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淋球菌培养及鉴定 黄景维2014 10 31 什么是淋球菌 共同点 革兰阴性球菌 单个或成双排列 无芽孢 无鞭毛 有菌毛触酶试验 氧化酶试验 不同点 对糖分解能力 硝酸盐还原能力和DNA合成酶 淋球菌即淋病奈瑟菌 属于奈瑟菌属 淋球菌形态 淋球菌 是一种革兰阴性双球菌 呈卵圆形或肾形 成对排列 直径约0 6 0 8 m 常位于多形核白细胞的胞浆内 慢性期则在细胞外 生长适宜温度为37 38 淋菌不耐热 干燥环境存活1 2小时 55 5分钟立即死亡 附着在衣裤和卧具上的淋菌最多只能生存24小时 一般消毒剂易将其杀死 淋球菌形态 致病性 传染方式 成人性接触初生婴儿患病母亲产道感染致病物质 菌毛外膜蛋白PI 中性粒细胞受损外膜蛋白PII 黏附外膜蛋白PIII 阻抑抗体活性IgA1酶 破坏粘膜局部抗体 所致疾病 男性 急性淋菌性前尿道炎女性 淋菌性宫颈炎 尿道炎初生婴儿 脓漏眼发展 男性 后尿道炎 前列腺炎 精囊炎 附睾炎等女性 子宫内膜炎 输卵管炎等后遗症 不育 不孕 异位妊娠 淋球菌感染 淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系统感染 不仅可引起男性尿道炎 女性宫颈或尿道炎 还可经血行播散引起菌血症 临床表现因感染的人群不同 部位不同而有差别 实验室鉴别淋球菌 直接涂片 取尿道或宫颈脓性分泌物涂片 作革兰染色 镜下可见大量多形核白细胞 细胞内可见数量不等的革兰阴性双球菌 涂片对女性检出率低 有假阴性 必要时应作培养 细菌培养 标本在选择性培养基上培养 可出现典型菌落 氧化酶试验阳性 镜检可见到革兰阴性双球菌 还可用检测淋球菌DNA 直接免疫荧光试验协助确诊 淋球菌培养 淋球菌是淋病的病原菌 为实验室确诊淋病提供依据 培养法为确诊淋病的金标准 淋球菌药敏试验 测定药物抑菌或杀菌能力 以便准确有效利用药敏进行治疗 淋球菌培养条件 淋球菌的营养要求较复杂 所用的培养基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的各种因子 目前国内常用的是血液琼脂或巧克力琼脂 国外常用的培养基有Thayer Martin T M 培养基 NewYorkCity NYC 培养基和Martin Lewis ML 培养基等 T M培养基 T M培养基是在GC基础培养基中 加入血红蛋白 1 抗生素 万古霉素3g ml 粘菌素7 5g ml和制霉菌素12 5g ml 和淋球菌增菌剂 使绝大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大 在乎皿中几乎呈纯培养 从而大大提高了由子宫颈 尿道 尤其是咽和直肠部位分离出淋菌的阳性率 淋球菌培养条件 淋球菌对外环境变化颇为敏感 对寒冷和干燥抵抗力很弱 因此 为了保证培养有足够的成功率 取材后应立即接种 标本离体时间越短越好 培养的最适温度为35 37 超过38 5 或低于30 便生长不良 因此 孵育的温度要恒定 淋球菌为需氧菌 但最初从人体分离时 为促进生长 需用5 二氧化碳环境培养 淋球菌培养关键 取材部位准确女性病人标本 取宫颈内膜分泌物男性病人标本 取尿道口脓性分泌物培养基预温立即接种最好床边接种合适的培养基CO2培养 淋球菌鉴定 分泌物 直接涂片染色 分离培养 可疑菌落 涂片染色 生化反应 初步报告 生长特性 平板生长特性 经24h 48h的培养后 可形成圆形 凸起 湿润 光滑 半透明或灰白色菌落 似露水珠 易乳化 直径为0 5mm 1 0mm 平板生长形态 镜检形态 从菌落上取材作涂片 革兰染色后可见到菌的大小及染色的深度有差异 排列也不一致 呈典型革兰阴性双球菌 镜检形态 镜检形态 来自泌尿生殖道符合初步鉴定标准的分离株 一般可诊断为淋球菌 准确率达98 对于菌落形态不典型的分离株 来自咽部 眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分离株 应作确诊试验 鉴定试验 氧化酶试验糖分解试验 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 30 过氧化氢试验 鉴定依据 形态染色典型 革兰阴性球菌培养特性 光滑 湿润 易乳化菌落生化反应 氧化酶阳性 仅分解葡萄糖 麦芽糖 乳糖 蔗糖 果糖均不分解 奈瑟菌属鉴定 奈瑟菌属与布兰汉菌属的鉴别注意 d 表示不定 分泌物 男性确诊女性 其他标本