艾滋病样品采集处理PPT课件.ppt

HIV检测 HIV抗体检测ELISA快速HIV检测免疫印记法 WesternBlot 其他方法 免疫荧光法 IFA 放射免疫沉淀实验HIV核酸定性检测HIVRNA定量测定 病毒载量测定 CD4 和CD8 T淋巴细胞检测HIV抗原检测 p24 1 样品的采集 艾滋病检测最常用的样品是血液 包括血清 血浆和全血 唾液或尿液有时也可作为测试样品 常用样品的采集方法如下 一 血清样品采集 用一次性注射器 或真空采血管 抽出一定量静脉血 一般为5mL 放入一次性塑料试管 室温下自然放置1 2小时 待血液凝固和血块收缩后再用3000rpm离心15分钟 吸出血清备用 2 二 抗凝血样品采集 用加有抗凝剂的真空采血管或用一次性注射器抽取静脉血 转移至加有抗凝剂的试管 反复轻摇 分离血浆和血细胞备用 应根据实验要求选用适当的抗凝剂 如CD4 CD8 T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠 HIV病毒分离 核酸定性 定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠 因为肝素是Taq酶的强抑制剂 会使核酸检测出现假阴性结果 如需进行病毒RNA测定 采集的抗凝血应在4 8小时以内分离血浆 3 三 采样注意事项1 采集样品应按临床采血技术规范操作 试剂盒说明书有特殊要求除外 2 采集标本时应注意安全 直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层乳胶手套 建议采用真空采血管及蝶形针具 以免直接接触血液 3 进行静脉抽血时 一定要保证足够的光线 而且采血人员应背靠墙壁 后面不能有人员走动 以防抽血时碰撞 造成意外刺伤 4 4 不要把用过的锐利器具 针头 传递给别人 5 对用过的针头不要用手去重新盖上针套 不要用手从一次性注射器上移去针头 不要用手弯曲 折断或处置用过的针头 6 用过的注射器及针头直接放到可防止锐利器物刺穿的专门容器中 统一进行高温消毒 115 30分钟 然后深埋处理 5 7 其它废弃物 酒精棉球 手套 要在作高温焚烧处理 8 不要将锐利废弃物 针头 同其它废弃物 酒精棉球 混在一起 9 不要将锐利废弃物放在儿童可以接触到的地方 10 用肥皂和水认真洗手 11 采样人员要带乳胶手套 穿隔离衣 避免直接接触体液 12 处理废弃物的人必须戴厚质乳胶手套 6 样品的保存用于抗体检测的血清或血浆样品应存放于 20 以下 短期 1周 内进行检测的样品可存放于2 8 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于 20 以下 进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于 80 用于CD4 CD8 T淋巴细胞测定的样品不能长期保存 样品采集时间超过48h则不可检测 7 样品的运送 实验室间传递的样品应为血清或血浆 除特殊情况外一般不运送全血 应采用WHO提出的三级包装系统 第一层容器 装样品 要求防渗漏 样品应置于带盖的试管内 试管上应有明显的标记 标明样品的编号或受检者姓名 种类和采集时间 在试管的周围应垫有缓冲吸水材料 以免碰碎 随样品应附有送检单 送检单应与样品分开放置 8 样品的运送 第二层容器 要求耐受性好 防渗漏 容纳并保护第一层容器 可以装若干个第一层容器 将试管装入专用带盖的容器内 容器的材料要易于消毒处理 第三层容器 放在一个运输用外层包装内 应易于消毒 在第三层容器外面要贴标签 数量 收 发件人 9 10 11 三层包装的优点 减少包装受损和泄漏的可能性减少可能造成传染的暴露提高运输效率 12 2019 12 31 13 样品的运送 血清和血浆样品应在2 8 条件下由专人运送 用于CD4 CD8 T淋巴细胞测定的样品应在室温下18 23 运送 每一包装的体积以不超过50ml为宜 运送感染性材料必须有记录 如分离血浆仍有困难 可直接将抗凝血 20 以下冻存 采用冰壶冷藏运输 避免冻融 14 样品的运送 特殊情况下如需对个别样品进行复测 可以用特快专递形式投寄 但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好 避免使用玻璃容器 以保证不会破碎和溢漏 15 注意事项 样品管应为螺旋口的塑料管 1 5ml 检查有无破损 将螺旋盖旋紧 防止样品渗漏 血清样品量至少应大于500 l 禁止使用扳盖式Eppendorf管 建议第一层 螺旋口的塑料管 1 5ml 第二层 血清盒 5份或5份以下可以使用一次性乳胶手套 每个手指放一个 第三层 冰瓶 内置冰块 禁止第二层使用封口塑料袋送检单内容应填写完备 包括婚姻状况和文化程度等 详见附表2 其中送检人群一栏基本参照附表4人群分类填写 其中献血员指 无偿献血员 有偿献血员归入 有偿供血 浆 者 16 注意事项 送检标本应使用真实姓名和地址 不采用匿名制 标本采集时应尽量避免溶血 因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果 可造成假阳性 长菌的标本同样的道理易产生假阳性 抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性 建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂 标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG聚合 使间接法的试剂本底加深 一般血清置4 冰箱5天内完成测试 17 样品的接收 含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的 穿戴防护衣的工作人员打开 用后的包裹应进行消毒 核对样品与送检单 检查样品管有无破损和溢漏 如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出 对样品管和盛器消毒 同时报告有关领导和专家 18 样品的接收 检查样品的状况 记录有无严重溶血 微生物污染 血脂过多以及黄疸等情况 如果污染过重或者认为样品不能被接受 则应将样品安全废弃 并要将样品情况立即通知送样人 打开标本容器时要小心 以防内容物泼溅 样品处理时若内容物有可能溅出 则应在生物安全柜中戴手套进行 同时应戴口罩 防护眼镜 以防皮肤或粘膜污染 19 样品的接收 因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试 接收样品时应填写样品接收单 并注明样品状况 送检单有无缺项 确认后交接双方签字 一式两份 20 初筛阳性复检单填写注意事项 送检标本量不得少于300微升 送检标本时必须同时附有送检单 送检单应采用省疾病预防控制中心统一下发的送检单格式 包括婚姻状况和文化程度 送检样本管壁上必须有受检人的姓名 并与送检单上的姓名保持完全一致 对于确实无法获得姓名的特殊标本 样本管上的编号必须与送检单上的编号一致 21 初筛阳性复检单填写注意事项 送检单上的各项信息要尽可能详细 要有姓名 性别 年龄 不得擅自改为出生年月 地址 送检人群 国籍或民族 职业 婚姻状况 文化程度 特别是S CO 6的强阳性标本要做到随访前置 送检单上一定要有姓名 性别 年龄 地址和送检人群的详细资料 确实无法获得相关信息的要在备注栏中说明原因 送检人群分为有偿供血 浆 者 性病病人 感染者配偶 性伴 吸毒者 受血或输注血液制品者 同性恋者 无偿献血员 娱乐场所服务人员 嫖客 异性性接触者 职业暴露者 出入境体检者 22 初筛阳性复检单填写注意事项 自愿检测者应对其进行人群类型评估 并同时注明属于上述哪个人群 无法归入上述