实验五新生儿溶血病PPT课件.ppt

实验五新生儿溶血病 Hemolyticdiseaseofthenewborn HDN 1 新生儿溶血病的定义 HDN是指因母 婴血型不合而引起的胎儿或新生儿同种免疫性溶血 出现黄疸 贫血 水肿 肝脾肿大 甚至死胎 新生儿死亡等溶血病的症状和合并症 2 HDN的分类 ABO HDNRh HDN其他血型系统 HDN 3 ABO HDN和Rh HDN的区别 ABO HDNRh HDN病因ABO血型不和Rh血型不和母亲血型O型多见Rh阴性婴儿血型A B AB型Rh阳性发病率3 5 较低免疫刺激不需孕产史 输血史首发胎数第一胎第二胎 外祖母学说除外 直抗 1 1 以上放散液制备冷冻 热放散乙醚放散换血治疗O型RBCRh血型同母亲AB型血浆ABO血型同婴儿型或O型血 4 新生儿溶血病检测的方法及原理 新生儿ABO及Rh血型鉴定 三项试验 直抗试验游离试验释放试验 5 1 准备 离心分离血清和RBC 生理盐水洗涤RBC3次 取少量RBC配成3 5 的RBC悬液 血清和洗好的压积RBC备用 2 新生儿ABO及Rh血型鉴定 试管法 3 直接抗球蛋白试验 实验方法 3 5 RBC1滴抗球蛋白试剂2滴 3000rpm离心15s 凝集 阳性 无凝集 加阳性对照细胞 凝集 阴性 无凝集 抗球蛋白试剂失效 6 游离试验 原理检测新生儿血清中是否存在针对新生儿RBC血型抗原的IgG血型抗体 检测出A型 抗AB型 抗BAB型 抗A 抗B或抗A BRh阳性 抗D 7 游离试验 抗球蛋白卡法 ABO HDN游离试验A型RBCB型RBCO型RBC婴儿血清Ac管50 l25 lBc管50 l25 lOc管50 l25 lRh HDN游离试验1号细胞2号细胞3号细胞婴儿血清150 l25 l250 l25 l350 l25 l37 孵育15min 以1030rpm离心10min 观察结果 8 2019 12 28 9 ABO HDN游离试验结果判断AcBcOc意义 存在游离的抗A抗体 存在游离的抗B抗体 存在游离的抗A 抗B抗体或抗A B抗体 存在游离的ABO血型系统以外抗体 没有游离抗体只有当血清中检出相应抗体 同时新生儿RBC上又存在对应抗原时才认为游离试验是阳性 Rh HDN游离试验结果判断 任何一管出现凝集则血清中存在不规则抗体 抗 D 进一步做抗体鉴定 3管均不出现凝集则血清中不存在不规则抗体 10 放散试验 原理利用特殊的方法将致敏在新生儿红细胞上的抗体放散下来 然后再检测放散液中的抗体 11 放散液制备 1 热放散2 乙醚放散 1份RBC1份盐水2份乙醚 振摇1min 排气 离心3min 上层乙醚中层RBC基质下层放散液 吸管吸出放散液 置37 水浴中30min 除尽乙醚 然后鉴定抗体 取洗涤压积RBC1份 1ml左右 生理盐水1份 上清液即为放散液 56 水浴轻摇7分钟立即离心 12 放散液中抗体的检测 卡法 ABO HDN放散试验酶处理AC酶处理BC酶处理OC放散液酶A管50 l25 l酶B管50 l25 l酶O管50 l25 lRh HDN放散试验酶处理1号细胞2号细胞3号细胞放散液150 l25 l250 l25 l350 l25 l37 孵育15min 以1030rpm离心10min 观察结果 13 释放试验结果判断 ABO HDN放散试验结果判断酶处理Ac酶处理Bc酶处理Oc意义 释放出IgG抗A抗体 释放出IgG抗B抗体 释放出IgG抗A 抗B抗体或抗A B抗体 释放出ABO血型系统以外抗体 加做谱细胞 未释放出抗体只有当放散液中检出相应抗体 同时新生儿RBC上又存在对应抗原时才认为释放试验是阳性 Rh HDN放散试验结果判断 任何一孔出现凝集则放散出不规则抗体 抗 D 抗体鉴定 3孔均不出现凝集则没有放散出不规则抗体 14 新生儿溶血病检测的结果判断 直抗试验游离试验释放试验结论 不能证实为由血型抗体引起的新生儿溶血病 可疑为新生儿溶血病 可疑为新生