O2 228.29 9511 双酚 F 4,4'-Dihydroxy-diphenylmethane BPF 620-92-8 C13H12O2 200.24 955B B附录B（资料性附录）参考质谱条件参考质谱条件a） 电喷雾电压（IS）：正离子和负离子扫描模式下分别为5500 V和-4500 V；b） 雾化气压力（GSI，psi）：40（氮气）；c） 气帘气压力（CUR，psi）：30（氮气）；d） 辅助气流速（GS2，psi）：50（氮气）；e） 离子源温度（TEM）：550 。碰撞电压（CE）、去簇电压（DP）、碰撞室入口电压（EP）和碰撞室出口电压（CXP）见表B.1。表B.1 主要参考质谱参数化合物 母离子 m/z 子离子 m/z 去簇电压 V 碰撞电压 V 碰撞室入口电压 V 碰撞室出口电压 V 保留时间 min191.2* 21 14BADGE 358.2135.2 55 42 10 9 10.09209.2* 19 12BADGEH2O 376.3 135.2 56 42 10 12 9.02227.3* 19 20BADGEHCl 394.3135.2 64 45 10 25 10.49209.0* 22 12BADGE2H2O 394.2 135.3 56 45 10 12 8.36227.4* 19 16BADGE2HCl 430.2135.2 60 48 10 10 10.93227.1* 22 15BADGEH2OHCl 412.2 135.0 55 46 10 15 9.27163.2* 20 20BFDGE 330.2133.2 45 18 10 20 9.34181.2* 20 10BFDGEE2H2O 366.3 107.0 58 30 10 10 7.91199.1* 20 10BFDGE2HCl 402.2181.0 52 32 10 10 9.89备注：带*的为定量离子对。正离子扫描（ESI +）212.3* -25BPA 227.7133.3 -86 -35 -10 -15 8.6593.2* -31BPF 199.5105.5 -85 -28 -10 -15 8.14备注：带*的为定量离子对。负离子扫描（ESI -）6C 附录C（资料性附录）各标准物质二级质谱图图 C.1  BADGE 标准品二级质谱图图 C.2  BADGEH2O 标准品二级质谱图7图 C.3  BADGEHCl 标准品二级质谱图图 C.4  BADGE2H2O 标准品二级质谱图8图 C.5  BADGE2HCl 标准品二级质谱图图 C.6  BADGEH2OHCl 标准品二级质谱图9图 C.7  BFDGE 标准品二级质谱图图 C.8  BFDGE2H2O 标准品二级质谱图10图 C.9  BFDGE2HCl 标准品二级质谱图图 C.10  BPA 标准品二级质谱图11图 C.11  BPF 标准品二级质谱图12D C附录D（资料性附录）标准品多反应监测（MRM)色谱图a）358.2191.2（20 ng/mL）ESI +   保留时间 10.09 minb）358.2135.2（20 ng/mL）ESI +    保留时间 10.08 min图D.1  BADGE标准品的多反应监测（MRM）色谱图13a）376.3209.2（20 ng/mL）ESI +    保留时间9.02 minb）376.3135.2（20 ng/mL）ESI +    保留时间 9.02 min图D.2  BADGEH 2O标准品的多反应监测（MRM）色谱图14a）394.3227.3（20 ng/mL）ESI +    保留时间10.49 minb）394.3135.2（20 ng/mL）ESI +    保留时间 10.49 min图D.3  BADGEHCl标准品的多反应监测（MRM）色谱图15a）394.2209.0（20 ng/mL）ESI +    保留时间8.36 minb）394.2135.3（20 ng/mL）ESI +    保留时间 8.36 min图D.4 BADGE2H 2O标准品的多反应监测（MRM）色谱图16a）430.2227.4（20 ng/mL）ESI +    保留时间10.93 minb）430.2135.2（20 ng/mL）ESI +    保留时间 10.92 min图D.5 BADGE2HCl标准品的多反应监测（MRM）色谱图17a）412.2227.1（20 ng/mL）ESI +    保留时间 9.27 minb）412.2135.0（20 ng/mL）ESI +    保留时间 9.27 min图 D.6  BADGEH2OHCl 标准品的多反应监测（MRM）色谱图18a）330.2163.2（20 ng/mL）ESI +    保留时间 9.34 minb）330.2133.2（20 ng/mL）ESI +    保留时间 9.45 min图 D.7  BFDGE 标准品的多反应监测（MRM）色谱图19a）366.3181.2（20 ng/mL）ESI +    保留时间 7.91 minb）366.3107.0（20 ng/mL）ESI +    保留时间 7.91 min图 D.8  BFDGE2H2O 标准品的多反应监测（MRM）色谱图20a）402.2199.1（20 ng/mL）ESI +    保留时间 9.89 minb）402.2181.0（20 ng/mL）ESI +    保留时间 9.89 min图D.9  BFDGE2HCl标准品的多反应监测（MRM）色谱图21a）227.7212.3（20 ng/mL）ESI -    保留时间 8.65 minb）227.7133.3（20 ng/mL）ESI -    保留时间 8.65 min图 D.10  BPA 标准品的多反应监测（MRM）色谱图22a）199.693.2（20 ng/mL）ESI -    保留时间 8.14 minb）199.6105.5（20 ng/mL）ESI -  保留时间 8.14 min图D.11  BPF标准品的多反应监测（MRM）色谱图_23DBS13/004-2015食品中 11 种双酚类物质的测定高效液相色谱-串联质谱法编制说明（编制单位：河北科技大学、石家庄君乐宝乳业有限公司）一、任务来源本标准是根据河北省卫生与计划生育委员会下达的关于河北省食品安全地方标准制定项目委托协议书的要求，由河北科技大学和石家庄君乐宝乳业有限公司承担的食品中 11 种双酚类物质的测定高效液相色谱- 串联质谱法地方标准而研究制定的，其计划编号为 DBS13/004-2015。二、制标原则本标准的编制依据 GB/T 1.1 标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则的要求进行编制制定的。三、起草过程本标准起草人通过查阅相关资料和文献，参考 SN/T 3150-20121，结合本实验室的条件和本方法的技术特点，通过大量的方法优化试验、回收率、精密度及应用范围等一系列研究，建立了一种高选择性、高灵敏度既定性又定量的食品中 11 种双酚类物质的测定方法（高效液相色谱-串联质谱法） 。本标准于 2015年 4 月 14 日在石家庄市召开的首次 2015 年度河北省食品安全地方标准立项建议论证会上获得初步立项；2015 年 6 月 24 日至 25 日在河北省秦皇岛市专家对该项食品安全地方标准立项建议进行进一步的审评、论证；2015 年 9 月 18 日在河北省卫生计生委食品处召开会议，就标准起草要求及进度做了统一安排。标准起草单位按要求进行了一系列相应试验和工作。2016 年 1 月 20 日由省卫生计生委主持在石家庄君乐宝乳业有限公司召开了又一次论证会，地方标准编制单位向各位专家提供了地方标准文本和编制说明书，编制单位负责人汇报了标准制定的背景、意义、标准编制过程、获得的相应结果以及今后的工作，专家对该项目的工作进行了充分的论证，提出了宝贵的意见，针对专家们提出的意见和建议，项目组对该项目做了认真的改进与完善。在此基础上又进行了室外验证试验、征求意见等一系列工作，并于 2016 年 6 月初形成征求意见稿。2016 年 8 月 23 日省卫生计生委对 2015 年省食品安全地方标准的制定工作做了审查，专家们进一步对本标准提出了详细的意见和建议，并形成了审查意见书，标准编制单位按照本次审查的意见对相关文件进行了修改和完善。四、研究背景双酚类物质是生产聚碳酸酯包装的原料单体，也是环氧树脂类内壁涂层的原料单体，在食品包装中广泛应用，例如塑料饮料瓶、塑料水桶、奶嘴、奶瓶、易拉罐、瓶盖等，双酚类物质很易通过食品包装材料迁移到食品中而污染食品。双酚类物质属内分泌干扰物，严重威胁胎儿以及婴幼儿的健康， 是造成人体24过度肥胖、儿童性早熟及诱发癌症的原因之一 2。双酚类物质的危害已经得到全世界的广泛关注，世界主要发达国家已经禁止了该类物质在婴幼儿用品生产过程中的添加和使用。我国也于 2011 年禁止其在儿童奶瓶中的应用 3。国家疾控中心早在本世纪初就已经开展相关检测技术研究和人群健康风险评估，目前已经逐步将其作为国家食品安全风险监测项目，在全国范围内推广，但是还没有形成规范、统一的检测技术规范。因此，在我省率先开展相关领域标准检测技术的研究，对于加强我省食品安全监管，有效开展食品安全风险监测，保护人民身体健康和生命安全具有重要意义。目前，关于食品中同时测定多种双酚类物质的检测标准，国内只有 2012 年发布并实施了一项行业标准，即 SN/T 3150-2012 出口食品中双酚 A-二缩水甘油醚 (BADGE)、双酚 F-二缩水甘油醚(BFDGE)及其衍生物残留测定 液相色谱-质谱 /质谱法 1。但该标准中检测对象不包括人们较为关注的双酚 A(BPA)和双酚F(BPF)，而且该标准只针对出口罐装食品，即罐装果蔬和罐装鱼与肉，而未考虑诸多的塑料包装食品。因此，这不能满足我国食品安全风险监测和食品进出口贸易的需求，也不利于人体健康。在国外，欧盟No.1895/2005 指令规定了 BADGE 及其水解物总迁移限量为 9mg/kg，氯代醇衍生物不得超过 1mg/kg ，BPF 及 BFDGE 不得检出 4，欧盟 No.10/2011 指令中 BPA 迁移限量为 0.6mg/kg5。我国 GB 9685-2008中也规定塑料、涂料和粘合剂中 BPA 的迁移限量为 0.6mg/kg6。双酚类物质作为国际公认的有害物，是我国食品包装应该迅疾控制的物质之一。因此，亟需制订与塑料包装材料或容器相接触的食品中 11 种双酚类物质检测方法的地方标准，该标准的制定与实施必将产生显著的社会效益和间接的经济效益。本标准的制定符合我国食品安全法 、 计量法等法规条例的要求，符合国家保卫食品安全、捍卫人类健康的要求，为食品产品的行政监管、企业把关和进出口食品的质量监测提供了强有力的技术依据。五、标准说明1、标准的结构：本标准分为范围、规范性引用文件、原理、试剂和材料、仪器、分析步骤、结果计算、验证试验共 8 个部分。2、本标准主要参考国家出入境检验检疫行业标准 SN/T 3150-2012。本标准不仅检测食品中双酚 A-二缩水甘油醚(BADGE)、双酚 F-二缩水甘油醚(BFDGE)及其衍生物等 9 种双酚类物质，更将人们较为关注的双酚A 和双酚 F 作为本标准的检测目标物（11 种双酚类化合物结构式如图 1 所示） ；测定样品基质包括肉及肉制品、鱼类水产品、乳及乳制品、水果制品、蔬菜制品、饮料和饮用水等七类包装食品；由于色谱条件和质谱条件的优化，其分析时间和部分目标物的检测灵敏度优于行业标准；本标准附录中有多种标准品的二级质谱图和多反应监测（MRM）色谱图。25OO CH3CH3 OO CH3CH3 OOOOHOH CH3CH3 OO ClOHOBADGE                       BADGEH2O                BADGEHClCH3CH3 OO OHOHOHOHCH3CH3 OO ClOHCl OHCH3CH3 OO OHOHCl OHBADGE2H2O                  BADGE2HCl                BADGEH2OHClOOO O OO OHOHOHOH OO ClOHCl OHBFDGE                     BFDGE2H2O                   BFDGE2HClCH3 CH3OHOH OHOHBPA                              BPF图 1 11 种双酚类化合物结构式六、本标准主要试验技术论证6.1  样品前处理方法的研究本标准的样品前处理方法在参考 SN/T 3150-2012 和其他文献 7的基础上，通过试验进行了比较和选择。其各类食品样品前处理方法见地标文本 6.2。6.2  样品检测技术研究为了提高待测物的分离效果和检测灵敏度，本标准针对样品检测技术优化了色谱条件和质谱条件。试验比较了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.005 mol/L 醋酸铵水溶液、甲醇-0.005 mol/L 醋酸铵水溶液（含 0.1%甲酸，v/v）作为流动相时待测物分离和响应情况，试验结果表明，以甲醇为有机相时，各待测物响应强度较稳定，且峰形较好；而乙腈为有机相时，响应值明显降低，分离度也较差；其中甲醇-水为流动相时效果最佳，故本标准采用甲醇-水为流动相。试验考察了多种梯度洗脱条件对待测物的分离和响应值的影响，经优化确定了表 1 的梯度洗脱程序。本标准还对质谱参数和条件进行了优化，以提高检测的灵敏度和稳定性。6.2.1 仪器Agilent 1260-AB4000Q TRAP  高效液相色谱- 串联质谱仪，固相萃取装置，超声波振荡器，高速离心机，旋转蒸发器，氮吹仪，涡旋混合器，分析天平。266.2.2 色谱柱Poroshell 120EC-C18 色谱柱，柱长 100 mm，内径 3.0 mm，粒径 2.7 m，或相当者。6.2.3 色谱条件流动相：A为水，B为甲醇。梯度洗脱条件见表1。表1 液相色谱梯度洗脱程序时间 / min A / % B / %0 95 50.5 95 55 20 8010 20 8010.5 95 515 95 5流速：0.4 mL/min进样量：5 L柱温：30 6.2.3 质谱条件质谱条件如下：a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）b) 扫描方式：正离子和负离子扫描c) 检测方式：多反应监测（MRM）参考质谱条件如下：a) 电喷雾电压（IS）：正离子和负离子扫描模式下分别为 5500 V 和-4500 Vb) 雾化器压力 （GS1 ，psi）：40 ( 氮气)c) 气帘气压力（CUR ，psi）：30 (氮气)d) 辅助气流速（GS2 ，psi）：50 ( 氮气)e) 离子源温度（TEM）：550 其他参考质谱条件如碰撞电压（CE ） 、去簇电压（DP） 、碰撞室入口电压（EP ） 、碰撞室出口电压（CXP）如表 2 所示。表 2  参考质谱条件化合物 母离子 m/z 子离子 m/z去簇电压V碰撞电压V碰撞室入口电压V碰撞室出口电压V保留时间min191.2* 21 14BADGE 358.2135.2 55 42 10 9 10.09209.2* 19 12BADGEH2O 376.3 135.2 56 42 10 12 9.02BADGEHCl 394.3 227.3* 64 19 10 20 10.4927135.2 45 25209.0* 22 12BADGE2H2O 394.2 135.3 56 45 10 12 8.36227.4* 19 16BADGE2HCl 430.2135.2 60 48 10 10 10.93227.1* 22 15BADGEH2OHCl 412.2 135.0 55 46 10 15 9.27163.2* 20 20BFDGE 330.2133.2 45 18 10 20 9.34181.2* 20 10BFDGEE2H2O 366.3 107.0 58 30 10 10 7.91199.1* 20 10BFDGE2HCl 402.2181.0 52 32 10 10 9.89备注：带*的为定量离子对。正离子扫描（ESI +）212.3* -25BPA 227.7133.3 -86 -35 -10 -15 8.6593.2* -31BPF 199.5105.5 -85 -28 -10 -15 8.14备注：带*的为定量离子对。负离子扫描（ESI -）6.3 试验数据6.3.1  定性定量依据试验【方法】取一定浓度双酚类物质的标准溶液，分别在ESI +和ESI 模式下进行电离监测。再将各物质在ESI模式下进行母离子扫描，BPA 和BPF在一级全扫描质谱图中得到M-H ，其余9 种双酚类化合物在一级全扫描质谱图中得到M+H +；参照国际食品法典委员会（ CAC）和EU  657/2002/EEC 号决议中有关规定，选择两对离子进行MRM监测即可。通过调节仪器参数使母离子的丰度最大，进一步对子离子进行二级质谱扫描，得到碎片离子信息，选取丰度较强、干扰较小的两对子离子作为定性、定量离子，并优化去簇电压、碰撞电压等参数条件，以达到最佳灵敏度。【试验】11 种双酚类物质标准品二级质谱图见标准文本附录 C 图 C.1 C.11，多反应监测（MRM）色谱图见附录 D 图 D.1 D.11。【结果】通过试验表明，BPA 和 BPF 在 ESI模式下有更好的响应，而其余 9 种双酚类物质在 ESI+模式下有更好的响应。通过条件优化 11 种双酚类化合物的质谱参数见表 2。在最佳色谱和质谱条件下双酚类化合物混合标准物质的 HPLC-MS/MS 色谱分离图如图 2 和图 3 所示。281-BFDGEE2H2O  2-BADGE2H2O  3-BADGEH2O  4-BADGEH2OHCl  5-BFDGE  6-BFDGE2HCl  7-BADGE  8-BADGEHCl  9-BADGE2HCl图 2  9 种双酚类化合物混合标准物质的 HPLC-MS/MS 色谱图（ESI -模式）1-BPF  2-BPA图 3  2 种双酚类化合物混合标准物质的 HPLC-MS/MS 色谱图（ESI +模式）6.3.2  基质空白试验【方法】不加入任何标准物质，试样经前处理后直接进样，得到 7 类包装食品样品（肉及肉制品、鱼类水产品、乳及乳制品、水果制品、蔬菜制品、饮料和饮用水）的基质空白试验 MRM 色谱图，根据 11种双酚类物质的质谱特征，并与标准谱图对照（标准文本中附录 D 图 D.1 D.11） ，研究基质空白干扰。【试验】图 4图 10 为七类包装食品样品基质空白试验 MRM 色谱图。混合标准溶液中，11 种双酚类物质的质谱特征见表2，BADGE、BADGEH 2O、BADGEHCl、BADGE 2H2O、BADGE 2HCl、BADGE H2OHCl、BFDGE、 BFDGE2H2O、BFDGE2HCl、BPA、BPF 的出峰时间分别为 10.09 min、9.02 min、10.49 min、8.36 min、10.39 min、9.27 min、9.34 min、7.91 min、9.89 min、8.65 min、8.14 min 。29（1）肉及肉制品试样基质空白试验图 4  肉及肉制品试样基质空白试验 MRM 色谱图BADGE BADGEH2O BADGEHClBADGE2H2O BADGE2HCl BADGEH2OHCl2HClBFDGE BFDGE2H2O BFDGE2HClBPFBPA30（2）鱼类水产品试样基质空白试验图 5  鱼类水产品试样基质空白试验 MRM 色谱图BPFBPABADGE BADGEH2O BADGEHClBADGE2H2O BADGE2HCl BADGEH2OHCl2HClBFDGE BFDGE2H2O BFDGE2HCl31（3）乳及乳制品试样基质空白试验图 6  乳及乳制品试样基质空白试验 MRM 色谱图BPFBPABADGE BADGEH2O BADGEHClBADGE2H2O BADGE2HCl BADGEH2OHCl2HClBFDGE2H2O2HClBFDGE2HCl2HClBFDGE2HClBPA32（4）水果制品试样基质空白试验图 7  水果制品试样基质空白试验 MRM 色谱图BPFBPABADGE BADGEH2O BADGEHClBADGE2H2O BADGE2HClBFDGEBADGEH20OHClBFDGE2HClBFDGE2H2OBPA33（5）蔬菜制品试样基质空白试验图 8  蔬菜制品试样基质空白试验 MRM 色谱图BPFBPABADGE BADGEH2O BADGEHClBADGE2H2OBFDGEBADGE2HClBFDGE2H2OBADGEH20OHClBFDGE2HCl34（6）饮料试样基质空白试验图 9 饮料试样基质空白试验 MRM 色谱图BADGE BADGEH2O BADGEHClBADGE2H2O BADGE2HCl BADGEH2OHCl2HClBFDGE BFDGE2H2O BFDGE2HClBPFBPA35（7）饮用水试样基质空白试验图 10 饮用水试样基质空白试验 MRM 色谱图BPFBPABADGE BADGEH2O BADGEHClBADGE2H2O BADGE2HCl BADGEH2OHCl2HClBFDGE BFDGE2H2OBPABFDGE2HCl2HCl36【结果】通过试验表明，七类包装食品样品基质空白中除了 8.38 min 处出现 BADGE2H2O 本底干扰物质（远低于检出限）以外，无其他干扰现象。6.3.3 标准曲线【方法】按文本 4.14 方法制备七类包装食品样品（肉及肉制品、鱼类水产品、乳及乳制品、水果制品、蔬菜制品、饮料和饮用水）基质的标准工作液，制作标准曲线，其中BADGE、BADGEHCl、BADGEH 2OHCl、BADGEH 2O 浓度分别为 2、40、100、250、400 ng/mL， BFDGE2H2O 浓度分别为 2、40、100、150、250 ng/mL，BADGE 2H2O 浓度分别为4、40、100、250、400 ng/mL，BFDGE、 BFDGE2HCl 浓度分别为 4、40、100、150、250 ng/mL， BADGE2HCl 浓度分别为 8、40、100、250、400  ng/mL，BPA、BPF 浓度分别为8、40、100、150、250 ng/mL，在选定的条件下进行测定，进样量为 5 L，用峰面积对基质标准溶液中被测组分的浓度做图。【试验】按照上述方法以基质标准溶液中被测组分的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图于是得到七类食品基质的标准曲线线性关系图。【结果】通过试验表明，七类包装食品样品中 11 种双酚类物质均呈良好线性关系，线性相关系数在0.99750.9997 之间，符合定量要求。其线性方程、线性相关系数和线性范围见表 3表 9。表 3 肉及肉制品样品基质中 11 种双酚类物质的线性关系双酚类化合物 检测范围 线性方程 线性相关系数（ R）BADGE 2400 ng/mL y =2.45104x + 2.17105 0.9992BADGEH2O 2400 ng/mL y =1.69104x + 1.18105 0.9995BADGEHCl 2400 ng/mL y =6.42103x + 2.76104 0.9995BADGE2H2O 4400 ng/mL y =2.38104 x + 3.60105 0.9994BADGE2HCl 8400 ng/mL y = 6.20102x + 3.90103 0.9984BADGEH2OHCl 2400 ng/mL y = 2.97103x + 2.19104 0.9993BFDGE 4250 ng/mL y = 4.12103x + 1.96104 0.9989BFDGEE2H2O 2250 ng/mL y = 5.35103x + 2.25104 0.9985BFDGE2HCl 4250 ng/mL y = 6.19103x + 3.43104 0.9987BPA 8250 ng/mL y=291.2 x+ 2031 0.9987BPF 8250 ng/mL y=119.5 x+ 623.9 0.999737表 4 鱼类水产品样品基质中 11 种双酚类物质的线性关系双酚类化合物 检测范围 线性方程 线性相关系数（R）BADGE 2 400 ng/mL y=2.04104 x + 2.33105 0.9985BADGEH2O 2400  ng/mL y=1.20104 x + 5.79104 0.9995BADGEHCl 2400  ng/mL y=5.66103x + 3.04104 0.9995BADGE2H2O 4400  ng/mL y=1.53104 x + 1.17105 0.9992BADGE2HCl 8400  ng/mL y=6.35103x + 3.61104 0.9992BADGEH2OHCl 2400  ng/mL y=5.44103x + 2.40104 0.9996BFDGE 4250  ng/mL y=7.0103x + 2.30104 0.9985BFDGE2H2O 2250  ng/mL y=5.44103x + 2.40104 0.9996BFDGE2HCl 4250  ng/mL y=7.24103x + 6.06104 0.9986BPA 8250  ng/mL y = 56.0x+ 732.9 0.9983BPF 8250  ng/mL y = 53.3x+ 140.2 0.9994表 5 乳及乳制品样品基质中 11 种双酚类物质的线性关系双酚类化合物 检测范围 线性方程 线性相关系数（ R）BADGE 2400 ng/mL y = 3.93104x + 2.87105 0.9995BADGEH2O 2400 ng/mL y = 2.42104x + 8.29104 0.9996BADGEHCl 2400 ng/mL y = 6.59103x + 2.04104 0.9989BADGE2H2O 4400 ng/mL y = 3.28104x + 1.43105 0.9975BADGE2HCl 8400 ng/mL y = 597.33x + 1.66103 0.9990BADGEH2OHCl 2400 ng/mL y = 1.09104x + 2.69104 0.9997BFDGE 4250 ng/mL y = 1.36104x + 3.07104 0.9985BFDGEE2H2O 2250 ng/mL y = 1.79104x + 4.06104 0.9997BFDGE2HCl 4250 ng/mL y = 1.32104x + 2.82104 0.9989BPA 8250 ng/mL y = 183.49x + 1690 0.9988BPF 8250 ng/mL y = 71.405x + 288.83 0.998538表 6 水果制品样品基质中 11 种双酚类物质的线性关系双酚类化合物 检测范围 线性方程 线性相关系数（ R）BADGE 2400 ng/mL y =2.92104x + 9.32104 0.9994BADGEH2O 2400 ng/mL y=1.57104x + 1.71104 0.9995BADGEHCl 2400 ng/mL y=7.61103x + 4.04104 0.9987BADGE2H2O 4400 ng/mL y=0.53104x + 1.26105 0.9985BADGE2HCl 8400 ng/mL y=8.72103x + 3.65104 0.9994BADGEH2OHCl 2400 ng/mL y=6.56103x + 8.49104 0.9991BFDGE 4250 ng/mL y=9.65103x + 2.71104 0.9995BFDGE2H2O 2250 ng/mL y=9.81103x + 1.15104 0.9987BFDGE2HCl 4250 ng/mL y=8.49103x + 1.03104 0.9991BPA 8250 ng/mL y=497 x+ 451 0.9989BPF 10250 ng/mL y=9.8x + 126 0.9992表 7 蔬菜制品样品基质中 11 种双酚类物质的线性关系双酚类化合物 检测范围 线性方程 线性相关系数（ R）BADGE 2400 ng/mL y = 1.1710 4x + 7.6110 4 0.9985BADGEH2O 2400 ng/mL y=7.2710 3x + 8.0310 3 0.9996BADGEHCl 2400 ng/mL y = 2.2410 3x 2.3210 4 0.9989BADGE2H2