透皮实验操作规程.doc

.透皮实验操作规程一、透皮仪的使用1、操作面板介绍：2、操作方法：（1）多功能旋钮(面板右部的大旋钮)的用法：旋转(选项) 按一下(选中) 旋转(设置) 按一下(确认)（2）顺时针旋动大旋钮，功能指示灯按序从左至右点亮： (测温 设温 加热 调速)3、温度设定 转动大旋钮选中“设温”灯亮，按下。在缓慢左右旋至所需温度数据后按下，确认。4、预加热设温完毕，转动大旋钮指示灯前进一步至“加热”灯亮，按下，此时温度窗口旁的加热状态灯亮，加热开始。5、调速设定转动大旋钮选中“调速”灯亮，按下，再缓慢左右选至所需转速按下，确认。6、运行/暂停水温加热至预置温度后，放入样品，按下“运行/暂停”键开始计时，再次按下，时钟停止计时。7、透皮仪使用注意事项 （1） 若发现六个搅拌头有不转的现象，请打开其底板检查，若传动带脱落或损坏请换上备用皮带。 （2）严禁水箱内无水时开机。平时仪器不用时请将水放尽。 （3）仪器及环境经常保持清洁，请勿任意拆下机件或仪器内部元件。二、实验步骤1、配置生理盐水(即质量浓度为0.9%的氯化钠溶液)，准备棉球2、离体鼠皮的制备 将小鼠断颈处死后，立即用充电式修剪器将小鼠腹部毛剃干净，立即剪取腹部皮肤，将取下的皮肤平铺于干净的玻璃板上，角质层朝下，仔细用沾有生理盐水的棉球擦除皮下脂肪层和结缔组织，用生理盐水反复冲洗干净，置于生理盐水中，于4冰箱保存备用，实验前自然解冻，并用生理盐水浸泡0.5h，于1周内进行实验。每次实验前目视检查鼠皮的完整性，不能有任何破损。3、接收液的配置根据所选药物的溶解度，选择接收液，水溶性药物一般选用生理盐水，难溶性药物一般选用生理盐水+适量的表面活性剂（如乙醇，丙二醇，但其用量一般不超过30%，v/v），以便增加其溶解度，符合其漏槽条件。注：漏槽条件 一般释放介质的体积为药物饱和溶液所需介质体积的3-7倍。（即选择的接收液对药物的溶解能力要好。）4、扩散池的检漏将皮肤固定于已加有搅拌子的Franz扩散池上，使角质层面向上，用弹簧夹固定，在供给池中加满水，放置一段时间看其液面是否下降，若有渗漏情况，则调整弹簧夹，至不漏为止。5、加接收液用注射器慢慢将接收液加入接收池中，加完后检查皮肤与接收液接触界面间是否有气泡，如果有气泡，将扩散池稍稍倾斜排除气泡，加满接收液。6、加样品溶液用注射器慢慢将样品溶液加入供给池中，加入量一般为1-2mL，加入后用保鲜膜将供给池封闭。7、取样用弯头取样针缓缓抽出适量接收液(一般0.5-1mL)，注意不要有气泡进入接收池，若有气泡产生，则将扩散池稍稍倾斜排除气泡，补加等量的新鲜接收液。8、样品处理将取出的接收液蒸干(根据不同药物的性质，选择蒸干温度)，用甲醇复溶，13000转离心15min，取上清液进样检测。9、皮肤滞留量的测定透皮结束后，将皮肤从扩散池上取下，剪取透皮面积部分的鼠皮，用纯净水冲洗透皮表面3遍，再用酒精棉球擦拭鼠皮表面3遍，以除尽残留于表面的药物，再将鼠皮剪碎置于含有1mL甲醇的离心管中，超声提取60min，13000转离心15分钟，取上清液，进样检测。10、鼠皮切片 透皮结束后，将皮肤从扩散池上取下，剪取透皮面积部分的鼠皮，用纯净水冲洗透皮表面3遍，再用酒精棉球擦拭鼠皮表面3遍，以除尽残留于表面的药物。将上述样品按照0-15m，15-30m，30-45m切片(若含量较低，则可平行多次)，将所