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蝴蝶兰组培过程的技术关键 高级农艺师张秀珊 个人简介 本人于1995年6月毕业于华南农业大学园艺系果树专业 同年7月份分配至广东梅雁集团股份有限公司工作 主要从事螺旋藻的养殖和产品开发 1998年认定为助理农艺师资格 1999年7月 由梅雁公司调入汕头市农科所工作 十年来 本人一直在农科所生物中心 主要从事园艺植物组织培养和花卉选育种的研究和开发工作 2003年12月评定为农艺师资格 2008年12月评定为高级农艺师资格 前言 我所从事蝴蝶兰组织培养的研究工作始于1996年 经过十多年的努力 现已发展成为一个年产100多万苗的蝴蝶兰组培生产线 目前生产的蝴蝶兰品种有几十种 主要有 满天红 汕农红皇后 汕农姑娘 红天鹅 内山姑娘 新莎拉黄金 等优良品种 同时 蝴蝶兰组培技术在蝴蝶兰的选育种 种质保存等方面也发挥了重要作用 近几年来 每年出圃的选育种中间材料有3万多苗 保存的品种资源有几百个 我所从事蝴蝶兰组织培养研究的主要成果 2002年 制定省级农业标准 蝴蝶兰试管苗生产技术规程 db44 t128 2002 2003年 蝴蝶兰 满天红 的引种 扩繁 示范与推广 获汕头市农业技术推广奖一等奖 2004年 蝴蝶兰 满天红 的组培快繁与规模化生产技术 获汕头市科技进步奖二等奖 2008年 蝴蝶兰杂交育种体系构建与新品种选育 获汕头市科学技术奖一等奖 今天 本人主要结合自己十年来在蝴蝶兰组培工作方面的一些实践经验 与大家共同探讨蝴蝶兰组培过程的主要技术措施或一些需要注意的问题 以求推动我所蝴蝶兰的组培工作更好 更快地发展 一 培养基的研究和配制 1 在蝴蝶兰的组织培养中 培养基的种类与成分是决定组培成功与否的关键因素之一 蝴蝶兰不同品种 不同培养材料或不同的生长阶段对培养基的要求都不同 因此 培养基的研究和选择是一个非常关键的基础性工作 也是蝴蝶兰组培生产中的关键环节之一 2 在培养基的配制过程中 要保证所使用的各种试剂或原材料的稳定性 如不使用过期的试剂 不使用变质的椰子汁 香蕉等原材料 3 在培养基的配制过程中 要保证各种称量的准确性 二 外植体的选择和消毒 1 外植体的选择除培养基成分外 决定蝴蝶兰组培成败的另一个重要因素就是外植体的来源 虽然从理论上讲 植物细胞都具有全能性 能够再生新植株 因此任何器官 任何组织 都可以作为外植体 但实际上 蝴蝶兰的不同器官之间的分化能力有巨大差别 因此选择合适的外植体就显得尤为重要 蝴蝶兰的组培外植体主要有叶片 花梗腋芽 花梗节间 茎尖 根尖等 其中花梗腋芽是蝴蝶兰组培的最佳外植体 也是目前利用最广泛的 在选择外植体时 应先选择生长健壮 无病虫害 不变异的母株 在采取外植体前 对母株进行采前预处理 在采前5 7天 用杀菌剂喷洒母株 可有效预防和降低内源性污染 提高诱导的成功率 外植体的最佳成熟度 叶片 叶龄3 5天花梗腋芽 第一朵花现蕾时茎尖或根尖 无菌苗或株龄40天内的植株 2 外植体的消毒 无菌的外植体材料是蝴蝶兰组培成功的重要前提和根本保证 而消毒是获得无菌外植体的有效方法 它通过一些表面消毒剂来杀死外植体表面的微生物 又尽可能保持外植体的生命力 因此 消毒处理是蝴蝶兰组培工作中的重要一环 常用的消毒剂 0 1 的升汞溶液 hgcl2 成本很低 但不环保 使用安全性较差 同时易残留 容易对外植体产生毒害作用 10 次氯酸钠溶液 naclo 环保 使用安全 不残留 但成本较高 消毒方法 以花梗腋芽为例 将取回的花梗用75 的酒精棉花擦干净表面的灰尘 残留的农药 肥料 部分细菌 真菌等 将花梗剪成长4cm左右的花梗段 腋芽上下各2cm左右 剥去腋芽外的苞片 在超净工作台上用0 1 升汞溶液 或10 次氯酸钠溶液 消毒13 20分钟 用无菌水清洗5 6次 注意事项 消毒时间因外植体的种类或成熟度不同而不同 三 外植体的接种 1 接种室和工作台的清洁和消毒2 接种工具的准备 酒精灯 接种盘 高温灭菌器 接种刀 镊子等 3 接种具体操作过程 略 4 注意事项 严格规范无菌操作 尽量降低因操作不当造成的污染 严格工具的消毒工作 尽量减少病毒的交叉感染 切取外植体的工具要锐利且切割动作要快 防止挤压 以免使材料受损伤 切取外植体时切口或切点要适宜 准确 例如 切花梗时 下端切口45 上端切口平面 切芽时 去掉顶芽 外植体在培养容器内的分布要均匀 以保证必要的营养面积和光照条件 四 外植体的培养 1 培养环境的控制2 增殖率的控制 主要靠激素调节3 继代培养次数的控制 蝴蝶兰大多数品种培养材料在