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文档简介

单元整合提升 1 限制酶选择时的两种特例 1 限制酶具有特异性 一般情况下 不同限制酶切割形成的黏性末端不同 但也有不同限制酶处理后形成的黏性末端相同 可以用dna连接酶进行连接 如g gatcc和 gatc 识别的序列不同 但处理后形成的黏性末端相同 2 一般情况下 用同一种限制酶分别处理质粒和目的基因 使其具有相同的黏性末端 但如果都用相同的两种限制酶分别处理 也可形成分别对应的相同黏性末端 例如目的基因的两端分别有bamh 和hind 的酶切位点 质粒上也有这两种酶的切点 如图所示 学法指导 构建基因表达载体时限制酶的选择方法 2 限制酶选择的注意事项 1 根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 应选择切点位于目的基因两端的限制酶 如图甲可选择pst 不能选择切点位于目的基因内部的限制酶 如图甲不能选择sma 为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接 也可使用两种不同的限制酶分别切割目的基因和质粒 如图甲也可选择用pst 和ecor 两种限制酶 但要确保质粒上也有这两种限制酶的切点 2 根据质粒的特点确定限制酶的种类 所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致 以确保具有相同的黏性末端 插入的目的基因的表达需要调控序列 用作载体的质粒的插入基因部位之前需有启动子 之后需有终止子 所以所选限制酶的切点应该 前有启动子 后有终止子 质粒作为运载体必须具备标记基因 启动子和终止子等 所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构 如图乙中限制酶sma 会破坏标记基因 如果所选限制酶的切点不是一个 则切割重组后可能丢失某些片段 若丢失的片段含复制起点区 则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制 典例 下表中列出了几种限制酶的识别序列及其切割位点 图1 图2中的箭头表示相关限制酶的酶切位点 下列说法错误的是 a 一个图1所示的质粒分子经sma 切割后 含有4个游离的磷酸基团b 用图1中的质粒和图2中的目的基因构建重组质粒 不能使用sma 切割c 为防止酶切后单个含目的基因的dna片段自身连接成环状 图2所示的外源dna不能使用ecor 切割d 为了获取重组质粒 可用bamh 和hind 同时切割质粒和外源dna 解析本题主要考查考生对基因工程的操作工具 限制酶的理解 图1所示质粒被sma 切割后形成2个黏性末端 根据dna分子两条链反向平行的特点可知 切割后应含有2个游离的磷酸基团 故a错误 若用sma 切割图1中的质粒和图2中的目的基因 会分别破坏质粒中的标记基因和目的基因 用一种限制酶处理的目的基因会因两端含有相同黏性末端而可能发
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