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1 MiR 181bandNF KBInvitroandinvivostudy 2 3 细胞实验一 miR 181b对HUVEC功能影响1 TNF 影响miR 181b表达 A Real timeqPCRanalysisofmiR 181binresponsetoTNF 10ng ml inHUVECs 短时间作用不同时间点作用 4 2 TNF 作用下 miR 181b影响HUVEC粘附因子表达 5 蛋白 mRNA 细胞上清三个层面证明 ICAM 1 VCAM 1 E selectin是影响ECs与WBC粘附的主要分子 6 3 TNF 作用下 miR 181b影响细胞粘附 7 细胞实验二 miR 181b靶点的确定1 TNF WB筛查靶点 只使用了miR 181b m及对照 8 2 荧光素酶报告系统实验 1 仅使用miR 181b 2 载体使用浓度梯度3 用真核细胞表达载体将miR 181b导入细胞 9 3 miR 181b与靶点结合区域的确认 D Normalizedluciferaseactivityofareportercontaining3 UTRofimportin 3 predictedmiR 181b bindingsites ormutatedmiR 181b bindingsites ThereporterwascotransfectedwitheitherpcDNA3 1emptyvectororpcDNA3 1 miR 181b P 0 05 10 4 miRNP IP分析靶点mRNA富集 E miRNP IPanalysisofenrichmentofimportin 3mRNAinHUVECstransfectedwithmiRNAnegativecontrolormiR 181bmimics P 0 01 11 12 细胞实验三 miR 181b对下游通路的作用1 荧光素酶报告系统检测miR 181b对NF B及VCAM1影响 TNF 条件下 HUVECs中miR 181b对NF B活性及VCAM1promoter活性的影响 13 2 miR 181b通过作用于靶蛋白影响NF B活性 F LuciferaseactivityofreporterscontainingtheNF BconcatemerincellstransfectedwithmiRNAnegativecontrolormiR 181bmimicsintheabsenceorpresenceofimportin 3genelackingits3 UTR P 0 05 14 3 miR 181b对HUVECsNF B活性的影响 15 4 TNF miR 181b影响NF B下游mRNA表达 瞬时转染稳定转染 16 3 对下游蛋白表达的影响 17 Invivo1 miR 181b对粘附因子表达的影响 VCAM 1mRNA及蛋白水平检测 尾静脉注射 瞬时转染 18 V
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