（论文）furin在宫颈癌变过程中的表达及其临床病理意义.pdf

塑堡痘堡堂苤查垫 堡生 旦筮塑鲞筮 塑g 也 旦型 丛 旦 型垫 塑 型 f u r i n 在宫颈癌变过程中的表达及其临床病理意义 张蕾蕾孙珠蕾刘强张艳景红吴江 f u r i n 是蛋白前体加工酶家族中的重要成员 与肿瘤的 转化 发展与转移密切相关 我们分别检测正常宫颈黏 膜 宫颈上皮内瘤变 c i n 及宫颈癌组织中f 血nm r n a 及 蛋白质的表达水平及酶活性 以探讨f 嘶n 与宫颈癌变的 关系 一 材料与方法 1 病例与标本来源 选取河南大学淮河医院2 0 0 5 年 1 月至2 0 1 1 年1 2 月间入院的子宫肌瘤患者的正常宫颈黏 膜 c i n 及宫颈癌组织标本 所有标本均经两名病理专家审 核确诊 根据组织形态学诊断标准 正常官颈黏膜1 5 例 患 者年龄1 6 5 6 岁 中位年龄3 4 5 岁 c i n3 9 例 患者年龄 2 5 6 7 岁 中位年龄4 2 5 岁 宫颈癌4 0 例 患者年龄2 9 7 6 岁 中位年龄5 5 5 岁 2 方法 1 石蜡标本的组织学诊断 蜡块常规包埋 经 连续性组织切片 常规h e 染色 确定诊断和组织学分类 进 行常规免疫组织化学染色 2 逆转录一聚合酶链反应 r t p c r 液氮中迅速取出冻存的组织标本 提取r n a 反 转录合成c d n a p c r 扩增检测f 嘣nm r n a 表达水平 上游引物 5 c c t c g g t c t g t t g g g c t g c g 3 下游引物 5 a a g g g a g c g c 7 i i c a c c a c g c 3 产物大小3 5 5b p 内参照 选用b a c t i n 上游引物 5 c c g a c t a c c t g a t g 从g a t c 3 下游引物 5 一g t a a c c 唧c t c g c g a a 3 产物大小2 8 4b p p c r 扩增体系为 9 5 5i l l i n 9 4 lm i n 5 6 及6 2 各 3 0s 共2 5 个循环 7 2 延伸5m i n 产物经l 琼脂糖凝胶 电泳检测 利用q u a n t i t y0 n e 软件分析各电泳条带常规石蜡 的灰度值 以f 耐n b a c t i n 代表f u r i nm r n a 的相对表达量 3 免疫组织化学s p 法检测f u r i n 及其底物蛋白表达水平 组织包埋 切片 二甲苯常规脱蜡 水化 微波抗原热修复 3 h 2 0 2 孵育1 0m i n 1 0 山羊血清封闭 兔抗人f u r i n a b 6 6 6 7 9 a b c 啪公司 或兔抗人血管内皮生长因子 v e g f 一c a b 9 5 4 8 a b c 锄公司 或兔抗人m t l m m p s c 8 0 2 1 0 s 咖t ac m z 公司 室温孵育6 0m i n 抗兔i g g 孵育 3 0l l l i n 辣根过氧化物标记链酶抗生物素蛋白 孵育3 0m i n d a b 显色 苏木精对比染色 中性树胶封片 p b s 代替一抗 作阴性对照 用已知表达f u r i n 的组织 a b c 锄公司提供 切 片作阳性对照 胞膜或胞质有棕色颗粒为f u r i n 阳性表达 d o i 1 0 3 7 6 0 c m astbury k o leary jj molecular profiling of cervical neoplasia 2006 2 2 thomas g furin at the cutting edge from protein traffic to embryogenesis and disease 2002 10 3 anderson ed vanslyke jk thulin cd activation of the furin endoprotease is a multiple step process requirements for acidification and internal propeptide cleavage 1997 7 4 bassi de mahloogi h a1 saleem l elevated furin expression in aggressive human head and neck tumors and tumor cell lines 2001 4 5 张萍 庞义 杨波 弗林蛋白酶 一种重要的前体蛋白内切蛋白酶 2002 2 6 poincloux r liz rraga f chavrier p matrix invasion by tumour cells a focus on mt1 mmp trafficking to invadopodia 2009 pt17 7 bosch fx de sanjos s human papillomavirus and cervical cancer burden and assessment of causality 2003 31 8 thomison j 3rd thomas lk shroyer kr human papillomavirus molecular and cytologic histologic aspects related to cervical intraepithelial neoplasia and carcinoma 2008 2 9 reshmi g pillai mr beyond hpv oncomirs as new players in cervical cancer 2008 30 10 strongin ay proteolytic and non proteolytic roles of membr