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化学性质实验报告 糖、氨基酸和蛋白质的鉴定 糖类化合物：又称碳水化合物，是多羟基醛或多羟基酮及其缩聚物和某些衍生物的总称，一般由碳、氢与氧三种元素所组成。 实验目的： （1）进一步了解糖的化学性质；（2）掌握鉴定糖的方法及其原理。 （一）-萘酚试验（molish)糖类化合物一个比较普遍的定性反应是molish反应。即在浓硫酸存在下，糖与-萘酚(molish试剂）作用生成紫色环。 实验方法 取3支试管，编号，分别加入0.5ml0.5%的各待测糖水溶液，滴入2滴molish试剂（-萘酚的乙醇溶液），摇匀。把试管倾斜450，沿管壁慢慢加入约1ml浓硫酸（切勿摇 动），小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。硫酸在下层,试液在上层样品：葡萄糖、蔗糖及淀粉 解释: 糖被浓硫酸脱水生成糠醛或糠醛衍生物，后者进一步与 -萘酚缩合生成紫红色 物质，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫色环。 （二）fehling试验 （1）实验原理 fehling试剂：含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。 硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。为防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，fehling试剂中需加入酒石酸钾钠，它与cu2形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子。 （2）操作方法 取4支试管，编号，分别加入fehling试剂i和ii各0.5ml。摇匀并置于水浴中微热后，分别加入5滴待测糖溶液，振荡后置于沸水浴中加热23min，取出冷却，观察颜色变化及有无沉淀析出。fehling试剂i：称取3.5g硫酸铜溶于100ml蒸馏水中,得淡蓝色的fehling试剂i。 fehling试剂ii：将17g酒石酸钾钠溶于20ml热水中，然后加入20ml含 5gnaoh的水溶液，稀释至100ml得无色透明的 fehling试剂ii。 样品：葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖 解释:硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。 （三）benedict试验 （1）实验原理：benedict试剂是fehling试剂的改良。benedict试剂利用柠檬酸作为cu2+的络合剂。 benedict试剂：取17.3g柠檬酸钠和10g无水碳酸钠溶于80ml水中，再取1.73g结晶的硫酸铜溶解在10ml水中，慢慢将此溶液加入上述溶液，用水稀释至100ml得benedict试剂。 （2）操作方法 用benedict试剂代替fehling试剂重复以上实验，取4支试管，编号，分别加入benedict试剂 0.5ml。摇匀并置于水浴中微热后，分别加入5滴待测糖溶液，振荡后置于沸水浴中加热23min，取出冷却，观察颜色变化及有无沉淀析出。 样品：葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖 解释:硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产 生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。 （四）成脎试验 （1）实验原理:单糖与过量的苯肼作用生成糖脎，糖脎是不溶于水的黄色晶体。不同的糖脎，其晶形、熔点及生成速度大都不同，所以可通过成脎试验区别不同的还原性糖。由于成脎反应是发生在c1和c2上，不涉及糖分子的其他部分，所以葡萄塘、果糖都能生成相同的脎。但由于成脎的速度不同，仍然是可以区别的。(2)操作方法 在试管中加人1ml5%的样品溶液，再加入0.5ml10%的苯肼盐酸盐溶液和0.5ml15%的乙酸钠溶液，在沸水浴中加热并振摇，记录并比较形成结晶所需要的时间。并在低倍显微镜下观察脎的结晶形状。 样品:葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖 注意:苯肼有较高毒性。取用时慎勿触及皮肤。若已发生皮肤沾染，先用稀醋酸洗，再用清水洗净。 解释:单糖与过量的苯肼作用生成糖脎，糖脎是不溶于水的黄色晶体。不同的糖脎，其晶形、熔点及生成速度大都不同，所以可通过成脎试验区别不同的还原性糖。 （五）tollens试验 在洗净的试管中加入1mltollens试剂，在加入0.5ml5%糖溶液，在50oc水浴中温 热，观察有无银镜生成。 样品：葡萄糖，果糖，麦芽糖，蔗糖 解释:（六）淀粉水解试验 (1)实验原理:淀粉是葡萄糖的高聚体，在餐饮业又称芡粉，通式是 (c6h10o5)n。淀粉在酸的催化作用下，能发生水解；淀粉的水解过程：先生成分子量较小的糊精（淀粉不完全水解的产物），糊精继续水解生成麦芽糖（双糖），最终水解产物是葡萄糖（单糖），其与fehling 试剂作用可发生显色反应。 (2)操作方法:在试管中加入3ml淀粉溶液,再加入0.5ml20%稀硫酸，将试管放在沸水中加热5min，然后取出试管冷却后用10%naoh溶液中和至中性。取2滴与fehling试剂作用，观察有何现象发生？ 现象:产生砖红色沉淀 解释：淀粉是葡萄糖的高聚体，淀粉在酸的催化作用下，能发生水解；淀粉的水解过程：先生成分子量较小的糊精（淀粉不完全水解的产物），糊精继续水解生成麦芽糖（双糖），最终水解产物是葡萄糖（单糖），其与fehling试剂作用可发生显色反应。 氨基酸：含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称，是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。 蛋白质：是由氨基酸以酰胺键形成的复杂高分子化合物，是生物体的基本组成物质。实验目的： （1）了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。 （2）掌握蛋白质和某些氨基酸的显色反应原理。 （3）学习几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 （一）茚三酮反应 （1）实验原理 -氨基酸或含有游离氨基的蛋白质的水解产物与茚三酮水溶液共热，能生成蓝紫色化合物。这是-氨基酸特有的反应，因此常用于-氨基酸的定性或定量测定。 (2)操作方法 取3支试管，编号后分别加入4滴0.5%的甘氨酸、酪蛋白和蛋白质溶液，再加入2滴0.1%的茚三酮-乙醇溶液，混合均匀后，将试管放在沸水浴中加热12min，观察并 比较3支试管显色的先后次序。 样品：甘氨酸、酪蛋白和蛋白质 解释： （二）双缩脲反应 （1）实验原理：尿素加热至180左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。 由于蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，因此也能发生此反应生成蓝色、紫色或红色的铜盐配合物。氨基酸因不含肽键，故除组氨酸外都不发生此反应。 nh2 co nhconh2 (双缩脲） (2)操作方法：取1支试管，加入10滴蛋白质溶液和15-20滴10%naoh溶液，混合均匀后，再加入3-5滴5%硫酸铜溶液，边加边摇，观察有何现象。 现象：变成蓝色溶液 解释：尿素加热至180左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。 由于蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，因此也能发生此反应生成蓝色、紫色或红色的铜盐配合物。 （三）黄色反应 （1）实验原理：几乎所有的蛋白质与浓硝酸作用产生黄色，黄色物质在碱性溶液中进一步形成橙红色。这是因为多数蛋白质分子都含有带苯环的氨基酸，产生黄色的硝化物。 （2）操作方法： （a)取一支试管，加4滴蛋白质溶液和2滴浓硝酸（由于强酸作用，蛋白质出现白色沉淀），然后置于水浴中加热，沉淀变成黄色，冷却后，逐滴加入10%naoh溶液至溶液呈碱性，观察颜色的变化。 （b)取一支试管，加4滴0.1%苯酚溶液代替蛋白质，重复上述操作，观察颜色的变化。（c)取一支试管，加入少量指甲，再加入5-10滴浓硝酸，放置10min后，观察指甲的颜色变化。 （四）醋酸铅反应 操作方法 取一支试管，加1ml0.5%醋酸铅溶液，再逐滴加入1%naoh溶液，直到生成的沉淀溶解为止，摇动均匀。再加入5-10滴蛋白质溶液，混合均匀，在水浴上小心加热，待溶液变成棕黑色时，将试管取出冷却，再小心加入2ml浓盐酸。观察有何现象产生，并 嗅其味，判断是什么物质。 现