槐米中芦丁超声法和碱溶酸沉法提取比较毕业论文.doc

2011届 分类号： 单位代码 ：10452毕业论文槐米中芦丁超声法和碱溶酸沉法提取比较Comparation of Ultrasonic and Alkali solution and acid precipitation extracted Rutin from Sophora japonica1 摘 要槐花中主要成分为芦丁,又名芸香苷,现在报道的提取方法有很多，本实验主要研究超声提取法与碱溶酸沉法,比较这两种方法提取率高低。超声法是用70%乙醇溶液浸泡槐米粉，在超声清洗器中进行超声处理30min，处理2次，收集滤液，用浓盐酸调节PH值至3，静置，至沉淀完全后，抽滤，收集沉淀得到芦丁粗品，粗品在60-70水浴中溶解，煮沸15min，趁热抽滤，静置滤液，待沉淀完全，抽滤，沉淀在65干燥40min，得到芦丁的纯化物；碱溶酸沉法是用蒸馏水浸泡，加氧化钙1-1.5g，调节PH至8，加热至微沸，保持40min，趁热过滤，浸煮2次，收集滤液，用浓盐酸调节PH至5，静置至沉淀完全，将沉淀在60-70水浴中，溶解，煮沸15min，趁热抽滤，静置滤液，待沉淀完全，抽滤，沉淀在65干燥40min，得到芦丁的纯化物。本实验中碱溶酸沉法比超声法的提取率高。关键词：槐米；超声提取法；碱溶酸沉法；紫外分光光度法；聚酰胺薄膜 ABSTRACT This experiment compared ultrasonic extraction with alkali solution and acid precipitation in extraction rate of rutin. Ultrasonic method is soaked Sophora japonica with 70% ethanol, the ultrasonic cleaner carried out the Sophora japonica with 30 minutes .then filtering the solution and carried out the residue in the ultrasonic cleaner again. Collecting the filtrate in beaker and Adjusting the filters PH to 3 with concentrated hydrochloric acid. Standing the filter and precipitating completely. Collecting the precipitate by the filtration. The precipitate is crude extract rutin. Recrystallizating the crude extract rutin in 60-70 water bath and boiling the recrystallizates solution on electric furnace with 15 minutes. Filtrating the solution when it is boiling and the filtrate aside until the precipitate completely. Filtrating the solution, Then collecting the precipitate. The precipitate dried at 65 in Vacuum oven with40 minutes . Getting the purified rutin. Alkali solution and acid precipitation is soaked Sophora japonica with distilled water, Adding calcium oxide 1.5 g. adjusting the PH to 8, Boiling the Solution with 30 minutes, then filtering the solution and carried out the residue again, Collecting the filtrate in beaker and Adjusting the filters PH to 5 with concentrated hydrochloric acid. Standing the filter and precipitating completely. Collecting the precipitate by the filtration. The precipitate is crude extract rutin. Recrystallizating the crude extract rutin in 60-70 water bath and boiling the recrystallizates solution on electric furnace with 15 minutes. Filtrating the solution when it is hot and the filtrate aside until the precipitate completely. Filtrating the solution, then collecting the precipitate. The precipitate dried at 65 in Vacuum oven with40 minutes. Getting the purified rutin. In this study, the alkali solution and acid precipitation better than ultrasonic extraction.朗读显示对应的拉丁字符的拼音字典Key words: Sophora japonica; Ultrasonic extraction; Alkali solution and acid precipitation; UV spectrophotometry; Polyamide thin-layer chromatography 目 录引言11仪器与材料21.1仪器 21.2 材料 22 方法与步骤 32.1 对照品储备液配制 32.2 标准曲线制备 32.3 超声法提取与纯化 32.4 碱溶酸沉法提取与纯化 42.5 定性鉴定 42.6 含量测定 43 结果与讨论 53.1 标准曲线 53.2 结果 53.2.1定性鉴定结果 5 3.2.2超声法提取法 5 3.2.3碱溶酸沉法 53.2.3提取率结果比较53.3 检测方法选择 53.4 聚酰胺薄膜选择 63.5 实验中问题与讨论 6参考文献 7附录（图） 8致谢 11引言 槐米是豆科植物槐的干燥花蕾，含有大量的蛋白质和类黄酮化合物，其味苦,微寒,具有凉血止血、清肝泻火等功效。槐米中的主要成分为芦丁,此外还有白桦脂醇、槐二醇、槐花米甲乙丙素、鞣质等成分。其有效成分属于黄酮类化合物,而此类化合物在心脑血管疾病的治疗上有着举足轻重的作用。黄酮类物质，广泛存在于健康食物和草本药物中,是一种强有力的抗氧化剂，能防止低密度脂蛋白氧化,从而防止动脉粥样硬化,可以治疗冠心病。有清除自由基、降低血压、降血脂、抗凝血作用、抗菌抗炎、保护心肌缺血再灌注损伤的作用。并具有免疫增强功能,对人卵巢癌、乳腺癌、白血病细胞、胃肠道肿瘤细胞等均有抑制作用1。芦丁又称芸香苷，是其中的一个典型代表，其效用同维生素P。能降低毛细血管通透性和脆性 ,促进细胞增生和防止血细胞凝聚以及抗炎、抗过敏、 利尿、镇咳、降血脂等方面的作用, 临床上芦丁主要用于高血压病的辅助治疗和用于防治因芦丁缺乏所致的其它出血症，如防治脑血管出血、高血压、 慢性气管炎，血液渗透压不正常恢复毛细血管弹性等症， 同时还用于预防和治疗糖尿病及合并高血脂症, 在食品工业中芦丁除了可作保健品外，还可作为抗氧化剂和天然食用黄色素。在化妆品行业，芦丁是目前较为理想的一种天然广谱防晒剂2。 芦丁是由槲皮素C-3位上的羟基和芸香糖结合而形成的双糖苷,在热水、 热醇中均有较大的溶解度；分子中含多个酚羟基，呈弱酸性，易溶于碱。据报道目前提取芦丁的方法主要有水煮法、连续回流法、碱溶酸提法、微波法和超声法。常用的提取溶剂有水、醇、冷酸、冷碱3。本实验采用碱溶酸沉法和超声法提取槐米中的芦丁，比较两种方法在提取芦丁方面的效率。 1、 仪器与材料1.1 仪器紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；循环水多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；HH-S数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）；真空干燥箱（上海-恒科技有限公司）；电子精密天平；超声清洗器；研钵；烧杯；电磁炉；抽滤瓶；布式漏斗；容量瓶；移液管；玻璃棒；量筒；展开槽；聚酰胺色谱；滤纸1.2 材料1.2.1 植物材料槐米（采购）1.2.2 化学材料芦丁标准品（含量95%，国药集团化学试剂有限公司）；甲醇（分析纯，天津恒兴化学试剂制造有限公司）；氧化钙(分析纯，天津恒兴化学试剂制造有限公司）；乙酸乙酯(分析纯，莱阳经济技术开发区精细化工厂)；甲酸(分析纯，莱阳经济技术开发区精细化工厂)；盐酸(分析纯，莱阳经济技术开发区精细化工厂)；氨水(分析纯，烟台双双化工有限公司)；乙醇(分析纯，青岛海滨试剂厂)。2、 方法与步骤2.1 对照品储备液配制精密称取芦丁对照品5.0mg,置于50ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，得到0.1mg/ml的芦丁对照品储备液。2.2 标准曲线的制备分别移取2.5、5.0、7.5、10.0、12.5ml的储备液至25 ml的容量瓶中，用甲醇定容至刻度值,得到浓度分别是0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的标准品。以甲醇为对照品，分别进行紫外吸收，得到标准曲线4。2.3 超声法提取与纯化按照如下方法5槐米粗粉71.30g 按照固液比1：10的比例加入70%乙醇溶液，超声处理30min，抽滤，滤渣再进行一次超声处理。滤液旋转蒸发，直至无醇味，用浓盐酸调节PH值至3，静置2h,进行抽滤，将沉淀干燥，得到芦丁粗提物。沉淀（芦丁粗提物）将粗提物按照固液比1：200的比例加入蒸馏水，在电炉上进行加热，煮沸10min,趁热抽滤。滤液静置，待沉淀完全，进行抽滤。沉淀在65的真空干燥箱中干燥40min。芦丁纯化物。2.4 碱溶酸提法提取与纯化按照如下方法提取纯化5 槐花米粗粉（23.40g）置于500ml烧杯中，加水300ml ,在搅拌下加入石灰乳1.5g,调节PH值为8，加热至微沸，保持30min,趁热抽滤。滤渣再进行一次提取。 滤液在66.7下用浓盐酸调至PH值为5，静置1h ，进行抽滤 沉淀（粗制芦丁）重结晶，将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15min ，趁热抽滤。 滤液充分静置后过滤，在65.2的真空干燥箱中干燥40min. 芦丁（精制品）2.5 定性鉴定在聚酰胺薄膜上，进行点样，展开剂为乙酸乙酯：甲酸：水=8：1：1，展开后用氨进行熏，显示为黄色6。2.6 含量测定 精密称取提取出的芦丁纯化物4.0mg,置于100ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，全部溶解，进行紫外分光光度分析，浓度测定，计算提取物的含量及提取率。3、 结果与讨论3.1 标准曲线在标准品的浓度分别为0.01，0.02，0.03，0.04，0.05mg/ml时，在265 nm的紫外分光光度计中的测量结果0.181，0.281，0.412，0.572，0.705。标注曲线为A=13.386C+0.02837。R=0.9971见图1，23.2 结果3.2.1定性鉴定结果 超声法和碱溶酸提法提取物在聚酰胺薄膜上进行展开，展开后，超声法和碱溶酸提法提取物都有与标准品对应的点，标准品Rf标=0.6122；超声法提取物Rf超=0.6063；碱溶酸提法提取物Rf碱=0.6005，证明提取物中含有芦丁。如图33.2.2超声法提取法共提取纯化的芦丁制品有4.223g，提取品的浓度是0.04mg/ml，通过紫外分光光度计测量的结果是0.0340mg/ml,提取品中芦丁的含量85.00%，在原料中芦丁的提取率为5.03%。见图4、53.2.3碱溶酸沉法共提取纯化的芦丁制品有2.346 g , 提取品的浓度是0.04 mg/ml,通过紫外分光光度计测量的结果是0.029mg/ml,提取品中芦丁的含量为72.5%，在原料中芦丁的提取率为7.27%。见图6、73.2.3提取率结果比较本实验中，碱溶酸提法的提取率为7.27%，超声提取法的提取率为5.03%，碱溶酸沉法的提取率比超声法的提取率高。但是有文献4、6-9报道，超声法的提取率比碱溶酸沉法高，在本实验中可能是在研磨时,没有进行充分的研磨；在超声法提取完后，只进行了两次提取，可能降低了提取率。3.3 检测方法的选择在芦丁的含量测定中，有很多方法，本实验采用紫外分光光度分析的方法，该方法较简单，且在目前的实验室的设备中都能够完成。马国刚等10报道了槐米中芦丁的提取、纯化及铬（Cr3+）配合物光谱表征，芦丁甲醇溶液在265.5nm和367nm处有最大吸收，本实验选用波长265nm处吸收测定。3.4 聚酰胺薄膜的选择聚酰胺为内酰胺的多聚体，其分子内存在着很多酰胺键，可与酚类、酸类等化合物形成氢键，酰胺键内的胺基又可与芳香硝基及醌式化合物中的醌基形成氢键，因此对这些化合物产生了一定的吸附作用，这些化合物与聚酰胺形成氢键能力各不相同，故用聚酰胺薄层板可达到分离效果。芦丁为酚类化合物，化学式如图8，能与聚酰胺形成氢键，产生吸附，达到定性鉴别的目的。 3.5 实验中遇到的问题在进行超声处理时，作为提取原料物的槐米粉一定要进行充分的研磨，只有在充分的研磨之后，提取物才能在超声的作用下充分被提取出，在本次实验中，由于在进行实验前没有进行充分的研磨，导致提取率较低。芦丁显酸性，可与碱成盐而溶于水，加酸使成酸性后，芦丁游离析出。第一步提取出的滤液，在调节完PH值后，静置时，出现的沉淀较少，又滴加了适量浓盐酸，调节PH值到2，在酸的作用下，沉淀大量出现。因此，在本次实验中，溶液的酸碱度影响物质的提取率，调节酸碱度非常重要。在用超声提取法进行芦丁的提取时，滤液中提取了一些色素，在现在用的纯化工艺中，不能把色素给去除，提取物含有颜色，外观不是很好。在滤液静置过程中，应该处于一种低温环境中，因为芦丁在热水中的溶解性也很好，静置的时间一定要足够，在沉淀的过程中，尽量让所有的物质沉淀完全。参考文献1 杨娜,朱开梅,顾生玖，从槐米中提取槲皮素方法的研究进展J，时珍国医国药， 2010，21(12)：3340-33412 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2011年04月19日袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂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