食品中酸性橙II的测定 编制说明VIP

1食品安全地方标准 食品中酸性橙的测定编制说明一、标准起草的基本情况1.任务来源、起草单位、起草人根据原省卫生厅关于印发 2013 年江苏省食品安全地方标准制（修）订项目计划的通知（苏卫办监督201310 号）的要求，食品安全地方标准 食品中酸性橙的测定被列入 2013 年江苏省食品安全地方标准制（修）订项目，项目编号为 JSSPDB 2013-006，江苏省疾病预防控制中心作为项目承担单位负责标准起草工作。项目主要起草人有：刘华良、阮丽萍、马永建等，其中刘华良负责课题申报、征求意见稿与编制说明的撰写，刘华良、阮丽萍负责实验室工作，马永建负责质量控制。2.简要起草过程2013 年 7 月，申报立项江苏省食品安全地方标准项目，签署协议。2013 年下半年，查阅资料，采购样品、标准品、色谱柱、试剂耗材，开始实验。2014 年上半年，完善实验路线，并起草征求意见稿与编制说明。2014 年 6 月第一次召开由监管部门、行业协会、企业、高等院校、研究院所等 12 名代表参加的研讨会,讨论并修改。2014 年下半年，根据第一次研讨会意见，完善起草工作，并组织 3 家同行实验室进行验证工作。2014 年 12 月 18 日，召开第二次专家研讨会,讨论并修改。2015 年上半年，形成标准公开征求意见稿。二、标准的主要技术内容及依据酸性橙，又名酸性金黄、橙黄、2-萘酚偶氮对苯磺酸钠，主要用于蚕丝，羊毛织品的染色，属于常用酸性水溶液性染料，有强致癌性，禁止作为食品添加剂使用。由于酸性橙具有色泽鲜艳，着色稳定，价廉等特点，不法商2贩将其用于食品生产与加工，严重危害了消费者身体健康。1、范围本标准规定了食品中酸性橙II的液相色谱法测定方法、液相色谱-质谱/质谱定性确证方法。前者用于定量测定，后者用于对阳性样品的确认。本标准适用于红壳瓜子、鲍汁、辣椒面、豆瓣酱、黄鱼和腌卤肉制品等6种食品基质。检测的食品种类对应原卫生部2011年4月19日发布食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单（第15批汇总）。本标准液相色谱法的定量限为2 mg/kg。液相色谱检测时，标准曲线最低点溶液浓度是0.2mg/L，也就是仪器方法最低检出浓度为0.2mg/L，考虑到样品在前处理过程中稀释了10倍，则本方法对样品的定量限为2 mg/kg，在方法学实验研究过程中，证明定量限可以达到为2 mg/kg。2、原理试样用水提取，经甲醇沉淀蛋白质，离心，高效液相色谱法测定，外标法定量。阳性结果用液相色谱-质谱/质谱定性确证。GB/T 5009.35-2003食品中合成着色剂的测定是色素检测方面使用最广的方法。本标准征求意见稿的起草，其原理充分借鉴了GB/T 5009.35-2003。此外，也借鉴了原卫生部食品整治办发布 200929号通知关于印发全国打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治抽检工作指导原则和方案的通知（以下简称专项整治）推荐的辣椒粉中酸性橙的的高液相色谱法及高液相色谱-串联质谱法。3、试剂与材料采用实验室常用的试剂与材料。4、仪器与设备采用了液相色谱仪，大部分县市级理化实验室都具有。液相色谱-质谱/质谱仪，在我省13个地市级疾控中心基本都已经具备。县市级检测机构检测有阳性时，可以就近送到地市级疾控进行确认。5、试样制备包括试样制备与试样提取2部分。液体或粉末状样品如鲍汁和辣椒面可直接进行试样提取。固体及半固体样3品，如黄鱼、腌卤肉制品、红壳瓜子和辣椒酱等经过匀浆或粉碎化后进行试样提取。准确称取2.5 g（精确0.001 g）均质样品于50 mL具塞比色管中，加入5 mL水， 涡旋1min ，加入甲醇15 mL，超声提取10 min，再振荡提取10 min，加入甲醇至25 mL刻度线，混匀。取2 mL试液以不低于4000 r/min离心10 min，上清液用 0.45 m 滤膜过滤，供液相色谱测定。关于试样制备，无论哪种样品，均需要把样品进行粉碎，否则提取效率不高。以染色红壳瓜子为例，不粉碎直接提取时，提取效率在48-62%，粉碎后提取则达到93-105%。这是因为染色后，色素渗入瓜子皮纤维内部及瓜子仁内部，难以从表皮提取出来。关于提取的固液比，准确称取2.5 g，最后定容到25ml，固液比为1:10，符合一般的固液提取比例。关于试样提取溶剂的选择方面，专项整治采用了75%甲醇水溶液直接提取法用于提取辣椒粉中酸性橙。然而，实验过程中，发现该方法并不完全适合其他食品基质。以鲍鱼汁为例，比较了一次性加入75%甲醇溶液，与先加入5ml水，涡旋后，再加入15ml甲醇。结果发现，后者提取效果更好。这是由于样品呈粘稠液体状，蛋白质含量高，直接用甲醇溶液提取时，蛋白质迅速沉淀，一部分待测物被共沉淀使得回收率不高。而先加入5ml水，则可以使粘稠样品适当稀释，然后再加入甲醇，这样待测物共沉淀基本得到避免。6、液相色谱条件色谱柱采用了GB/T 5009.35-2003食品中合成着色剂的测定中的常规色谱柱。流动相也与GB/T 5009.35-2003一样，甲醇与乙酸铵溶液，梯度洗脱。进样量采用常用的20微升。经UV扫描，酸性橙在485 nm波长有最大吸收。故检测波长定为485 nm。标准溶液系列浓度点为0.2、0.5、1.0、5.0、10.0 g/ml，该范围覆盖了实际样品中违法添加酸性橙的含量。7、允许偏差4当样品中待测物含量是1mg/kg、10mg/kg时，GBT 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测对实验室内变异系数的要求分别是小于10%、小于7.5%。本标准文本中酸性橙的定量限是2mg/kg，依据GBT 27404-2008，本标准表述为：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8、质谱确证对阳性结果进行质谱确证是符合国际惯例的做法。9、同行实验室验证及其他江苏省食品药品监督检验研究院、淮安市疾病预防控制中心、苏州市疾病预防控制中心3家单位对本方法进行了方法学验证。验证结果表明，依据本征求意见稿重复试验，各项技术指标均达到GBT 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测的要求。三、国内外相关标准比较研究材料原卫生部食品整治办发布 200929号通知关于印发全国打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治抽检工作指导原则和方案的通知推荐了辣椒粉中酸性橙的的高液