（动物学专业优秀论文）硒钴锰对南美白对虾不同生长阶段免疫机能的影响.pdf

华南师范大学硕士学位论文答辩合格证明 学位申请人 i 墅 堡向本学位论文答辩委员会提交 题为碴遥盘翌晕自过碰口蛆舅畦狙吐泣壹壁掣硕士论文 经答辩委员会审议 本论文答辩合格 特此证明 学位论文答辩委员会委员 签名 主席 塞垒坠 委员 缝 论文指导老师 签名 2 妒酏f 年6 只f 日 此框用手存档的学位论文贴 学位论变替辫奁辖 l 芷明 硒钻锰对南美白对虾不同生长阶段免疫机能的影响 摘要 本文以南美白对虾为材料 研究饵料中单独添加硒 钻和锰 单 因子浓度梯度法 对不同生长阶段的南美白对虾免疫机能的影响 探 明不同生长阶段南美白对虾在正常状态 f 保持其免疫功能的矿物营养 需求 硒的添加剂量设计为0m g k g 0 2m g k g 0 4m g k g 0 8 m g k g 1 6m g k g 3 2 m g k g 钴的添加剂量设计为0m g k g 2 5 m g k g 5 0m g k g 7 5m g k g 1 5 0m g k g 3 0 0m g k g 锰的剂量设计 为0m g k g 2 0m g k g 4 0m g k g 8 0m g k g 1 2 0r a g k g 1 6 0m g k g 所测定的免疫指标包括碱性磷酸酶 a k p 超氧化物歧化酶 s o d 谷胱甘肽过氧化物酶 6 s h p x 和溶菌酶 l s a 本实验分四个阶段进行 第一阶段研究饵料中单独添加硒 钴和 锰对体氏卜5 c m 的南美白对虾幼虾免疫机能的影响 用单独添加了不 同剂量的硒 钻 锰的饵料投喂南美白对虾 时间共计2 1 天 分别于 第0 7 1 4 和2 1 天取样测定 结果表明 三种微量元素都对南美白 对虾幼虾的免疫机能有一定的影响 且均具有明显的剂量效应 当硒 含量为0 2m g k g 钴含量为2 5m g k g 锰含量为2 0m g k g 时 分别对 酶活力的增强作用最显著 低剂量组往往在第1 4 天酶活力明显升高 到2 1 天时酶活力仍然稳定 高剂量组通常在第7 天时酶活力较高 第 1 4 天后酶活力出现下降 第二阶段研究饵料中单独添加硒 钴和锰对体长5 8 c m 的南美白 对虾免疫机能的影响 用单独添加了不同剂量的硒 钴 锰的饵料投 喂南美白对虾 时间共计2 1 天 分别于第0 7 1 4 和2 1 天取样测 定 结果表明 三种元素都对南美白对虾的免疫机能有一定的影响 且均具有明显的剂量效应 当硒含量为0 4m g k g 钴含量为5 0 m g k g 锰含量为4 0m g k g 时 分别对酶活力的增强作用最显著 剂量适宜 组往往在第7 天酶活力明显升高 1 4 天时则进一步增强 到2 1 天时酶 活力仍然稳定 高剂量组通常在第7 天时酶活力较高 第1 4 天后酶活 力出现下降 第三阶段研究饵料中单独添加硒 钴和锰对体长8 l o c m 的南美白 知识水坝 damdoc 知识水坝为您倾心整理 小店 如需格式转换服务请发豆丁站内信或联系qq 2218108823 硒销锰对南美白对虾不同生鼓阶段免疫机能的影响 对虾免疫机能的影响 用单独添加了不同剂量的硒 钴 锰的饵料投 喂南美白对虾 时间共计2 1 天 分别于第0 7 14 和2 l 天取样测 定 结果表明 三种元素都对南美白对虾的免疫功能有一 定的影响 且均具有明显的剂量效应 当硒含量为o 4 0 8 m g k g 钴含量为5 0 一7 5 m g k g 锰含量为1 2 0m g k g 时 分别对酶活力的增强作用最显著 剂量适 直组往往在各个时段都保持着较高的酶活力 到2 1 天时酶活力 仍然稳定 剂量偏低组和高剂量组在投喂一段时间 7 d 或1 4 d 后则酶 活力下降 有的还低于空白对照组 第删阶段研究饵料中单独添加硒 钴和锰对体长 o c m 以上的南美 白对虾免疫机能的影响 用单独添加了不同剂量的硒 钻 锰的饵料 投喂南美白对虾 时间共计2 1 天 分别于第o 7 1 4 和2 1 天取样测 定 结果表明 三种元素都对南美自对虾的免疫功能有一定的影响 且均具有明显的剂量效应 当硒含量为1 6 3 2 m g k g 钻含量为1 5 0 m g k g 锰含量为1 2 0m g k g 时 分别对酶活力的增强作用最显著 剂 量适宜组往往在各个时段都保持着较高的酶活力 到2 l 天时酶活力仍 然稳定 剂量偏低组和高剂量组在投喂一段时间 7 d 或1 4 d 后则酶活 力下降 有的还低于空白对照组 实验结果表明 南美白对虾在生长发育过程中 随着体长的增 加 保持虾体最佳免疫功能的的硒 钻和锰的需求量也增加 关键词 南美白对虾硒钴 锰免疫 知识水坝 damdoc 知识水坝为您倾心整理 小店 如需格式转换服务请发豆丁站内信或联系qq 2218108823 硒钻锰对南美白对虾不同生k 阶段免疫机能的黪响 a b s t r a ct i no r d e rt od i s c u s st h em i n e r a l r e q u i r e m e n to fp e n a e u v a l l i t a f f l s fi nd i f f e r e n tg r o wp e r i o df o rk e e p i n gi m m u n ef u n c t i o nu n d e r n o r m a s t a t e w es t u d yt h ee f f e c to fs e e n i u m s e c o b a l t c o a n d m a n g a n e s e m n s u p p e m e n t e dr e s p e c t i v e y i nt h ef o r m u l a t e dd i e t so n i m m u n ef n n c t i o no fp e n a o u sv a n n a m o li nd if f e r e n tg r o wp e r i o d s t h e d o s e so fs ei sd e s i g n e dt o0m g k g 0 2m g k g 0 4m g k g 0 8 m g k g 1 6m g k ga n d3 2 m g k g t h e d o s e so fc oi sd e s i g n e dt o0 m g k g 2 5m g k g 5 0m g k g 7 5m g k g 1 5 0m g k ga n d3 0 0m g k g t h ed o s e so fm ni sd e s i g n e dt o0m g k g 2 0m g k g 4 0m g k g 8 0 m g k g 1 2 0m g k g a n d 1 6 0m g k g a c t i v eo fa k p s o d g s h p x a n dl s aa r em e a s u r e da td i f f e r e n ts t a t e s f i r s t l y w es t u d yt h ee f f e c t o fs e c oa n dm ns u p p l e m e n t e d r e s p e c t i v e l yi n t h ef o r m u l a t e dd i e t so ni m m u n ef u n c t i o no fp e n a e u s v a n n a m e iw h o s e1 e n g t hi s1 5 c m t h ei n d e xo fi m m u n i t yi sm e a s u r e da t t h e0d a y t h e7 t hd a y t h e1 4 t hd a ya n dt h e2 1 t hd a y t h er e s u l t s h o w st h a tt h et h r e em i n e r a l sh a sr e s p e c t i v e l yp o s i t i r ee f f e c to n t h ei m m u n i t yo fp e n a e u sv a n n a m e a c t i v eo fe n z y m e si se n h a n c e d s i g n i f i c a n t l yw h e n t h ed o s eo fs ei s0 2m g k g t h ed o s eo fc oi s 2 5m g k ga n dt h ed o s eo fm ni s2 0m g k g t h ea c t i v eo fe n z y m e so f l o wd o s eg r o u p sr i s eu p w h i c hr e m a i n ss t a b l el e v e l a tt h e2 1 t h d a y h o w e v e r t h ea c t i v eo fe n z y m e so fh i g h d o e sg r o u p si n c r e a s e s a tt h e7 t hd a ya n dt h e nd e c l i n e sa tt h e 1 4 t hd a y s e c o n d l y w es t u d yt h ee f f e c to fs e c oa n dm ns u p p l e m e n t e d r e s p e c t i v e l yi n t h ef o r m u l a t e dd i e t so ni m m u n ef u n c t i o no fp e n a e u s v a n n a e iw h o s el e n g t hi s5 8 c m i n d e xo fi m m u n i t y w a sm e a s u r e da tt h e d a v0 t h e7 t hd a y t h e1 4 t hd a ya n dt h e2 1 t hd a y t h e r e s u l t s h o w st h a tt h et h r e em i n e r a l sh a sr e s p e c t i v e l yp o s i t i v ee f f e c t o n 3 硒钻锰对南美白对虾不同生长阶段免疫机能的影响 t h ei m m u n i t yo fp e n a e u sv a n n a m e i a c t i v eo f e n z y m e sw e r et h em o s t s i g n i f i c a n te n h a n c e da m o n go fd o s eo fs eis0 4m g k g c ois5 0 m g k ga n dm ni s4 0m g k g t h ea c t i v eo fe n z y m e so fp r o p e rd o e s g r o u p sr i s eu pa f t e raw e e k w h i e hf u r t h e re n h a n c e da tt h e 14 t h d a y a n dr e m a i n e dh i g h1 e v e a tt h e2 1 t hd a y h o w e v e r t h ea c t i v e o fe n z y m e so fh i g hd o e s g r o u p si n c r e a s e sa t t h e7 t hd a ya n dt h e n d e l c i n e sa tt h e1 4 t hd a y t h i r d l y w es t u d yt h ee f f e c t o fs e c oa n dm ns u p p l e m e n t e d r e s p e c t i v e l y i nt h ef o r m u l a t e dd i e t so ni m m u n ef u n c t i o no fp e n a e u v o n n a m e iw h o s el e n g t hi s8 1 0 c m i n d e xo fi n 硼u n i t yw a sm e a s u r e da t t h e0d a y t h e7 t hd a y t h e1 4 t h d a y a n dt h e2 1 t hd a y t h er e s u l t s h o w st h a tt h et h r e em i n e r a l sh a v er e s p e c t i v e l yp o s i t i v ee f f e c to n t h ei m m n i t yo fe e p a e u sv a n n a m e i a c t i v eo fe n z y m e sw e r et h em o s t s i g n i f i c a n te n h a n c e dw h e nt h ed o s eo fs e i s0 4 0 8 m g k g t h a to f c ois 5 0 7 5 m g k ga n dt h a t o fm nis12 0m g k g p r o p e rd o s e s g r o u p s h o l dh i g hl e v e lo fa c t i v eo fe n z y m e sa td i f f e r e n ts t a g e sa n dk e e p s s t a b l ea f t e r2 1 d a y s h o w e v e r t h ea c t i r eo fe n z y m e so fl o w e ra n d h i g h e rd o e sg r o u p sh a sd e c r e a s e da f t e rs o m et i m e 7 d a y s o r1 4d a y s s o m eo fw h i c ha r ee v e nl o w e rt h a nt h o s eo fn o n s u p p l e m e n tg r o u p f i n a l l y w es t u d yt h ee f f e c t o fs e c oa n dm ns u p p l e m e n t e d r e s p e c t i v e l y i nt h ef o r m u l a t e dd i e t so ni m m u n ef u n c t i o no fp e n a e u s v a n n a s e iw h o s el e n g t hi so v e rl o c m i n d e xo fi m m u n it y w a sm e a s u r e d a tt h e0d a y t h e7 t hd a y t h ed a y1 4 t ha n dt h ed a y 2 1 t h t h e r e s u l ts h o w st h a tt h et h r e em i n e r a l sh a v er e s p e c t i v e l yp o s i t i v e e f f e c to nt h ei m m u n i t yo fp e n a e u sv a n n a m e i a c t i v eo fe n z y m e sw e r e t h em o s ts i g n i f i c a n te n h a n c e da m o n go fd o s eo f s ei s 1 6 3 2 m g k g c oi s1 5 0 m g k ga n dm ni s1 2 0 m g k g t h ea c t i v eo fe n z y m e s o fp r o p e r d o s eg r o u p sr e m a i n sh i g hl e v e l a td i f f e r e n ts t a g e h o w e v e r t h e a c t i v e o fe n z y m e so fl o w e ra n dh i g h e rd o s eg r o u p su s u a l l yh a v e a l r e a d vd e c r e s e da f t e rs o m et i m e 7 d a y so r1 4 d a y s s o m eo fw h i c h 4 硒钴锰对南美白对虾不同生k 阶段免疫机能的影响 a f ee v e nl o w e rt h a nt h o s eo fn o n s u p p l e m e n t g r o u p i nc o n c l u s i o n d u r i n g g r o w i n g o fp e n a e u sv a n l l a l b u i t h em i n e r a l r e q u i r e m e n to fs e c oa n dm nf o rk e e p i n gt h eb e s t i m m u n ef u n c t i o n o fs h r i m pin e r e a s e s8 ss o o ba st h e1 e n g t hi n e r e a s e s k e yw o r d s p e n a e v sv a n n a m e is e l e n i u m s e c o b a t c o m a n g a n e s e m n i m m u n e 5 础钴锰对南美白对虾不同生长阶段免疫机能的影响 第一章绪论 在世界范围内对虾养殖业迅速发展的同时 由于养殖规模的不断 扩人和集约化程度的不断提高 导致养殖池的饲养环境日趋恶化 大 量的诸如环境 营养和代谢等激烈的应激变化导致我国主要对虾养殖 品种自身的免疫力下降 疾病频繁发生 且死亡率较高 对养虾业造 成了严重的经济损失 病害问题仍是制约对虾养殖业健康发展的瓶颈 因素 使用各种抗菌剂虽然仍被作为主要对策 但是由于耐药性病原 菌的形成 对虾免疫功能下降 并且对虾一旦发病 即便适时使用抗 菌剂等进行治疗 也会对其存活率和生长造成较大影响 而且大量使 用抗菌剂等药物还会带来药物残留和环境污染及食品安全性等公共卫 生上问题 由此已严重影响到我国养殖对虾的出口 通过增强对虾的免疫力来提高其抗病能力 已成为当前研究的热 点 免疫营养学是一门新兴学科 是营养学与免疫学的交叉和边缘学 科 主要研究营养与免疫的协同作用 营养与疾病的关系和营养 碳 水化合物 蛋白质 氨基酸 脂肪酸 维生素和矿物质 与免疫细胞 分化的关系 研究正常与应激状态下 保持动物最佳免疫功能的营养 需求量 营养状况对水产动物的健康和免疫力有显著的影响 改善营 养最近已用于防止疾病暴发和减轻感染的严重性 c h a n d r a 1 9 9 6 s c r i m s h a w s a n g i o v a n n i 1 9 9 7 为对虾提供全面充足的营养物质不 但是满足其能量代谢和机体生长发育的需要 而且还是其产生正常免 疫应答反应的基础 某些营养素的缺乏将直接引起机体免疫器官和免 疫细胞等损伤 改变或分化 导致免疫缺陷 并且可以通过影响其他 组织的营养 生长和代谢而间接导致免疫功能下降 抗病力降低 矿物元素作为五大营养素之一 是鱼虾类所必需的营养成分 它 对动物的正常生理生化及免疫功能具有重要作用 然而 到目前为 止 水生动物对矿物质营养需求的研究并不多 主要原因是水生动物 对矿物质的营养需求比较难以测定 它们不仅从食物中获得矿物质 而且能从水中获得部分无机元素 d a v i s 1 9 9 1 虽然关于水生动物 6 硒钻锰对南美白对虾小蚓生长阶段免疫机能的影响 矿物质营养需求已有一些报道 但大部分是有关鱼类的 关于对虾的 矿物质营养需求 包括中国对虾 p e n a e u sc h i n e n s i 日本对虾 p e n a e u sj e p o n i c u s 南美白对虾 p e n a e u sv 3 d d o i i l c i 等几利i 营养生理 研究的比较多的对虾在内 也仅有可数的文章发表 并且 在以往的 研究中 人们只是对对虾某一生长阶段对某种矿物的营养需求进行了 研究 并没有系统地研究对虾在各生长阶段对某些矿物元素的需求 在对虾生长的不同阶段 可能对各种矿物元素的需求量并不相同 目 前 矿物元素硒 钴和锰对于南美白对虾各生长阶段免疫机能的影响 的研究还是空白 所以 本实验通过在基础饵料中单独添加不同含量 的硒 钴和锰 测定不同生长阶段的免疫指标 来探明不同生长阶段 南美白对虾在正常状态下保持其免疫功能的各矿物营养需求 从而为 完善饲料营养构成 生产绿色水产品和保证对虾养殖业的可持续发展 提供科学依据 南美白对虾的生长具有明显的阶段性 体长卜6 c m 时生长较快 6 8 c m 时较慢 8 c m 以上时又较快 王吉桥 2 0 0 2 研究表明 不 同体长的南美白对虾对饵料中蛋白质含量的要求也不同 体长2 4 5 c m 为3 5 体长4 5 9 c m 为2 5 体长9 1 2 c m 为2 0 刘洪军 2 0 0 2 根据南美白对虾的这些生长特点 本研究把南美白对虾的生长阶段分 为四个部分 即体长卜5 c m 为第一生长阶段 5 8 c m 为第二生长阶 段 8 l o c m 为第三生长阶段 1 0 c m 以上为第四生长阶段 采用单因子 浓度梯度法 在基础饵料中添加硒的浓度设计为0 0 2 0 4 0 8 l 6 3 2 m g k g 钴的浓度设计为0 2 5 5 0 7 5 1 5 0 3 0 0m g k g 锰的浓度设计为0 2 0 4 0 8 0 1 2 0 1 6 0m g k g 硒 钴和锰的来源分别为n a 2 s e o 5 h t 0 c o c l2 6 h 2 0 和m n s 0 4 h z 0 1 1 对虾免疫系统和部分免疫指标 与脊椎动物 样 甲壳动物的免疫防御存在细胞免疫和体液免疫 c h e n g 1 9 8 1 细胞免疫表现为血细胞的吞噬作用 团囊作用及结 节形成 体液免疫主要包括血淋巴的凝集素 抗微生物因子以及酚氧 化酶原激活系统 p r o p o 等的杀菌抗菌作用 s o d e r h a l l 1 9 7 9 近年来的研究表明 甲壳动物的免疫机制以非特异性免疫反应为主 硒钻锰对南美白对虾不同生k 阶段免疫机能的影响 a n d e r s o n 1 9 9 6 其中酚氧化酶原激活系统在甲壳动物的非特异性 免疫反应中发挥着重要作用 足一种与脊椎动物补体系统类似的酶级 联系统 具有杀菌 抗寄生虫寄生 异物识别等功能 s o d e r h a l l 1 9 9 4 a s h i d a 1 9 8 4 此外还包括血细胞的吞噬 包掩以及血 琳巴 中的一些酶或因子的杀菌 抗菌作用等 这些酶主要包括溶菌酶 l s z 酸性磷酸酶 a c p 碱性磷酸酶 a k p 过氧化物酶 p o d 等 刘树青等 1 9 9 9 刘恒等 1 9 9 8 而吞噬作用在甲壳动物免疫防御中具有极为重要的意义 b a c h e d r e 1 9 9 5 o l a v 1 9 9 7 v a l e r i e 1 9 9 2 在吞噬前 吞噬过程中和 吞噬后 各种抗氧化酶 氧化酶和水解酶都发挥着重要的作用 机体 内关键性的抗氧化酶主要包括超氧化物歧化酶 s o d 过氧化氧酶 c a t 和谷胱甘肽过氧化物酶 g s h p x 等 m a t e s 1 9 9 9 其中s o d 是关键的抗氧化酶之一 是超氧自由基的天然消除剂 可以清除体内 多余的自由基 使自由基的形成与消除处于一种动态平衡中 从而免 除其对生物分子的损伤 w a r n e r 1 9 9 4 血细胞的吞噬作用能够引起呼吸突发 并伴随着产生四种活性氧 即过氧化物阴离子 0 一 过氧化氢 h 2 0 羟基 0 h 一 和单线态氧 这四种氧具有一定的杀菌作用 能独立或与溶菌酶一起杀灭入 侵的微2 t 物 但其同时也是动物吞噬细胞自身的毒素 需及时清除 s o d 和c a t 等抗氧化酶发挥了重要作用 s o d 有清除吼一的作用 而 c a t 酶催化h 2 0 生成水和氧气 保护动物免受自由基伤害 f e n g 1 9 8 8 b a c h e r a 等 1 9 9 5 g s h p x 豹主要生物学作用是清除脂类氢 过氧化物 并在c a t 含量很少或h 0 2 产量很低的组织中 替代c a t 清 除h 0 2 此外 该酶尚可广泛地清除有机氢过氧化物 在生物体的抗 氧化防御系统中占有特别重要的地位 s t e g e m a 1 9 9 2 1 1 1 超氧化物歧化酶 s u p e r o x i d ed is m u t a s e s o d s o d 是一种重要的抗氧化酶 作为活性氧的清除剂参与清除体内 自由基 在防御机体衰老及生物分子损伤等方面存在极为重要的作用 w a n g 等 1 9 9 6 它广泛存在于需氧生物细胞内的一族含金属的 酶 根掘其活性中心的离子不同分为三种 即铜锌超氧化物歧化酶 8 硒钻锰对南美白对虾不同牛k 阶段免疫机能的影响 c u z n s o d 锰超氧化物歧化酶 m ns o d 和铁超氧化物歧化酶 f e s o d 一般情况下 细胞质多为c u z n g o d 而线粒体中多为 m n g o d 二者对c n 和h o 的敏感性不同 但对甲壳动物中十足类 蟹 螯虾与虾 g o d 的研究发现 细胞质中的s o d 为m n s o d 它与线 粒体中的 i n s o d 是由不同基因编码的 m a r i u s 等 1 9 9 7 s o d 主要功能是催化歧化超氧阴离子自由基 0 一 为h 2 0 和0 2 0 一十2 h 一0 h 2 0 从而阻止0 2 一在需氧生物体内积聚 由此可见 s o d 是机体内唯一能够特异清除自由基0 一的抗氧化酶 可阱说它是机 体内第一道也是非常重要的一道防线 它使对细胞破坏力极强的0 一产 生歧化反应 维持细胞内的氧自由基处于低量无害状态 当然 这一 过程依赖其他抗氧化剂的协同作用 黎婉玲等 1 9 9 8 研究发现 s o d 的活性与水生生物的免疫水平密切相关 对于增 强吞噬细胞防御能力和整个机体的免疫功能有重要作用 牟海津 1 9 9 9 丁秀云等 1 9 9 6 对皱纹盘鲍 h a l i o t i sd i s c u s 血淋巴中的 s o d 活力进行检测 发现皱纹盘鲍在受到病原微生物的侵染后 s o d 活力会大大降低 蔡完其 1 9 9 6 等也发现 罗氏沼虾 麒a c r o b r a e b i u m r o s e n b e r g i 力受莫格球拟酵母 y o r u l o p s i sm o g i i 感染致病后肝胰腺中 的s o d 活力显著降低 表明受染虾的代谢机能和免疫功能明显衰退和 紊乱 刘恒 1 9 9 8 等用添加免疫多糖的饵料饲喂后 南美自对虾 p e n a o u sv g t h r h 2 l l l o i 血 淋巴中的s o d 活性有一定的提高 1 1 2 谷胱甘肽过氧化物酶 g l u t a t h i o n ep e r o x i d a s e g s t t p x g s hp x 是清除羟自由基的重要抗氧化酶 它的作用是通过清除 h 晚防止0 h 产生 并将脂氢过氧化物 r o o h 还原成相应r o h 从而 减轻细胞膜多不饱和脂肪酸过氧化作用 以及r o o h 分解产物引起的细 胞损伤 黄志坚等 2 0 0 4 其清除自由基的机理及作用等方面的资 料不乏报道 研究发现 谷胱甘肽 h 0 2 氧化还原酶 g s h p x 以还原 型貉胱甘肽 g s h 为电子供体 以硒代半胱氨酸残基为活性中心 g s h p x 是机体内广泛存在的一种重要的催化分解过氧化物的酶 它特 异性地催化还原型g g h 对氢过氧化物的还原反应 夏奕明 1 9 8 7 g s l l 一p x 和s o d 及c a t 一起 通过清除魄和h 舡以减轻和阻断脂质过氧 9 矾铀锰对南美白对虾卅 i 可生k 阶段免疫机能的影响 化反应的 级引发作用 催化脂质过氧化物分解成相应的无毒害作用 的醇 构成体内的酶保护系统 具有保护生物膜和生物大分子结构的 生物学功能 从而起到了保护细胞膜结构和功能完整的作用 冯彪 1 9 9 4 1 1 3 碱性磷酸酶 a l k a l i n ep h o s p h a t a s e a k p a k p 是动物代谢过程中重要的调控酶 它是一种非特异性磷酸水 解酶 能催化磷酸单脂的水解及磷酸基团的转移反应 对动物的生存 具有重要的意义 a k p 对水中钙质的吸收 磷酸钙的形成 甲壳素的 分泌及形成均具有重要作用 足水产动物赖以生长 生存的重要酶类 之一 在甲壳动物体内 a k p 与动物对海水中钙质吸取 磷酸钙沉 积 甲壳素分泌及形成都具有非常重要的作用 甲壳动物虾在生长过 程中都要经历换壳过程 该酶对虾的生存具有特别的重要意义 陈清 西 1 9 9 6 a k p 几乎存在子高等动物的各个组织中 在肠上皮 肝脏 自细 胞 成骨细胞等部位尤其丰富 a k p 主要来源于肝脏和骨骼 朱忠 勇 1 9 9 7 在多种软体动物的体内也发现有a k p 与贝类壳角蛋白 等蛋白质的分泌有关 并可参与蛋白质的合成 小林新二郎等 1 9 6 5 b e e d h a m 1 9 5 8 k a d o 1 9 5 4 a k p 是动物溶酶体酶的重要 组成部分 与淋巴细胞自身代谢 吞噬 吞饮及蛋白质 核酸的合成 等都有密切关系 同时也在免疫反应中发挥重要作用 王黎明等 1 9 8 5 p i p e 1 9 9 0 研究表明 感染白斑综合症病毒的中国对虾衄 淋巴的a k p 活性显著低于未感染虾 雷质文等 2 0 0 1 m u h a n l i n a d 等 1 9 9 2 a 1 9 9 2 b 试验证实罗氏沼虾蜕皮间期壳中钙沉积 吸收钙的速 率及蜕皮与其体内的碱性磷酸酶的活性直接相关 刘存岐等 2 0 0 1 也 试验证明碱性磷酸酶活性可作为判断中国对虾仔虾的机能状态的重要 指标 1 1 4 溶菌酶 l y s o z y m e l s a l s a 是动物体液及血液中的重要的非特异性免疫因子 也是对虾 免疫防御系统的重要组成部分 a r m s t r o n g 等 1 9 9 2 l s a 是吞噬细 1 0 硒钻锰对南美白对虾不同生长阶段免疫机能的影响 胞杀菌的物质基础 能水解革兰氏阳性细菌的细胞壁粘多肽中的乙酰 氨基多糖 使之被裂解并释放出来 形成 个水解酶体系 破坏和消 除进入体内的异物 达到机体防御的功能 刘树青等 1 9 9 9 随 着研究的深入 人们陆续从中国对虾 日本对虾 南美自对女f 等甲壳 动物体内检测到l s a 的存在 王雷等 1 9 9 5 在以溶壁微球菌冻干粉作 为底物研究中国对虾血淋巴中的l s a 时发现 正常中国对虾的血淋巴 中具有较强的l s a 而濒死中国对虾血淋巴中基本检测不到l s a 由 此可以认为 l s a 可以作为检测对虾机体免疫功能状态的 个有价值 的参考指标 中国对虾注射适量的大肠杆菌后 血淋巴液的l s a 大大 提高 可见适当的诱导可以提高血淋巴中溶菌因子的活性 其原因主 要在于外来异物进入虾体后 会刺激血细胞迅速做出反应 从而释放 出l s a 等具有免疫活性的物质 参与免疫反应 1 2 硒钴锰对动物免疫机能的影响 1 2 1 硒 s e 硒是动物生命活动所必需的元素 它是谷胱甘肽过氧化物酶 g s hp x 的组成成分 能防止细胞线粒体的脂质过氧化 保护细胞膜 不受脂质代谢副产物的破坏 h e i s i n g e ra n dd a w s o n 1 9 8 3 b e l l e t a l 1 9 8 5 硒和免疫的关系已受到普遍的重视 硒能刺激免疫球蛋 白和抗体的生成 增强机体免疫功能 缺硒动物的吞噬细胞功能 抗 体产生功能 细胞免疫机能均低于正常水平 并且观察到淋巴呈灶性 弥漫性坏死 以及淋巴细胞数量减少等变化 s h e f f y 1 9 7 9 缺硒 使淋巴器官 胸腺 脾脏 盲肠 扁桃体 腔上囊 变得结构疏松 吞噬细胞和淋巴细胞数目减少 网状细胞增生 从而导致不同程度的 免疫抑制或衰退 硒能增强t 细胞介导的肿瘤特异性免疫 有利于细 胞毒性t 淋巴细胞 c t l 的诱导并明显加强c t l 的细胞毒活性 硒还 能显著提高吞噬过程中吞噬细胞的吞噬率 l e e 等 1 9 8 2 当饲料中缺乏硒时 会降低虹鳟 o n c o r h y n c h u sm y k i s s 肝脏及血 浆中g s h p x 活性 因此推测硒在鱼体内也担当着g s h p x 活性中心的作 用 b e l l 等 1 9 8 6 a 1 9 8 6 b p o s t o n 等 1 9 7 6 发现 硒的缺乏引起 硒钻锰对南美白对虾小阿生长阶段免疫机能的影响 大西洋鲑 s a m os a l a r 血浆g s hp x 活性受到抑制 死亡率增高 b e l l 等 1 9 8 7 研究了缺硒对大西洋鲑幼鱼酶活性和组织过氧化作用的影 响 他们以缺硒 0 0 1 7 m g k g 和补硒 0 9 4 4 m g k g 的饲料饲喂平均体 重6 9 的大西洋鲑 为期2 8 周 结果表明 补硒组的鱼增重率大于缺硒 组 缺硒组的鱼有9 尾死亡 都发生在实验的后8 周内 而补硒组 无一死亡 电镜下观察发现 缺硒组角的胰脏组织有较多的肿胀内质 网状结构和大量空泡区 这说明硒不仅对哺乳动物维持胰脏结构和功 能的完整性很重要 g a l l i 等 1 9 8 2 对鱼类的胰脏也很重要 缺硒 组鱼的血浆和肝脏中的g s h p x 活性大大降低 而肝脏中谷胱甘肽转移 酶活性及血浆中丙酮酸激酶活性却显著增加 这与在虹鳟 b e l l 等 1 9 8 6 b 上的结果一致 饲料中添加亚硒酸钠和有机硒可提高异育银鲫 c 知 r a s 9 u sa u f a t u s b e l i ov a r 的全血硒含量及g s h p x 活性 魏志文 等 2 0 0 1 h i l t o n 等 1 9 8 3 给在含硒0 0 4x1 0 9 水中饲养的硬头鳟 s a l m og a i r d n e r i ii r i d e u sg i b b o n s 投喂含0 0 7 m g k g 以及硒含量逐级高 至1 3 m g k g 的配合饲料 维生素e 含量为4 0 0 i u k g 未发现死亡或明 显的缺硒症 然而 当含硒量为o 1 5 0 3 8 m g k g 时 g s h p x 活性才增 加 实验表明 当虹鳟缺硒时 会出现肾钙质沉着症 n e p h r o c a l c i n o sj s 肾脏小管退化 从而导致炎症 h i c k se ta l 1 9 8 4 但饲料中硒含量过高时 会产生毒害作用 长期用含硒l o m g k g 的饲 料投喂虹鳟 则虹鳟生长缓慢 死亡率增加 并且肾脏中出现钙质沉 着 h i l t o na n dh o d s o n 1 9 8 3 硒与维生素e v 是动物体内抗氧化的两条防御途径 两者存在 着协同作用 饲料中硒和v e 的同时存在 对鱼类的正常生长发育是必 需的 二者同时存在可使大西洋鲑幼鱼初期死亡率降低 还可防i j 白 肌病 若从饲料中除去硒和v e 孵化后4 周内幼鱼的死亡率可达到 4 9 6 当硒和v e 同时加入时 幼鱼死亡率会降到2 8 4 p o s t o n 1 9 7 6 t h o r a r i n s s o n 等 t 9 9 4 用不同硒含量和不同v e 含量的饲料喂 硒铺锰对南美白对虾不同生长阶段免疫机能的影响 养人鳞大麻哈鱼 o n c o r h y n c h u st s c h a w y t s c h i 发现高硒高vj 组完全没 有鱼死亡 低硒赢v 组及高硒低v e 组的鱼仅各有 3 的死亡率 面低硒 低v i 二组的鱼则有高达3 1 的死亡率 在g s h p x 活性方面 添加较高硒 的两组也较另两组高 b e l l 等 1 9 8 5 研究硒和v e 对虹鳟组织内过氧化 反应的影响时 发现鱼体内依赖还原型尼克酰胺腺嘌呤二核昔酸 n a d p h 的微粒体脂类过氧化系统和硒及v e 有明显的交互作用 在虹 鳟肝脏与血浆中g s h p x 的活性会因为饲料中硒添加的不足而降低 虽 然这对试验组和对照组的死亡率没有明显的影响 但完全缺乏硒与v t 的这组鱼的增重率较正常添加硒与v t 组的鱼低 而且缺乏硒的鱼有病 理d 的萎缩症状出现 另外 有学者研究了饲料中添加硒与v e 对斑点 叉尾鲴 i c t a u y u sp u n c t a t u s 体内红血球过氧化反应 g s h p x 的活性 和巨噬细胞中过氧化阴离子产物的影响 结果显示 不添加硒与v t 的 对照组鱼的红血球膜较其他各组容易发生过氧化反应 且肝脏中 g s h p x 的活性也较其他各组低 上述两种营养素各添加4 倍于每 i 建 议摄取量的这一组鱼 其细胞问的过氧化阴离子产物远高于其他组 这表明了添加较多的硒或v e 可以使细胞间的巨噬细胞产生更多的过氧 化阴离子 以减少体内过氧化物的生成和残留 w i s e 等 1 9 9 4 硒可增强水产动物免疫力和对疾病的抵抗力 孙宪中等 1 9 8 6 华雪铭等 2 0 0 1 在研究饲料中添加芽孢杆菌和硒酵母对异育银鲫的生 长和抗病力的影响时发现 饲料中单一添加硒酵母能极显著地提高异 育银鲫对嗜水气单胞菌 a e r o m o n a sh y d r o p h i l a 的抵抗能力 在饲料中 补充0 3 1 2 的硒酵母后 异育银鲫对嗜水气单胞菌l d 5 0 滴度明显增 大 研究表明 亚硒酸钠 n a s e o 具抗鱼病引起的鱼体肝组织损伤的 能力 对肝组织损伤有一定的修复作用 在不同浓度四氯化碳 c o l 一 对草鱼肝原代细胞的损伤实验中证实 浓度为l o m l m l 可引起细胞血 清中丙氨酸氨基转移酶 a l t 天冬氨酸氨基转移酶 a s t 乳酸脱 硒钻锰对南美白对虾不同生长阶段免疫机能的影响 氢酶 l d i i 逸出量与细胞破损率显著提高 但在培养液中添加亚硒酸 钠0 弘i m l 则可降低l d h 的逸出量 减轻细胞破损程度 n m s e o 保 护实验中 n a s e o c c i 组预先腹腔注射 i p 0 j m g k g b w 连续二个 月 术次i p c c l 混合液l m l k g b w 2 4 h 内肝组织s o d 相对活性比 c c i 组提高达9 1 5 第7 只仍高出达5 4 5 与对照组的水甲基本 接近 实验还观察到 n a s e 0 3 还可使肝脂质过氧化物显著降低 肝微 粒体蛋白含量与细胞色素p 4 5 0 活性升高 组织切片观察显示肝组织 损伤程度减轻 7 2 h 后细胞核增多 表明n a s e 鸥可提高草鱼肝清除自 由基的能力 增强肝脏解毒功能 谢巧雄 1 9 9 6 硒对双壳贝类的免疫能力的影响已经开始被研究工作者所重视 硒多糖具有增强双壳贝类血细胞的吞噬能力及清除异物能力的作用 孙虎山等 2 0 0 0 向栉孔扇贝 c h l a m y sf a r r e j u 9 注射硒多糖 r1 1 5 和3 0 h 分别测定了栉孔扇贝血清和血细胞中两种可清除自由基的抗氧 化酶即s o d 和c a t 的活力 结果表明 注射硒多糖后 血清中s o d 活 力在1 h 和3 0 h 时及血细胞中s o d 活力在1 h 时均为实验组显著高于对照 组 血清中c a t 活力在1 1 5 和3 0 h 时 血细胞中c a t 活力在3 0 h 时 实验组显著高于对照组 说明硒多糖对栉孔扇贝血淋巴中s o d 和 c a t 的活力均有增强作用 另外 向栉孔扇贝注射硒化卡拉胶 分别 测定栉孔扇贝血清和血细胞中2 种参与免疫防御的水解酶即酸性磷酸 酶 a c p 和溶菌酶 l s z 活力 发现硒化卡拉胶对栉孑l 扇贝血淋巴中 a c p 和l s z 的活力均有增强作用 孙虎山等 2 0 0 2 1 2 2 钴 c o 钴是维生素b v b l 2 的组成成分 v b l 2 中约含4 5 的钻 大多数 动物都需要钻来合成v b 2 k a s h i w a d ae t a l 1 9 7 0 钴作为v b j z 的成 分与氮的同化 血红蛋白的合成密切相关 能降低血浆中的葡萄糖水 平 此外钻还是一些酶的激活因子 r o g i n s k ia n dm e r t z 1 9 7 7 缺 钴时抗体产生减少 血清i 酊水平下降 细胞免疫反应降低 例如缺 钴可使羊嗜中性白细胞杀灭念株菌活性降低 对微生物易感性增强 m a c p h e r s o n 1 9 8 9 硒钴锰对南美白对虾不同生艮阶段免疫机能的影响 钴能增强机体造血功能 在胚胎期就已经参与造 f 王宗 i 1 9 9 5 钻可治疗多种贫血 尤其对低色素小细胞贫血效果好 动物 越缺钴 肝内v b l 2 含量越少 钴刺激造血机能的机制可能为直接刺激 和代偿性刺激造血 实际生产中有补钻提高了血红蛋白及增重水平的 报道 r e i d e 等 1 9 8 1 试验已证明 钻在胚胎期已参与造血 钴盐 可以治疗低色素小细胞性贫血 而v m 对商色素巨细胞性贫血疗效显 著 据报道 饲料中添加钴可促进虹鳟生长 使幼鲤体内的红细