（食品科学专业论文）茶多糖的定量、定性及生物活性研究.pdfVIP

茶多糖的定量、定性及生物活性研究 茶多糖的定量、定性及生物活性研究 摘要 茶多糖( t p s ) 是从茶叶中提取的活性多糖的总称，其中既包括中性多糖和 酸性多糖，但多为杂聚糖，分子量从4 x1 0 4 1 0 1 0 4 不等，具有降血糖、降血 脂、抗氧化、增强免疫力等活性。多糖类初级产品中往往含有色素、多酚和一些 小分子物质( 单糖、寡糖) 为t p s 的分离纯化和生物活性的研究增加了较大的困 难。本文对t p s 的提取工艺、定量方法、指纹图谱以及不同纯度的t p s 的降血糖、 降血脂、抗癌等生物活性进行了相关研究。 采用二次响应面方法( r e s p o n s es u r f a c ea n a l y s i s ，r s a ) 对水法提取t p s 的提 取工艺进行了优化。在浸提时间、浸提温度、料水比3 个因素中，浸提温度对 t p s 的提取率的影晦程度达到高度显著水平。t p s 提取率与浸提温度、料水比、 浸提时间的二次回归睦面为鞍面，需要通过岭嵴分析找出最佳提取工艺条件。岭 嵴分析的结果结合实际操作的便利，将水浸提t p s 最佳条件修正为提取温度 8 0 、漫提时间1 5 h 、料水比1 ：2 0 时，实际测得的提取率为1 2 2 ，与理论预 测值相比相对误差在2 左右。因此，采用r s a 法优化得到的浸提条件参数准确 可靠，具有实用价值。 采用果胶酶、胰蛋白酶以及复合酶等3 种提取法和不加酶水浸提法为对 照，提取崂山粗老绿茶中的t p s 。结果表明，复合酶提取法的提取率最高， 达到5 1 7 ：e 0 1 7 。对4 种工艺获得的t p s ，分别测定其多糖含量、单糖组成、 氨基酸组成。结果表明4 种工艺对提取的t p s 的单糖组成种类影响不大。4 种工艺获得的仲s 的总糖含量由高到低依次为果胶酶法、复合酶法、胰蛋白 酶法以及不加酶水浸提法，其中果胶酶法获得的t p s 总糖含量高达 9 5 2 6 士4 0 9 ，但其糖醛酸含量比其他3 种工艺显著降低。4 种工艺对提 取的t p s 的氨基酸组成种类影响亦不大，但对各氨基酸的含量有较大的影 响。果胶酶法、胰蛋白酶法提取的t p s 的各氨基酸含量与不加酶水浸提法的 相比有较大的减少。 按统一的t p s 提取工艺对不同等级的绿茶( 龙井特级、龙并1 4 级) 及不同 茶多糖的定量、定性及生物活性研究 茶类( 绿茶、乌龙茶、黑茶和红茶) 样品中的t p s 进行分离纯化，并对分离纯 化后的各t p s 样品进行了组成分析。发现从不同的茶叶中分离纯化得到的t p s 含有相同的单糖组成和氨基酸组成。t p s 的多糖部分主要由阿拉伯糖、半乳糖和 葡萄糖以摩尔比l ；1 ：0 5 组成，t p s 中的糖醛酸含量在1 7 2 3 之间；蛋白质 部分由1 6 种常见氨基酸组成，其中v a l ，a 1 a ，g l y , g l u 为主要部分。在该结果的 基础上，以纯化后的t p s 纯品作为标准与苯酚一硫酸反应，以吸光值和t p s 质 量作图获得相关系数为o 9 9 6 1 的标准曲线。该方法的t p s 回收率为8 4 8 8t o 9 5 7 标准偏差为5 5 3 。从而建立了够快速和可靠的定量分析绿茶和乌龙茶中 t p s 的方法。 高效凝胶渗透色谱和成分分析揭示了绿茶中3 种不同纯度的口s 产品：t p s i 、t p si i 和t p si i i 的分子量分布和组成，表明1 0 0 1 2 0k d a 的组分( 主要由 阿拉伯半乳聚糖蛋白组成) 在t p si 、t p si ia n dt p si i i 中所占比重逐渐增加， 分别约为3 0 、6 0 和9 0 。 建立了绿茶t p s 的红外二阶导数指纹图谱。t p si 、t p s 和t p sh i 的红外 二阶导数图谱中在1 0 7 5 、1 0 4 5e l l l - 1 均有吸收峰，它们分别是阿拉伯半乳聚糖蛋 白主链半乳糖吡喃环和侧链阿拉伯呋喃环的特征吸收峰，并且吸收峰的峰强随绿 茶t p s 的纯度的提高而加强。 向量夹角余弦法被用于评估两光谱指纹图谱的相似度。每光谱被认为是向 爨空间的一向量，它们的相似度用向量夹角公式计算得出。两向量的c o s 0 值越接 近1 ，它们的相似度就越大。本文采用红外二阶导数光谱1 2 0 0 - 8 0 0e m - 1 区域计 算t p s 光谱的相似度。t p si i 和r p si i i 的e o s 0 值是o 8 2 ，1 1 p si 和t p si i i 的c o s 0 值是o 。2 6 ，口si i 和t p s1 的c o s 0 值是o 5 2 。其它绿茶t p s1 i 与标准t p su l 之间 c o s 0 值在o 7 o 9 之间。而其它样品与t p si i i 的c o s 0 值计算出来后能够通过该 值简单快速的区分开。至此，向量夹角余弦法提供了一种有效的绿茶t p s 的质量 控制方法。 t p si 、t p si i 和t p si i i 对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的降血糖效果。检测 了它们对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的空腹血糖值、糖化血清蛋白和丙二醛水平 的影响。结果表明，与对照组相比t p si 、t p si i 和t p si i i 能够显著的降低四 氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠空腹血糖值、糖化血清蛋白水平。经过1 4 天治疗，这 茶多糖的定量、定性及生物活性研究 3 种纯度的t p s 能显著的降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的口腹葡萄糖耐量。 t p s i i 在8 0 0 m g , k g d 和t p s i 在4 0 0 m g k g d 时均能显著的预防四氧嘧啶诱导的 高血糖。综合以上，结果表明绿茶t p s ，一种水溶性的阿拉伯半乳聚糖蛋白，是 茶叶中的主要降糖因子。 t p si 、t p si i 和t p s1 1 i 的体外抗氧化活性研究表明它们清除羟基自由基和 超氧阴离子的能力随着t p s 纯度的提高而降低。 研究了t p si 、t p si i 和t p si i i 对大鼠高血脂症的预防和降低作用。考察 了它们对血清总甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固 醇含量。结果，绿茶t p s 对高血脂症大鼠血清t g 、h d l c 、l d l c 水平无显著 影响。只有t p s l l i 对高血脂症大鼠有显著的降低总胆固醇的作用。并且t p s i i i 能显著的增强高血脂症的抗氧化能力。3 种t p s 产品对高血脂症大鼠的肝脏中的 微量元素有影响，能显著增加它们的镁、铜、锌含量以及提高它们锌，铜比值。 暗示绿茶t p s 对高血脂症可能有调节作用。 研究了t p si 、t p si i 和t p si i i 对正常肝细胞h l - 7 7 0 2 和对肝癌细胞 s m m c 7 7 2 1 的抗癌活性。发现t p si i 能有效的抑制s m m c 7 7 2 1 的生长而且对 正常肝细胞h l 7 7 0 2 生长没有影响。t p si 既能抑制肝癌细胞s m m c 一7 7 2 1 的生 长也能抑制h l 7 7 0 2 的生长。t p si i i 对肝癌细胞的s m m c 7 7 2 1 的抑制率比较 低。 本文表明绿茶中的t p s 具有很大的潜力开发为一种降血糖、降胆固醇的功 能食品成分，具有广阔的应用前景。 关键词：茶多糖；定量方法；指纹图谱；阿拉伯半乳聚糖蛋白；生物活性 茶多糖的定量、定性及生物活性研究 q u a n t i f y i n g ，c h a r a c t e r i s t i c sa n db i o a c t i v i t i e so f t e ap o l y s a c c h a r i d e a b s t r a c t t e ap o l y s a c c h a r i d e s ( r p s ) ，w h i c hc o n t a i nn e u t r a lp o l y s a c c h a r i d ea n da c i d i c p o l y s a c c h a r i d ew i t hm o l e c u l a rd i s t r i b u t i o nf r o m4 1 0 4 l o x1 0 4 w e d e f i n e da s t h es u mo fb i o a c t i v i t y p o l y s a c c h a r i d e s e x t r a c t e df r o mt e a t i l e p i g m e n t , p o l y s a c c h a r i d e sa n ds o m es m a l lm o l e c u l a rs u b s t a n c es u c ha sm o n o s a c c h a r i d e sa n d o l i g o s a c c h a r i d e si np r i m a r yp r o d u c t so f p o l y s a c c h a r i d e sc a u s ed i f f i c u l t yi np u r i f y i n g t e ap o l y s a c c h a r i d e sa n di n v e s t i g a t i n gt h eb i o a c t i v i t yo fi t t h ea r t i c l ei n v e s t i g a t e dt h e e x t r a c t i o n p r o c e s s ，q u a n t i t a t i v em e t h o d ，f i n g e r p r i n t , h y p o g l y c e m i cb i o a c t i v i t y , h y p o l i p i d e m i cb i o a c t i v i t ya n da n t i t u m o rb i o a c t i v i t yo f t p s w a t e re x t r a c t i o np r o c e s so ft e ap o l y s a c c h a r i d e sw a $ o p t i m i z e du s i n gt h e r e s p o n s es u r f a c ea n a l y s i sm e t h o d r e s u l t si n d i c a t e dt h a te x t r a c t i o nt e m p e r a t u r e s i g n i f i c a n t l ya f f e c tt h ep o l y s a c c h a r i d e se x t r a c t i o nr a t i oa m o n gt h et h r e em a i n f a c t o r so fe x t r a c t i o nt i m e ，e x t r a c t i o nt e m p e r a t u r ea n dw a t e r m a t e r i a lr a t i o r i d g e a n a l y s i si n d i c a t e dt h eo p t i m u mc o n d i t i o n v a s8 0 c ，1 5h ，1 ：2 0 ，a tw h i c ht h e e x t r a c t i o nr a t i oo ft e ap o l y s a c c h a r i d e sw a s1 2 2 w i t h2 r s d t h eo p t i m u m p a r a m e t e r sw e r ef o u n dc o n t a i n i n gc r e d i b i l i t ya n dp r a c t i c a l i t y f o u rd i f f e r e n tt r e a t m e n t s i n c l u d i n gw a t e r - e x t r a c t e dp r o c e s s ，p e c t a s e - e x t r a e t e d p r o c e s s ，t r y p s i n - e x t r a c t e dp r o c e s sa n dc o m b i n e d - e n z y m e - e x t r a c t e dp r o c e s sw e r e r e s p e c t i v e l ya p p l i e dt oe x t r a c t 口sf r o ml a o s h a ng r e e nt e a t h ee x t r a c tr a t i oo f c o m b i n e d - e n z y m ep r o c e s sm e t h o dr e a c h e d5 1 7 士o 1 7 a n dh i g h e rt h a nt h o s eo f t h e t h r e eo t h e rp r o c e s sm e t h o d t h ec i a d et p so b t a i n e df r o mt h ef o u rp r o c e s sm e t h o d w e r ef u r t h e rp u r i f i e dt h r o u g hs e p h a r o s ef fa n dt h ep u r i f i e dt p sw a so b t a i n e d r e s p e c t i v e l y t h e nc o m p a r i s o n so nt h ec o m p o n e n t so fm o n o s a c c h a r i d e s ，a m i n oa c i d s i nt h ep u r i f i e dt p sw e r ec o n d u c t e d t h ef o u rp r o c e s sm e t h o dh a dn oi n f l u e n c eo j lt h e 茶多糖的定量、定性及生物活性研究 k i n d so fm o n o s a c c h a r i d e si nt e ap o l y s a c c h a r i d e s ，b u tl i t t l eo nt h ep r o p o r t i o no ft h e m o n o s a c c h a r i s d e s t h et o t a ls u g a rc o n t e n to ft p sp r e p a r e db yt h ef o u rp r o c e s s m e t h o dw a s d e c r e a s e d i n f o l l o w i n gp e c t a s e - e x t r a c t e dp r o c e s s ， c o m b i n e d - e n z y m e e x t r a c t e dp r o c e s s ，t r y p s i n - e x t r a c t e dp r o c e s s ，a n dw a t e r - e x t r a c t e d p r o c e s s e s p e c i a l l y , i np e c t a s e - e x t r a c t e dp r o c e s si tr e a c h e dt o9 5 2 6 士4 0 9 w h i l e t h eu r o n i ca c i d sc o n t e n td e c r e a s e dg r e a t l y t h ef o u rp r o c e s sm e t h o dh a dn o i n f l u e n c eo nt h ek i n d so f a m i n oa c i d si nt p s ，b u tg r e a to nt h ep r o p o r t i o no f t h e m t p sf r o md i f e r e n tk i n d so ft e ac o n t a i ns i m i l a rc o m p o s i t i o no fs u g a r sa n da m i n o a c i d s p o l y s a c c h a r i d ep a r to f t e at p si sm a i n l yc o m p o s e do f a r a b i n o s e ，g a l a c t o s ea n d g l u c o s e 诵t l lt h ea p p r o x i m a t em o l a rr a t i oo f1 ：1 ：0 5 u r o n i ea c i dc o n t e n ti nt e at p s w a sn e a r1 7 2 3 p r o t e i np a r to ft e at p si sc o m p o s e do f1 6n o r m a la m i n oa c i d s a m o n gw h i c hv a l ，a l a , g l y , g l ua r et h em a j o rp r o p o r t i o n b a s e do nt h er e s u l t s ，t h e p u r i f i e dt p sw a su s e da st h ec f l i b m t i o ns t a n d a r di np h e n o ls u l f u r i ca c i dr e a c t i o nf o r t h ec a l i b r a t i o nc u r v et h a tw a sc o n s t r u c t e db yp l o t t i n ga b s o r b a n c ev e r s u sm a s so ft p s w i 凼ac o r r e l a t i o nc o e f i f i c i e n to f0 9 9 6 1 i nt h ed e v e l o p e dm e t h o d t p sm a s sr e c o v e r y r a n g e sf r o m8 4 8 8t o9 5 7 州t 1 1ar e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o no f5 5 3 i ti sf o u n d t h a tt h e d e v e l o p e dm e t h o di ss i m p l e ，r a p i d ，r e l i a b l ea n di d e a l l ys u i t a b l ef o r q u a n t i l y i n gt p s f r o mg r e e nt e ao ro o l o n gt e a h i g hp e r f o r m a n c eg e lp e r m e a t i o nc h r o m a t o g r a p h y ( h p g p c ) a n dc o m p o n e n t a n a l y s i sr e v e a l e dt h em o l e c u l a rw e i g h td i s t r i b u t i o na n dc o n s t i t u e n t so ft p si ，t p si i a n dt p si i ii n d i c a t i n gt h a ta10 0 12 0k d af r a c t i o n , w a se s s e n t i a l l yc o m p o s e do f p o l y s a c c h a r i d e s ( - 9 0 呦o f s u b s t a n t i a la m o u n t so f a r a b i n o g a l a c t a np r o t e i n s t h es e c o n dd e r i v a t i v ei rs p e c t r af i n g e r p r i n to ft p sf r o mg r e e nt e aw a sf o u n d e d t h es e c o n dd e r i v a t i v ei rs p e c t r ao ft p si ，t p sha n dt p sl l ia p p e a rt h ei n t e n s i t yo f p e a ka r o u n d10 7 5 ，1 0 4 5e r a - 1 ，w h i c hc h a r a c t e r i z eg a l a e t o p y r a n o s ei nt h eb a c k b o n e a n da r a b i n o f u r a n o s eu n i t si ns i d eb r a n c h e so f a r a b i n o g a l a c t a n p r o t e i n s , r e s p e c t i v e l y v e c t o r i a la n g l em e t h o dw a su s e df o re v a l u a t i n gt h es i m i l a r i t yb e t w e e nt w os p e c t r a l f i n g e r p r i n t s s p e c t r o g r a mc a nb et r e a t e da sv e c t o ro fh y p e r s p a c e ，a n dt h es i m i l a r i t y b e t w e e n t h e mc f l f lb ec o u n t e da c c o r d i n gt ov e c t o r i a la n g l ef o r m u l a t h em o r en e a rt o lt h ev a l u eo fc o s 0i s 恤em o r es i m i l a ra r et h et w ov e c t o r $ i nt h ea r t i c l e t h es e c o n d 茶多糖的定量、定性及生物活性研究 d e r i v a t i v ei rs p e c t r ao f1 2 0 0 - 8 0 0c m - 1r e g i o nw e r eu s e di nc a l c u l a t i n gt h es i m i l a r i t y o ft w os p e c t r o g r a m c o m p a r e dw i t ht h es e c o n dd e r i v a d v ei rs p e c t r ao f i p si ia n d t p si i i t h ev a l u eo fc o s oi so 8 2 c o m p a r e dw i t ht h es e c o n dd c r i 出v ei rs p e c t r ao f t p si 和t p si i i ，t h ev a l u eo fc o s oi so 2 6 c o m p a r e dw i t ht h es e c o n dd e r i v a t i v ei r s p e c t r ao ft p si ia n dt p si t h ev a l u eo fc o s oi so 5 2 t h ev a l u e so fc o s qb e t w e e n t p sh ia n do t h e rs a m p l e sw 哦a l s oc a l c u l a t e df r o mw h i c ht h e yc a l lb ee a s i l ya n d r a p i d l yd i s c r i m i n a t e d v e c t o r i a la n g l em e t h o dp r o v i d eap o t e n t i a lm e t h o df o rq u a l i t y c o n t r o lo f t p sf r o mg r e e nt e a t h ee f f e c t so ft p si ，t p s a n dt p s1 1 1w e r et e s t e do nh y p e r g l y c e m i cd i a b e t i c m i c e t h ei n f l u e n c eo nt h ef a s t i n gb l o o dg l u c o s e ( f b g ) l e v e l ，g l u c e s y l a t e ds e r u n l p r o t e i n ( g s p ) l e v e la n dm a l e i ed i a l d e h y d e ( m d a ) l e v e li nt h ea l l o x a n - i n d u e e d d i a b e t i cm i c ea m o n gt p si t p s a n dt p si i ia r em o n i t o r e d r e s u l t si n d i c a t e dt h a t t p si ，t p si ia n dt p sh ic o u l ds i g n i f i c a n t l yd e c r e a s ef a s t i n gb l o o dg l u c o s e ( f b g ) a n dg l u c o s y l a t e ds e n l mp r o t e i nr g s p ) i na l l o x a n - i n d u c e dd i a b e t i cm i c ec o m p a r e dt o t h ec o n t r o lg r o u p g l u c o s et o l e r a n c ec u r v e so fa l l o x a n - i n d u c e dd i a b e t i cm i c ei r e a l e d w i t ht p si t p s a n do f t p s1 1 1w e r es i g n i f i c a n t l ys h i f t e dd o w n w a r d sa f t e r1 4d a y s t r e a t m e n t t p sha tt h ed o s eo f8 0 0m g k g da n dt p sia tt h ed o s eo f4 0 0m g k g d h a dg r e a tp r e v e n t i v ee 丘j c to nh y p e r g l y c e m i ai nm i c e t a k e nt o g e t h e r , t h er e s u l t s i n d i c a t et h a tas o l u b l et e ap o l y s a e c h a r i d e ，a r a b i n o g a l a c t a np r o t e i n s ，i st h em a j o r h y p o g l y c e m i cf a c t o ri nl e a i nv i t r oa n t i o x i d a n ta c t i v i t i e so f t p si t p si ia n dt p si i if o rs c a v e n g i n gh y d r o x y l r a d i c a l sa n ds u p e r o x i d er a d i c a l sd e c r e a s e dw i t ht h ed e g r e eo fp u r i f i c a t i o n , a n dw e r e l o w e s tf o rt h et p sm p r e v e n t i v ee f f e c t sa n dd e c r e a s i n ge f f e c t so ft p si ，t p si ia n dt p si i io n h y p e r l i p i d e m i ai nr a t sw e r ei n v e s t i g a t e d s e v e r a li m p o r t a n tp a r a m e t e r si ns e r u ms u c h a s t r i a c y l g l y c e r o l ( t g ) ，c h o l e s t e r o l ( t c ) ，h d l c h o l e s t e r o l ( h d l - c ) ， l d l c h o l e s t e r o l( l d l c ) w e r ea s s a y e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h a tt gh d l - c ， l d l - ci nt r e a t m e n tg r o u p sw a sn o ts i g n i f i c a n t l ya f f e c t e db yt p sf r o mg r e e nt e a c o m p a r e dw i t ht h o s eo f c o n t r 0 1 t h ed a t ao f t c i n d i c a t e dt h a tt p s1 1 ih a da l l e v i a t i v e e f f e c to nh y p e r c h o l e s t 盯o l m i ai nr a t s t h er e s u l t sa l s os h o w e dt h a tt p si i ic a n 一至墨塑塑塞墨：塞丝墨生塑塑丝堑塞 e n h a n c et h ea n t i o x i d a n ta c t i v i t yi nh y p e r e h o l e s t e r o l m i cr a t s t h r e et p sp r o d u c t i o n w i t hd i f f e r e n tp u r i t i e sh a di n f l u e n c eo nt h es e n 尬m a g n e s i u m , c o p p e ra n dz i n ci n h y p e r l i p i d e m i cr a t s ，w h i c hi n d i c a t e dt h a tt p sf r o mg r e e nt e am i g h tr e g u l a t et h e h y p e d i p i d e m i ai nr a t s t h ee f f e c to ft p s i ，t p si ia n dt p si i io nt h eh e a l t h yl i v e rc e l lh l 7 7 0 2a n dt h e a n t i - t u m o ra c t i v i t yo nt h el i v e rc e l ls m m c 7 7 2 1 t p s1 1w a sf o u n dt ob ee f f e c t i v eo n i n h i b i t i n gs m m c - 7 7 2 1a n dd o e sn o ta f f e c tt h eg r o w t ho fh e a l t h yl i v e rc e l li l l 一7 7 0 2 t p siw a sf o u n dt oi n h i b i tn o to n l yt h eg r o w t ho f t h et u m o rc e l ls m m c 7 7 2 1b u ta l s o t h eg r o w t ho f h e a l t h yf i v e rc e l lh l 一7 7 0 2 t h ei n h i b i t i v er a t i oo f t p sh io nt h eg r o w t h o f g l a m o re e l ls m m c - 7 7 2 1i sl o w t h ea r t i c l ei n d i c a t e st h a tt h i sp o l y s a c c h a r i d e m a yb ed e v e l o p e dt oap o t e n t i a l n a t l l r a lh y p o g l y c e m i c ，a n dh y p e r c h o l e s t e r o l m i cf u n c t i o n a li n g r e d i e n t k e y w o r d s ：t e a p o l y s a c c h a r i d e s ；q u a n t i t a t i v e m e t h o d ；f i n g e r p r i n t ； a r a b i n o g a l a c t a np r o t e i n s ；b i o a c t i v i f i e s 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得或 其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的 任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：1 氢c 卜影争签字日期：匆吁年f 月岁日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后 适用本授权书) 学位论文作者签名：同。j 、徐 导师签字： f 签字日期：矽叩年月r 口 签字日期： 7 年月7 日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 电话： 邮编 茶多糖的定量、定性及生物活性研究 1 文献综述和立项依据 1 茶多糖的研究概况 中国饮茶历史悠久，同时也拥有丰富的茶叶资源。对茶叶资源的综合开发利 用一直为人们所关注。茶叶中含有多酚、多糖、茶色素、茶皂素、茶氨酸、咖啡 碱、维生素等很多活性成分。上一世纪的研究多集中在茶多酚、茶皂素和咖啡碱 的功能活性上，而近些年人们对茶多糖、茶氨酸的关注程度日益提高( 朱永兴等， 2 0 0 5 ) 。茶多糖是从茶叶中提取的活性多糖的总称，既含有酸性多糖也含有中性 多糖，而且它们往往是与蛋白质紧密结合的糖蛋白复合物，它们的分子量在4 1 0 万分布。据报道，茶多糖具有多种生物活性，对人体生理具有显著的调节作 用，在医疗、功能食品方面显示了广阔的开发前景。 1 1 茶多糖的提取工艺流程 茶多糖提取工艺大致分为单独提取和综合提取工艺( 陈建国等，2 0 0 0 ) ，如 下所示。 单独提取法 ( 1 ) 原料一水漫提( 2 - 3 次) 一沉淀过滤一取滤液浓缩一乙醇沉淀一过滤、回收乙醇一 粗多糖一精制、干燥一茶多糖 ( 2 ) 原料一乙醇浸泡回流( 3 次) 一滤渣一沸水提取( ( 3 次) 一过滤一提取液浓缩一脱 脂、脱蛋白、脱色一乙醇沉淀( 2 次) 一粗多糖一精制、干燥一茶多糖 综合提取法：具简化、省试剂、效益高等优点 原料一沸水浸提( 2 次) 一离心、除渣一提取液氯仿萃取一 广有机层一回收氯仿、精制、干燥一咖啡碱 i l厂有机层_ 回收、干燥、精制一茶多酚 l 水层一乙酸乙酷萃取一l i ， l 水层一乙醇醇析一滤渣精制干燥一茶多糖 原料一乙醇浸提一 广滤渣酸性乙醇提取一滤液丙酮分离一回收、精制、干燥一茶多糖 i - i 厂有机层一回收、精制、干燥一咖啡碱 l 滤液浓缩氯仿萃取一 厂有机层一茶多酚 l 水层一乙酸乙酷萃取一l 水层一复合物 茶多耱的定量、定性及生物活性研究 陈海霞等( 2 0 0 1 ) 比较了醇沉法、超滤法和c t a b 沉淀法三种工艺制备的茶 多糖粗提物。其中c t a b 沉淀法制备的茶多糖粗提物中，蛋白质含量达2 8 1 ，即 c t a b 沉淀多糖的同时，把蛋白质也一起沉淀下来；醇沉淀法提取的茶多糖的多 酚含量最高；与c t a b 沉淀法和醇沉淀法相比，超滤法所得的粗茶多糖的多糖含 量高，多酚、可溶性蛋白质含量均较低。通过纸层折和气相色谱分析，三种工艺 所提取的茶多糖均由阿拉伯糖、木糖、核糖、葡萄糖、半乳糖及半乳糖醛酸组成， 但组成比差异不大 改进提取、纯化工艺，找到一条工艺简单、成本低，得率和纯度高、效益好 的提取工艺流程，提取茶多糖纯品。 1 2 茶多糖的提取 1 2 1 水浸提和酶法提取 植物的细胞壁主要由纤维素、半纤维素、果胶质、木质素等物质构成致密结 构。正是由于这一致密层的阻碍，在提取时细胞内物质不易透过。添加适量的纤 维素酶、果胶酶和蛋白酶有利于细胞壁和细胞间质层的分解，提高细胞内物质的 溶出率，从而提高多糖的提取率。 谭淑宜等( 1 9 9 9 ) 发现，在茶汤中添加0 3 的纤维素酶可使多糖浸出率提 高2 0 左右。傅博强等( 2 0 0 2 ) 比较了低温水法提取茶多糖和纤维素酶法提取茶 多糖，发现纤维素酶法提取的多糖含量比水法提取的高6 3 3 ，多糖总提取率达 2 9 7 ，粗多糖( 干重) 总提取率达7 9 3 ，而且采用酶法提取的茶多糖具有较强 的抑制。 王元凤等( 2 0 0 5 ) 比较了热水提取、复合酶提取、果胶酶提取对一次热水提 取后的茶渣中茶多糖提取效果的影响。结果表明，热水提取后的茶渣采用复合酶 在提取的最佳工艺条件( 温度4 0 、p h 值5 5 、加酶量0 5 、提取时间3h ) 下，对茶多糖的提取率为3 2 9 ，是水提法的2 7 0 倍；采用果胶酶在提取的最 佳工艺条件( p h 值4 5 、加酶量0 3 、温度4 5 、提取时间2h ) 下，最佳 条件下茶多糖的提取率为2 2 1 ，是水提法的1 8 1 倍。采用第一次水提结合第 二次复合酶提的提取率，是热水二次提取的l ，5 5 倍。 有报道采用果胶酶、胰蛋白酶以及二者组成的复合酶等3 种提取法和不加酶 水浸提法为对照，提取崂山粗老绿茶中的多糖。结果表明，复合酶提取法的提取 2 茶多糖的定量、定性及生物活性研究 率最高，达n 5 1 7 o 1 7 。对4 种工艺获得的茶多糖用s e p h a r o s ef f 阴离子交换 柱进行分离纯化，收集主要的含糖组分，分别测定其多糖含量、单糖组成、氨基 酸组成。结果表明4 种工艺对提取的茶多糖的单糖组成种类影响不大，但对各单 糖组分之间的比例稍有影响。4 种工艺获得的t p s 的总糖含量由高到低依次为果 胶酶法、复合酶法、胰蛋白酶法以及不加酶水浸提法，其中果胶酶法获得的t p s 总糖含量高达9 5 2 6 4 0 9 ，但其糖醛酸含量比其他3 种工艺显著降低。4 种工艺对提取的t t s 的氨基酸组成种类影响亦不大，但对各氨基酸的含量有较大 的影响。果胶酶法、胰蛋白酶法提取的t p s 的各氨基酸含量与不加酶水浸提法的 相比有较大的减少( 周小玲等，2 0 0 7 ) 。 但酶法提取茶多糖过程中，需要调节酶作用的最适温度和最适p h 以使酶活 力最佳，这两个因素在实际操作中不太容易控制。而且值得一提的是，酶还有可 能会使多糖发生部分降解，这对多糖的生物活性是否有较大的影响尚需进一步深 入研究。 1 2 2 其它提取方法 有报道采用超声波和微波技术提取茶多糖能够保持茶多糖的生物活性，提高 得率( 傅博强等，2 0 0 1 ；汪兴平等，2 0 0 2 ；崔志芳等，2 0 0 6 ) 。超声振荡可直接破 坏植物的细胞壁，使通过细胞多孔透析膜的可溶性物质增加，提高多糖很率。采 用微波加热主要是使得细胞内部温度迅速上升，细胞内