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文档简介

PCR原理与方法及其应用 主要内容 PCR概念PCR原理PCR技术参数PCR操作步骤PCR应用PCR维护与保养 一 PCR概念 PCR又称聚合酶链式反应 polymerasechainreaction 是通过模拟体内DNA复制的方式 在体外选择性地将DNA某个特殊区域扩增出来的技术 二 PCR的原理 在微量离心管中 加入适量的缓冲液 微量的模板DNA 4种脱氧核糖单核苷酸 耐热性多聚酶 一对合成DNA的引物 通过高温变性 低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环 每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍 一般样品是经过30次循环 最终使基因放大了数百万倍 扩增了特异区段的DNA带 1 反应体系 总体积25 100 lDNA分子模板dNTP原料Primer引物Buffer缓冲液Taq酶DNA聚合酶 2 循环参数 94 30 50 60 30 1 72 n 94 96 30 5 72 3 7min 4 10 forever 25 30循环 模板DNA 3 PCR原理动画 PCR的基本原理 PCR反应条件PCR过程PCR的特点 引物1 引物2 PCR的基本原理 PCR反应条件PCR过程PCR的特点 引物1 引物2 Taq酶 Taq酶 PCR的基本原理 PCR反应条件PCR过程PCR的特点 第1轮结束 第2轮开始 PCR的基本原理 PCR反应条件PCR过程PCR的特点 Taq Taq Taq Taq PCR的基本原理 PCR反应条件PCR过程PCR的特点 第2轮结束 PCR的基本原理 PCR反应条件PCR过程PCR的特点 模板DNA 第1轮扩增 第2轮扩增 第3轮扩增 第4轮扩增 第5轮扩增 第6轮扩增 三 PCR技术参数 以本实验PCR仪为例 杭州朗基科学仪器有限公司型号 A200序列号 001 60380模块类型 9677温度范围 0 99 9 热盖温度 0 112 最大升温 降温 速度 0 5 s 旋钮 热盖 触摸屏 通风口 USB A口 手柄 开关 电源接口 通风口 USB B口 网络接口 使用注意事项 热盖 热盖可以降低温度来压紧反应容器 并通过加热使反应容器上部保持在比样品更高的温度以防止反应样品冷凝 43 打开热盖 关闭热盖 样品台的更换 开机与关机 仪器长时间不用时拔掉电源插头 开机几秒后出现主界面 五 PCR操作步骤 以本实验室PCR仪为例 生物样品 DNA片段 基因诊断 基因治疗 基因工程产品 法医学检测 人类学研究 PCR技术诞生所依赖的社会需求和研究需要 五 PCR应用 基因组DNA 获取特定DNA片段 扩增特定DNA片段 1 基因克隆 基因工程产品 2 基因检测 A 内源性病变基因 正常人 A 病人 病原微生物基因 正常人 病人 遗传病的诊断 基因缺失 插入或置换等 地中海贫血 珠蛋白链合成不平衡 A 正常人 病人 正常 病人 六 PCR维护与保养 1 定期检测 半年至少1次2 温度 反应温度 实际
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