（有机化学专业论文）高稳定性液相色谱填料的制备、应用与性能评价.pdf

本文主要包括以下几个部分 摘要 1 首次采用乳化剂乳化单体的方法，并结合一步溶胀聚合法制各出了单分 敞、1 ：川牲径、，1 i m 扎径、爿；同交联度的微米级的聚苯乙烯微球。对制备条件 避行了深入的究， | 索条简便动行的俞成途径。并对该聚合物微球进行 了色晰评价，舐叨我们合成的聚苯乙烯微球有很好的色谱性能，尤其适合于碱 性物质、蛋白质和一些药物的分离。 2 茸次采用一步溶胀聚合的方法直接合成了带有c 8 功能基的聚苯乙烯填 料，采用扫描电镜、红外光谱、固体核磁和色谱方法进行了结构表征。用该方 法合成的填料有很好的色谱性能，探讨了c 8 含量和交联度对其色谱性能的影 响，并与未衍生的聚苯乙烯填料进行了比较。 3 制备了柱效很高的附聚型阴离子交换树脂，探讨了制备条件、交换容量 以及流动相的组成对色谱保尉的影响。用该树脂分离了七种常见的无机阴离子 和有机酸，均达到满意的分离。 4 利用线性溶剂化能相关( l s e r s ) 对自制的十八碳烯一聚丁二烯一二氯 化锆固定相的保留行为进行了评价，建立了化合物在该凰定相上的保留预示系 统，预示了化合物在相应色谱条件下的保留行为，预示结果与实验结果基本一 致。 关键词：高效液相色谱，离子色谱，一步溶胀聚合，单分散，聚苯乙烯( p s d v b ) ， c 8 键合聚苯乙烯( c 8 一p s d v b ) ，附聚型阴离子柱填料，线性溶 剂化能相关( l s e r 5 ) 十八碳烯聚丁二烯二氧化锆( c 1 8 - p d b - z r 0 2 ) 。 a b s t r a c t s e v e r a ls e c t i o n sa r ei n c l u d e di nt h i sd i s s e r t a t i o n a sf o l l o w s 1 m o n o d i s p e r s ep o l y ( s t y r e n e - d i v i n y l b e n z e n e ) ( p s - d v b ) m i c r o b e a d sw i t h d i f r e r e n td i a m e t e r d i 丘b r e n tp o r ea n dd i 腩r e n tc r o s s l i n kd e g r e ew e r ep r e p a r e dv 池a s i n g l e - s t e ps w e l l i n ga n dp o l y m 甜z a t i o nm e t h o d t h em o n o m e rw a se m u l s m e db y m es u r f 她t a n ti n s t e a do fu l t r a s o n i cd i s m p t e nw es t u d i e dt h ep r e p a r a t i o nc o n d i t i o n si n d e t a i l ，a n df o u n dae a s yr o u t e t h ep a c “n gp r e p a r e db yt h i sm e m o d h a dv e r yg o o d c h r o m a t o g r a p h i cp r o p e r t i e s i t ss u i t a b l e f o rt h es e p 啪t i o no fb a s i cc o m p o u n d s ， d r o t e i n sa n dm e d i c i n e s 2 m o n o d i s p e r s eo c t y lb o n d e dp o l y ( s t y r e n e - d i v i n y l b e n z e n e ) ( c b p s - d v b ) b e a d sw e r ep r e p a r e dv f 日as i n g l e - s t e ps w e n i n ga n dp o l y m e r i z a t i o nm e 血o d f o u r i e r t r a n s i 、o r r ni n f r a r e d ，1 3 cc p m a ss o l i ds t a t en m r a n dc h r o m a t o g r a p h i ce v a l u a t i o n w e r eu s e dt oc o n 6 n nt h er e a c t i o nb e t 、v c e nt h eo c t e n ea n dd i v i n y i b e n z e n e t h i s p a c k i n gh 船g o o dc h r o m a t o g r a p h i cp r o p e r t i e s t h ei n n u e n c eo fo c t y la n d c r o s s l i “k d e 掣e e o nt h i s p a c k i n gw a si n v e s l i g a t e d w e a l s oc o m p a r e d 血i sp a c k i n gw i t h u n d e r i v a t i z e dp o l y ( s t y r e n e d i v i n y l b e n z e n e ) 3 a g m o m e r a t e da n i o ne x c h a n g e rw i 血h i 幽p e r f o r m a n c ew a sp r e p a r e d ，w e i n v e s t i g a t e d 也ei n n u e n c eo fp r e p 撕n gc o n d i t i o n s ，e x c h a i l g ec a p a c i t ya n d t h em o b i i e p h a s eo nt h ec h r o m a t o g r 印h i cp r o p e n i e s s e v e ni n o 唱a n i ca 1 1 i o n sa i l ds o m eo 唱a n i c a c i d sw e r es e p a r a t e ds u c c e s s f u l l y 4 t h er e t e n t i o nb e h a v i o r so fo c t a d e c e n e p o l y b u t a d i e n e c o a t e d z i r c o n i a ( c1 8 p b d z r 0 2 ) w e r es t u d i e db ym e a n so fl i r l e a rs o l v a t i o ne n e 唱yr e l a t i o n s h i p s ( l s e r s ) b a s e do nt h el s e r se q u a t i o ne s t a b l i s h e do nt h i ss t a t i o n a r yp h a s e ，t h e r e t e n l j o nv a 】u e so fc o m p o u n d sw e r ep r e d i c t e d g 0 0 d a g r e e m e n tb e t w e e nt h e p r e d i c c e dv a l u e sa n de x p e “m e n t a lo n e sw e r eo b t a i n e d 眉秒，d ，出?h i 曲p e r f o m a n c el i q u i dc 1 1 r o m 砒。伊印h y( h p l c ) ， i o n c h r o m a t o g r a p h y( i c ) ，s i n g l e - s t e ps w e l l i n g a n d p o l y m e r i z a t i o n ，m o n o d i s p e r s e ， p o i y s t y r e n e d i v i n y l b e n z e n e( p s d v b ) ，o c t y l b o n e dp o l y s t y r e n e d i v i n y l b e n z e n e ( c 8 - p s d v b ) ，a g g l o m e r a t e da 1 1 i o ne x c h a f l g e r ，l i n e a rs a l v 砒i o ne n e r g yr e l a t i o n s h i p s ( l s e r s ) ，o c t a d e c e n e p o i y b u t a d i e n e c o a t e dz i r c o n i a ( c 1 8 - p b d z r 0 2 ) 南开人学博i ：论义第一啦缔论 1 月u 百 第一章绪论 高效液相色谱法( h p l c ) 是于七十年代在经典液相柱色谱和气相色谱的 基础上发展起来的一种高效、快速的分离分析新技术。它适用于分析沸点高、 分子量大、热稳定性差的物质和生物活性物质。这种技术不仅能进行混合物的 分离和制备，还可同时提供定性和定量分析1 1 1 2 j 。现在高效液相色谱法已在石油 化工、生物化学、农药、制药、食品工业及环境等各个领域得至4 广泛的应用， 可以说8 0 的有机化合物是可用h p l c 法进行分离和分析的j 。 色谱柱和色谱填料被称作高效液相色谱仪的心脏，它对流动相组成、分离 机理、分离度、柱效，甚至检测方法都有决定作用，因此研究新型柱填料并揭 示其分离机制始终是h p l c 领域的研究热点。填料同时又是一种量大而广的消 耗品，国产填料在性能上比国外发达国家有较大的差距，目前我国所使用的柱 填料大部分依赖进口，高性能的柱填料更是1 0 0 的舶来品。研究新型商效液相 色谱柱填料不仅推动了色谱技术的发展填补国内空白，还可为我国新色谱填料 商品化打下良好的基础。 当前，高效液相色谱中使用的固定相主要为硅胶基质的嗣定相和聚合物基质 的固定相“1 ，其中硅胶基质的固定相占7 5 ，聚合物基质的固定相占2 0 ，其他 基质的固定相占5 ”1 。 硅胶基质固定相有着重要的地位。这是因为硅胶具有机械强度高，比表面 积大，孔结构容易控制以及优良的化学表面改性特征1 6 】使之成为应用最为广泛 的h p l c 填料。但是硅胶本身的化学稳定性差，硅胶基质填料一般只能在p h2 8 的流动相条件下使用，当p h 8 时二氧化硅易受碱性物质攻击而溶解【7 8 】， 而当d h 电时，连接在硅胶上的硅氧烷链发生水解，导致改性剂离去，失去分 离能力“。而且随着温度升高，这种二氧化硅溶解和表面改性剂的离去会加剧， 导致保留时间和峰形的改变，同时色谱柱的选择性降低，甚至使柱子完全失效。 南开大学博士论文第一市结论 硅胶改性后其表面残存的硅羟基具有吸附活性而引起峰形拖尾，对碱性化合物 不可逆吸附等缺陷使其应用范围受到很大影响。为增加其稳定性采取了一系列 措施，如使用前置饱和柱，酸碱预处理旧】，及在硅胶表面覆盖对碱稳定的 余属氧化物【1 5 - 2 0 】和聚合物等。但是这些办法只能在某种程度上有所改善，并不 能从根本上硅胶的性质，包括它的缺陷。为此人们不断探索新材料作为色谱填 料的基质，其中包括氧化钛、氧化锆及聚苯乙烯等，它们均具有优良的化学稳 定性，可以做为硅胶基质填料的补充，也就形成了上述三类液相色谱填料各占 一定份额的格局。 2 锆胶和钛胶基质液相色谱填料的研究现状 二氧化锆和二氧化钛作为h p l c 填料的研究最近颇为活跃，研究报告和专 利不胜枚举f 2 卜60 1 。它们f 成为新型而又很有应用潜质的液相色谱填料。它们与 硅胶相比具有以下特点： ( 1 ) 机械强度高： ( 2 ) 化学稳定性高，可在p hl 一1 4 范围内使用；( 3 ) 热稳定性高；( 4 ) 粒径孔径可控，适合于生物工程产 品的分离；( 5 ) 在正相色谱中，出于对氨基等碱性基团无吸附而具有较好的峰 对称性。 二氧化锆经表面改性后可制得反相和离子色谱填料。改性方法除化学键合 外，聚合物包覆锆胶固定相的研制己引起重视。主要制备方法有： ( 1 ) 利用物理吸附法，使有机物单体吸附在载体的表面，然后通过聚合反 应使单体交联形成聚合物层；( 2 ) 健合聚合包覆法：( 3 ) 聚合物交联包 覆于载体表面形成聚合物薄膜；( 4 ) 聚合键合包覆法。 其中聚合物交联包覆法使将聚合物物理吸附( 未发生任何化学反应) 到载 体表面，然后热引发聚台。该法可用于任何支持物表面的改性，而且可以重复 包覆。虽然此种方法很难做到在支持物表面均匀包覆，但这种改性方法操作简 单，改性柱填料相对稳定，色谱性能良好。本文第五章就是评价了用这种方法 制备的十八碳烯一聚丁二烯一二氧化锆固定相。 南开人学博= | ：论文 第一市绪论 3 有机聚合物基质液相色谱填料的研究现状 按单体划分，有机聚合物填料可分为聚苯乙烯、聚丙烯酸酯和聚乙烯醇三 类。有机聚合物填料有着非常悠久的历史，第一台现代液相色谱仪问世时使用 的就是聚苯乙烯填料【6 2 】。尽管现在硅胶在色谱性能上有很大的优势，但它始终 不能完全代替有机聚合物填料，这是因为聚合物填料具有以下特征1 6 i j ：( 1 ) 化 学稳定性好，可以在全程p h 值范围内使用，刈j - j “泛选择各剥缓冲液淋沈体系 十分有利。( 2 ) 对被分离样品有较强的负载能力，有较高的色谱容量，甚至可 比硅胶键合相离子交换剂高一个数量级。这对于不同规模的制备色谱来说尤为 适宜。( 3 ) 它们不宜产生不可逆的非特异吸附作用，特别对于生物大分子的分 离有较好的相容性，能有效地保持样品的生物活性。( 4 ) 有较长柱寿命和较好 的再生能力。( 5 ) 容易进行化学改性，所得到的填料普遍具有良好的色谱选择 性。( 6 ) 适直分析碱性化合物，不会产生拖尾的现象，而且柱效很高。这对制 药工业非常有利，因为目前8 0 的药物都带有碱性基团【6 ”。这些优点决定了有 机高分子类型填料具有广阔的发展前景。尤其足对于分离纯化生化物质和药物 所表现出的良好性能，已越来越受到研究者和应用者的重视。 在有机聚合物填料中应用最为广泛的柱填料为聚苯乙烯基质的填料。这是 因为聚苯乙烯微球具有良好的刚性，小而均匀的粒度和适宜的孔径大小与分椎， 所以适于用作高效液相色谱的填料f “。6 。 但是聚苯乙烯基质的填料也有一些缺点：( 1 ) 机械强度不够，这会导致在 改变流动相时会使聚合物微粒压缩、溶胀或收缩，因此导致色谱柱效变差一 个可能的解决办法是增加交联剂的含量【6 5 1 ，增加了聚合物基质的刚性，并制 备单分散的聚物基质，因为这样的微粒可以更好地填充在色谱柱中形成更稳定 的柱床，改善了柱效；( 2 ) 常规的聚合物反相填料的传质速度慢，柱效降低， 对某些物质有拖尾现象。这与未衍尘聚合物的轨道的广泛网络有关，因此， 有n 轨道的分析物质能和反相聚合物基质相互作用，这就引入了竞争相互作用， 减损了与反相色谱柱相关连的分配机理，导致长的保留时间，尤其是对含有芳 南开大学博i 论文第一常绪论 香结构的极性化合物。可以刈该丛质进行改性，比如在聚合物丛质上键合tc 8 、 c 1 8 7 7 】等长烷基链的功能基，该功能基的引入屏澈了溶质0 商密度”轨道的接 触，使“轨道深深地埋藏于基质内，结果极大地提高了容量因子。 自2 0 世纪8 0 年代中期以来，对于有机高分子类型高柱效、高分辨率、高 穿透性填料的研究，从物理结构角度来看，最突出的进展表现在以下三个方面： ( 1 ) 颗粒单分散的填料：( 2 ) 具有贯穿性超大孔结构的填料【7 8 引1 ，这类填料 对生物大分子的色谱传质非常有利，高柱效可在2 0 0 6 0 0 0 c m 】线速度范围内基 本保持不变，而且柱压也很低，所以非常适于高效分离： ( 3 ) 小颗粒的非多孔 填料。颗粒小、刚性好的非多孔型填料，因其没有内孔扩散并基本上避免了微 孔吸附等问题，所以柱效率、分辨率、回收率很高并能很好保持样品的生物活 性，是这类产品最显著的特征，用于快速高效分析检测以及微盘样品的制备分 离，都是十分有利的。 有机的球形聚合物填料如聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯等，几乎都是用乳液 聚合、悬浮聚合和分散聚合等方法制备的【8 2 。8 4 1 。他们既有相似之处又备有不同 ( 如表1 一l 所示) 。 表1 1三种聚合反应的比较 乳液聚台悬浮聚合分散聚合 单体小油滴，分散在介质中小油滴，分散在介质中分子溶予介质中 引发剂人多数在介质中 以分子形式溶在油滴中溶下单体和介质 稳定剂有些反应加 必须加必须加 袭面活性剂需要加不需要不需要 反应起始状态分散相两相均相 悬浮聚合法最早报道于1 9 0 1 年8 6 1 ，这种方法是利用强有力的机械搅拌，使 单体以微小的液珠状分散在介质中进行聚合反应，引发剂为油溶性的，溶于单 体中。用这种技术制备的球形的直径可以从1 5 2 0 “m 到几个毫米。悬浮聚合法 4 南开大学博士论文 第章结论 主要有以下三个优点：( i ) 由于大量水的存在使聚合热易放出，聚合温度比较容 易控制；( 2 ) 聚合产物分子量比较高，交联度及多孔性容易控制；( 3 ) 后处理简单， 生产成本较低。但其缺点也比较明显：( 1 ) 一些悬浮试剂不能从所得微球中完 全出去；( 2 ) 即使严格控制搅拌形式和速度，得到的液珠仍有一定范围的大小 分布，因此最终制得的树脂球的粒径分布相当宽。 b a r r e t t 曾对分散聚合进行了较为全面的介绍 8 7 】。这种方法以溶剂为介质， 将单体和引发剂均溶于溶剂中生成的聚合物有的在溶刹中溶解，有的不溶解， 前者为均相聚合，后者为沉淀聚合。分散聚合成功的关键在于溶剂系统和空1 1 日j 稳定剂的选择。这种聚合的优点是：( a ) 大量溶剂的存在使聚合反应易于传递， 反应温度易于控制，分予量分靠指数较小；( b ) 可以通过调节单体浓度来调节反 应速度和产物分子量；( c ) 可通过选择适当的溶剂调节聚合物分子最；( d ) 体系 中聚合物浓度低，不易进行链自由基向大分子的转移而形成支化或交联产物。这 种方法的缺点是聚合物小球交联度低，表面无孔或仅有少量微孔，不能被直接 利用。 乳液聚合法是利用表面活性剂将单体分散到介质中，根据h a r k i n s 的理论， 单体分配于三个不同的相中：少量溶于水相，一部分成乳液状的液球，另一部分 则溶于表面活性剂的胶团之中。表面活性物也是如此分配的。水溶性引发剂在 水相中引发反应，产生的单体自由基扩散入胶团而发生聚合反应。液珠的功用只 是单体的储蓄器，胶团中的单体因聚合而减少，液珠即将其中的单体输入胶团以 补充之。乳液聚合法的优点是：( a ) 聚合速率快，产物分子量高：( b ) 聚合反应温度 低，传热容易：( c ) 聚合体系粘度低。但此法也有一些不足：( a ) 所得的聚仑物颗粒 直径过小，只有约0 0 5 0 1 5 m ：( b ) 操作步骤多，费用高：( c ) 产物中留有乳化剂 且难以除净。虽然带电的聚合物链尾端基团对乳液稳定性的影响发现后。1 ，许多 文献报道了无乳化剂的乳液聚合物反应i 韶母”，但对于制备大于1 微米的单分散微 球仍比较困难。1 9 7 9 年，u g e l s t a d 等人提出了活化多步溶胀法使单分散小粒径 聚合物颗粒的制备成为可能。其理论基础是9 2 j ：使用一种能使种子颗粒的单体 溶胀能力大幅度提高的水不溶性低分子量溶剂( 溶胀活化剂) ，通过溶胀活化 南开大学搏i ：论文 第一章结论 作用使大小均匀的聚合物种子颗粒溶胀活化。其一般步骤为：将用适当方法合 成的原始种子颗粒悬浮在另一种介质中，加入一种乳化后的低分子量化合物 1 二 为溶胀剂，加入一种低沸点、水溶性非质子溶剂作为水相和油相的桥梁，使溶 胀剂固定在种子颗粒后，加入单体，在聚合反应完成卮可以得到5 0 m 左右的 颗粒。虽然多步溶胀法是制备微米级颗粒的良好方法并被应用于制备聚合物填 料【9 3 - 9 ，且性能优于利用传统的悬浮聚合法制备的填料【9 3 j ，但也有一些不足： ( 1 ) 操作步骤繁琐且反应条件难控制( 2 ) 原始种子的缺陷如颗粒大小的不均 匀性及形状不规则性等都将放大( 3 ) 对于较小的种子，为得到较大的自球需长 时间反应，甚至多次溶胀，这使得副反应的发生增大，最终产品的粒径分佰宽。 h o s o y a 等人对多步溶胀法进行了改进，提出了两步溶胀聚合法，制备了单分散 5 6 h m 和1 0 m 的聚苯乙烯微球p 7 ，9 引，并进一步研究了控制粒径和i l 度的参数 1 9 9 1 0 0 】。1 9 9 5 年o g i n o 等人对u g e l s t a d 的方法又进行了改进 0 2 1 ，采用一步溶 胀法合成了单分散，粒径为4 5 7 5 h m 的多孔聚合物颗粒，虽具有良好的色谱 性能【1 0 3 0 4 1 。 本文在总结本实验室制备树脂微球的工作基础上【1 0 5 圳7 1 ，参考o g i n o 等人的 工作，使用乳化剂乳化单体的方法代替传统的超声乳化方法，用一步溶胀聚合 法合成出单分散的，不同交联度的，不同孔径的聚苯乙烯基质。这种方法操作 简便，后处理简单易行。并对该基质进行了衍生化。用该填料进行色谱测试， 得到了很好的分离效果。 4 本文的主要贡献 在国际上首次采用表面活性剂乳化单体，并用一步溶胀聚合的方法制备了 刚性很好的单分散、高交联的聚苯乙烯微球。实验结果表明采用乳化剂乳化的 方法制出的微球要比现在通用的采用超声乳化的方法制备的微球的刚性要好， 而且在溶胀和聚合的过程中无须加入分散剂，简化了后处理的手续。通过控制 致孔剂和溶胀的倍数，可以制备出高交联的无孔、小孔和大孔的聚苯乙烯微球。 6 南开人学博l 论立第争绪沦 并对其进行了反相色谱的评价，色谱性能良好，尤其适合分离碱性化俞物、乍 物样品以及药物。 在国际上首次采用一步溶胀聚合的方法一步合成了带有c 8 官能团的聚苯 乙烯填料。用该方法制备的填料有很好的色谱性能。探讨了c 8 的含量以及交联 度对色谱性能的影响，并与未衍生的聚苯乙烯填料进行了比较。 首次用线性相关溶剂化能( l s e r s ) 对自制的十八碳烯一聚丁二烯一二氧 化锆( c 1 8 一p b d z r 0 2 ) 固定相的保留行为进行了评价，提出其保留桃理主要 是分配机理。同时，通过主因子分析法确立了该固定相的l s e r s 方程，建立了 化合物保留预示体系。 合成了柱效和选择性很好的表面附聚的阴离子型交换填料。详细探讨了制 备条件对色谱性能的影响，本文为该类型的填料能够国产化进行了有益的探索。 注：本人刚开始进实验室时是做有芙锆胶的研究r 作，但是由丁在学期间被所在单位 派去澳大利砸学习敬语教学，冈此将这部分。1 ：作交给了其他人去做。同国后，主要从事聚 苯乙烯基质同定相的研究。冈此在我的论文中既有锆胶的内容，还有聚苯乙烯的内容。 5 参考文献 1 c f p o o l ea n ds k p o o l e ，c 佛厂d 棚口向g m p 砂7 0 却，e l s e v i e r ，a m s t e r d a m 1 9 9 2 2 j n a m r o c k ia n db b u s z e w s k i ，j r o 丹2 口 d g ，1 9 8 8 ，4 4 9 ：l 3 r e m a j o r s ，上c l g e1 9 9 6 ，1 5 8 ：5 1 3 4 u t r n d i n g e r ，g m 谢l e ra i l dk k u n g e r ，o 埘口f d 矿，19 9 0 ，5 3 5 ：l1 1 5 ， j n ga n dd f r o o m ，c a 门日a 鼬门c 张口m 耙口，沌w s ，1 9 9 8 ，9 ：2 4 6 j j p e s e k ，m t m a t y s k aa 1 1 de j w i l l i a m s e n ，jc 矗r o m 口f o g r ，19 9 7 ，7 8 0 ：2l9 7 k k u n g e r ，p o r o u ss i l i c a ( j o u m a lo fc h r o m a t o g r a p h yl i b r a r y ，v 0 1 16 ) e l s e v i e r 。a m s t e r d a m ，19 9 7 8 r w i l e r ，已硎括竹0 ，踟c 盘，w i l e y i n t e r s c i e n c e ，n e wy o r k ，1 9 7 9 南开大学博士论文第一章绪论 9 j j g 1 a j c h ，j j k i r k l a l l da n dj k 6 i l e r ，jc 协o 口幻矿，1 9 8 7 ，3 8 4 ：8 1 1 0 k k u n g e r ，n b e c k e r a n dp r o u m e l i o t i s ，c r 。肌d ，o g r ，1 9 7 6 ，1 2 5 ：1 15 1 1 c h 0 r v a m ，w m e l a n d e r a n d i m o l n a r ，爿行口f c 协已川，1 9 7 7 ，4 9 ：1 4 2 12 j g a t w o o d ，g j s c h i m i d ta n dw s l a v i n ，j ：( m ，d 埘d ，o g r ，19 7 9 ，17 ：10 9 1 3 j k 6 l l e ra 1 1 dj j k i r k l a l l d ，一c 向阳m 口f o g ，1 9 8 7 ，3 8 5 ：1 2 5 1 4 h ，e n g e l h a r d ta n dp o r t h ，j 由c 矗r o m 以f o g r ，1 9 8 7 ，1 0 ：1 9 9 9 1 5 p p w i c k r 啪a n a y a k e ，a c h a t ta n dw a a u e ，c 臼 j = c 忱川，1 9 8 l ，5 9 ：1 0 4 5 1 6 r w s t o u ta n dj j d e s t c f a n o ，j ( m ，o m 口，o g r ，1 9 8 5 ，3 2 6 ：6 3 1 7 w h t o m ba n dh h w e e t a l l ，u sp a t ，3 7 8 3 1 0 1 ，1 9 7 4 1 8 r w s t o u t ，u sp a t ，4 6 0 0 6 4 6 ，1 9 8 6 1 9 r w s t o u t ，s i s i v a l ( o f f ，r d r i c k e r ，h c p a l m e f ，m a j a c k s o ma n dt j o d i o m e ，c 协r o m 口f o 宝丁，1 9 8 6 ，3 5 2 ：3 8 l 2 0 a b a r l a t ta n dp b m a c e d o ，u sp a t ，4 6 4 8 9 7 5 ，1 9 8 7 2 1 m k a w a l l a r a ，hn a k a m u r aa n dt k a k a j i m a ，jc ，o m 口，d ，1 9 9 0 ，5 1 5 ：1 4 9 2 2 k t a n ia n dy s u z u k i ，c 协，d ，行日，0 9 唧厅f 口，1 9 9 4 ，3 8 ：2 9 1 2 3 z t j i a n ga n dy m z u o ，爿一以c 已肌，2 0 0 1 ，7 3 ：6 8 6 2 4 姜子涛，南开大学博士论文，2 0 0 0 2 5 a k u r g 觚o v ，u t m d i n g e r ，t i s a e u aa n dk k u n g e r ，c 馋r d 肌口幻g m 妒向f 吼l9 9 6 4 2 ：2 1 7 2 6 m g r n n ，a k u r g a n o v ，s s c h a c h t 姐dk k u n g e r ，j ：c 协，d 卅耐0 _ 扩彳，l9 9 6 ， 7 4 0 ：1 2 7 j w i n k l e ra n ds m a r m 6 ，c 向r d 朋d f p g r 爿，2 0 0 0 ，8 8 8 ：5 1 2 8 k t a n ia n dy s u z u k i ，一o ，o 州口幻g ，爿，1 9 9 6 ，7 2 2 ：1 2 9 2 9 k t a n ia n dy s u z u k i ，j ：由c 矗r d m r “7 0 f a 胛d ，1 9 9 6 ，1 9 ：3 0 3 7 3 0 a y o s h i d aa f l dk t a l ( a h a s h i ，c p m f f 印f 口，1 9 9 4 ，1 5 ：1 8 3 1 k m u r a y a m aa 工1 dh n a k 啪u r a ， 矗c 加c 向p m 一，1 9 9 4 ，4 9 ：3 6 2 8 翌堑查兰竖主笙塞 塑二主堑堡 3 2 j j p e s e k ，m t m a t y s k aa n dj r a m a k r i s l l n a n ，c 向r o 删口，o g r 印矗胁，1 9 9 7 ，4 4 ： 5 3 8 3 3 a e 1 1 w a n g e r ，m t m a t y s k a ，k a 1 b e na n dj j p e s e k ，c 伽d 肌日，d 矿印向f “，19 9 9 4 9 ：4 2 4 3 4 m z a h a r e s c u ，t c s e r h 矗t ia i l de f o r g a c s ，jl 睁c 向r o m r p fn c 砌o ，19 9 7 ， 2 0 ：2 9 9 7 3 5 m p r i g n e y ，e f f u n k e n b u s ha n dp w c a r r ，r o m 盘f o ，1 9 9 0 ，4 9 9 ：2 9 1 3 6 l s u n ，a v m c c o n n i c ka n dp w c a r r ，c r o 川口f d ：g r ，1 9 9 4 ，6 5 8 ：4 6 5 3 7 a b l a c k w e l la n dp w c a 盯，j ：c r d ， 口f o 眇，1 9 9 l ，5 4 9 ：4 3 3 8 a b l a c k w e l la n dp w c a r r ，jc r d m d ，叼r ，l9 9 1 ，5 4 9 ：5 9 3 9 j l ia t l dp w c a r r ，4 脚，c 抛州，1 9 9 6 ，6 8 ：2 8 5 7 4 0 j l ia n dp w c a r r ，彳玎口fc 而窖肌，1 9 9 7 ，6 9 ：8 3 7 4 1 j l ia n d p w ，c a r r ，4 以口tc 矗口卅，1 9 9 7 ，6 9 ：2 1 9 3 4 2 j l i ，y h ua n dp w c a r r ，一n 口tc 胁埘，1 9 9 7 ，6 9 ：3 8 8 4 4 3 j z h a oa n dp w c a r r ，爿n 口f c 协p m ，1 9 9 9 ，7 1 ：5 2 1 7 4 4 ，j z h a oa n d p ，w ，c 矾爿砒p 胤，2 0 0 0 ，7 2 ：3 0 2 4 5 j z h a 0a n d p w c a 盯，爿疗口 c 竹p 小，1 9 9 8 ，7 0 ：3 6 1 9 4 6 j z h a oa n d p w c a 盯，爿行口fc 话e 聊，1 9 9 9 ，7 1 ：2 6 2 3 4 7 p + t j a c k s o n ，m 。r s c u r e ，t p w e b e ra 1 1 dp w c a r r ，一门以p 巩，1 9 9 7 ，6 9 ： 4 1 6 4 8 t p w e b e r ，p t j a c k s o na n dp w c a r r ，4 n d tc 向e ，1 9 9 5 ，6 7 ：3 0 4 2 4 9 b c ，t r 鲫坊c 】，m a + h j 】脚y e ra n dp w c a 门巳爿刀甜c 帆，2 0 0 j ，7 3 ：3 3 2 3 5 0 y a n g ，x ；d a i ，j ；c a 玎，p w 爿俄矗c 向口脚，2 0 0 3 ，7 5 ：3 1 5 3 5 1 a s u b r a i t l a n i a n ，p w c a r ra n dc v + m c n e f f ，c 协。棚目蚴歹爿，2 0 0 0 ，8 9 0 ： 1 5 5 2 y x i a n g ，；b y a n ，c v m c n e f f p w c a r r ，a n d m l l e e ， c 锄，口珊口，p g ，一，2 0 0 3 ，10 0 2 ：7 1 9 塑堑查兰堡! = 鎏苎 笙二翌堕堡 5 3 c b c a s t e i i sa n dp w c a r r ， ，c 协r o m ，( 增，爿，2 0 0 0 ，9 0 4 ：l7 5 4 s y p a r k ，j k p a r k ，j h p a r k ，c 、v m c n e f f a n dpw c a r r ， 埘c ，o c 向吕珊f c 4 ，勘“m 口z2 0 0 1 7 0 ：1 7 9 5 5 ，y x j a n g ，b y a n ，b y u e ，c v m c n e 咒p w c a r ra n dm ，ll e e ， c k ，d ，胛日，6 冒r 彳，2 0 0 3 ，9 8 3 ：8 3 5 6 s s a r k a r ，p w c a mc v m c n e f fa f l da s u b r a m a l l i a n ， ，阳所口f 口e 2 0 0 3 7 9 0 ：1 4 3 5 7 j hp a r k ，j w l e e ，s h k w o n ，j s c h a ，p w c a r ra n d c v m c n e 亿， ( 琢，d m a 幻矿爿，2 0 0 4 ，1 0 5 0 ：1 5 l 5 8 y ，h u ，x y a n ga n dp w c a r r ，c 向r d m o f o g r 、彳，2 0 0 2 ，9 6 8 ：17 5 9 x y a 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u p a ，m m 1 l y i n ，a i a n d e r e e v aa 1 1 dv ，a d a v a l l 】( o v ，乃鼬p 门f 埘， 爿”d fc 南8 m ，1 9 9 5 ，3 2 5 ：6 7 2 7 1 k a n d o ，t i t a ，h t e s h i m aa n dhk u s a n o ，如如h 臌c 口胛影如r 加幽s 啊：e d s ， 南开人学博l 论文销一带绪论 m s t e r a ta n de h o r w o o d ：c h i c h e s t e r ，l9 8 8 7 2 a a ，a s k a d s k i i ，v m l j t v i n o va n dv ，v ，k a z a t s e v a ，v y s o k o m o j s o e d i n ，s e r a ，1 9 8 2 ，2 8 ：2 8 1 7 3 j h r a d i la n de k 荫l o v a ，p o 砂聊p r ，1 9 9 8 ，3 9 ：6 0 4 1 7 4 v v a z a n o v aa n dj h r a d i l ，jr p “c ，凡m c f f o 胛d zj d d 咖m ，19 9 9 ，4l ：16 7 5 a k n y h u s ，s h a g e na n da b e r g e ，j ) d 驴m f j d 口一jp o 砂盯( m p m 血， 2 0 0 0 3 8 ：1 3 6 6 7 6 d m a c b l a n ea i l dj r b e n s o n ，“爿r p v e ，s 耐p 南pc d m 埘竹c 0 细加旧口 c 8 一d 毒r f v 口r 拓e d _ p o 枷口一”i n t e r a c t i o nc h e m i c a l si n c ，a p p l i c a t i o n sn o t e ，19 8 5 7 7 ，d m a c b l a n e ，n k i t a g a 、a n dj r b e n s o n ，爿m 吕r f 胛厶，6 0 ，口f d ，l9 8 7 ( 2 ) ， 1 3 4 7 8 n b a f e y a n ，n f g o r d o n ，i m a g s a r o f l v a r 8 d y ，s p f u l t o n ，y b y a n g a n df e r e g n i e r ，jc r d m 口 口g r ，1 9 9 0 ，5 1 9 ：1 7 9 n b a f e y a n ，s p f u l t o n ，n f g o r d o n ，i ，m a g s a r o 仃，lv a r a d ya n df e r e g n i e r ，b f o ，p c 向h o f d 罟y ，1