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文档简介

1 2基因工程的基本操作程序 一 教学目标 1 简述基因工程原理及基本操作程序 2 尝试设计某一转基因生物的研制过程 二 教学重点 基因工程基本操作程序的四个步骤 三 教学难点 1 从基因文库中获取目的基因 2 利用pcr技术扩增目的基因 阅读课本p8 p15 完成 优化设计 的自学导引 二 基因工程操作的程序包括 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 原理 基因工程是指按照人们的愿望 进行严格的设计 通过体外dna重组和转基因等技术 赋予生物以新的遗传特性 创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 既是概念 又是原理 一 自学导引 三 基因工程操作程序 1 第一步 获取目的基因 1 方法 从基因文库中获取目的基因 利用pcr技术扩增目的基因 人工合成目的基因 2 比较基因 基因文库 目的基因的区别 见 优化 p7 3 目的基因的扩增呈指数形式扩增 2n 实例1 1 下列获取目的基因的方法中需要模板链是 a 从基因文库中获取目的基因b 利用pcr技术扩增目的基因c 反转录法d 通过dna合成仪利用化学方法人工合成 三 基因工程操作程序 2 第二步 基因表达载体的构建 核心 1 目的 p11 2 以质粒为载体 将目的基因与质粒结合的步骤 用一定的限制酶切割质粒 使其出现一个有黏性末端的切口 用同种限制酶切断目的基因 产生相同的黏性末端 将切下的目的基因片段 插入到质粒的切口处 再加入适量dna连接酶 使两者结合成重组质粒 三 基因工程操作程序 3 基因表达载体的组成 目的基因 启动子 终止子 标记基因 外源dna分子的有效片段 一段有特殊结构的dna片段 位于基因首端 它是rna聚合酶识别和结合的部位 是负责驱动基因转录出mrna的 位于基因尾端 起终止转录的作用 鉴别受体细胞中是否含有目的基因 从而将含有目的基因的细胞筛选出来 三 基因工程操作程序 3 第三步 将目的基因导入受体细胞 1 概念 目的基因进入受体细胞内 并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程 称为转化 2 常用的转化方法 见 优化 p6 导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法操作过程 p12 导入动物细胞 显微注射技术 最多 最有效 操作过程 p13 导入微生物细胞 三 基因工程操作程序 2 常用的转化方法 见 优化 p6 导入微生物细胞 原核生物的特点 转化过程 思考 为什么要用ca2 处理细胞 因为大肠杆菌等细菌的细胞壁成分主要是肽聚糖 因此一般要先用ca2 处理 以增加细菌细胞壁的通透性 三 基因工程操作程序 4 第四步 目的基因的检测与鉴定 1 内容 检测转基因生物的染色体dna上是否插入了目的基因 关键 检测目的基因是否转录出了mrna 检测目的基因是否翻译成蛋白质
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