API细菌鉴定系统件.ppt

API微生物鉴定系统 全球金标准 细菌鉴定的重要性 疾病的评估 找出食物变质的原因 从而制定预防的步骤 确保用药治疗洽当 环境控制 流行病学的基础 常规鉴定所遇的困难 分类学复杂及进化 涉及很多生化项目 工业微生物容易出现变异 结果处理及计算麻烦 所引用的分类学方法国际认可 InternationalJournalofSystematicBacteriology资料库 整个系统的心脏 API系统 API系统 美国FDA的细菌鉴定标准欧洲药典的细菌鉴定标准国标 标准化 简易化 在制造过程中 进行质控 FDA标准 用户可用ATCC菌种进行质控 系统化 操作简易 快速报告 30多年的经验 拥有菌种资料 25000 鉴定系统的发源生化测试 750 1500多篇使用文献 API的优点 API鉴定原理 生理生化鉴定 根据微生物对各种生理条件 温度 pH 氧气 渗透压 生化指标 唯一碳氮源 抗生素 酶 盐碱性 代谢反应进行分析 并将结果转化成软件可以识别的数据 进行聚类分析 与已知的参比菌株数据库进行比较 最终对未知菌进行鉴定的一种技术 API微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础 借助微生物信息编码技术 为微生物检验提供了简易 方便 快捷 科学的鉴定程序 微生物鉴定 完整的鉴定谱 球菌 杆菌 接触酶 革兰氏 氧化酶 革兰氏 杆菌 球菌 庞大资料库15种试条 600种细菌可被鉴定研究用试条 乳酸杆菌 芽胞菌 弯曲菌 API鉴定范围 API试剂类别 API20E RapiD20E革兰氏阴性杆菌鉴定API20NE非发酵菌鉴定APISTAPH葡萄球菌及微球菌APISTREP链球菌鉴定API20CAUX酵母菌API20A厌氧菌APILISTERIA李斯特菌APICAMPY弯曲菌属APICORYNE棒状杆菌APICH芽胞杆菌 乳酸杆菌 API系统 构成 试条由特別选择的生化反应小管API试条有多种类各有相应的数据库所有生化结果以同时间一并阅读 API套件 API试剂盒及其配套试剂 培养盒保持潮湿环境 石腊油 容量 125ml 覆盖在指定小孔上 悬浮液 容量 5ml 用於调菌液 附加试条加进指定的生化孔内 API试条每个小孔载有风乾的底物 PSIpettes接种管挑菌落 混匀及接种 安培架 操作步骤1 API20E 分离单个菌落挑单个可疑菌落尽量避免使用高度选择性培养基 调制菌液 悬浮液 容量 5ml 操作步骤2 API20E 将菌液接种到小管或小管及小杯 CIT VP和GEL 将试条放进培养盒内 将5ml无菌水放进培养盒里 利用石腊油覆盖指定的生化孔 有划线的孔 ADHODCH2SURE 把培养盖盖上 操作步骤3 API20E 把试条放进孵育箱内 利用指定温度及时间API20E 35 37oC 18 24小时 按操作说明书规定 将附加试剂加进适当小孔内 api20E试剂 18 24小时後 API试剂条 24小时出结果 阅读结果 利用编码手册或APILABPLUS软件进出分析 根据说明书上 或彩图的指示 记录结果於报告单上 全Windows操作界面 多种语言 API结果原理 生化结果组合跟资料库內的典型条目 Taxa 作出比较 经计算後 鉴定百比率 Id 机会率 指示出不同菌类的比较T值 Tindex 指示出在同一个菌类的相似程度 API结果跟据T值及 Id的组合 作出评语 i 极好的鉴定结果 Id 99 9及T 0 75 ii 很好的鉴定结果 Id 99 0及T 0 50 iii 好的鉴定结果 Id 90 0及T 0 25 iv 可以接受的鉴定结果 Id 80 0及T 0 v 可疑的生化谱 不断更新的数据库 分类学的进化 新的菌种发现 生化反应的演进 鉴定菌种需要的改变 API与日俱进 定向试验 在细菌学里最普遍的染色方法 革兰氏染色液 步骤 G G 染色前 所有细胞是透明的 结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合 乙醇从G 菌体洗脱结晶紫 用番红液复染 革兰氏阴性菌呈粉红色 革兰氏阳性菌呈兰紫色 革兰氏染色 原理 检查细菌细胞壁的渗透性 单层厚钛聚糖细胞壁 不紧密外壁层 透乙醇 薄内壁层钛聚糖 革兰氏阳性革兰氏阴性 革兰氏染色液2 ColorGram2 特性稳定化的碘液PVP 聚氯乙烯吡咯烷酮 可以防止因碘挥发而变质 同时也增强了媒染效果 更容易分别G 及G 菌高质量的结晶紫和番红 无沉淀 接触酶试验 接触酶试验 用于分辨葡萄球菌及链球菌 葡萄球菌 革兰氏阳性球菌 链球菌 接触酶 接触酶 H2O2H2O O2 接触酶试验 传统方法 接触酶 接触酶 原理 试管法 玻片法 H2O2 O2 菌落 接触酶显色剂 玻片法 试管法 IDColorCatalase接触酶试剂 容许於平板 包括血平板 上作直接检测 组成 增稠剂 高粘度集中所产生的气泡 防止试剂扩散 Evans兰 兰色使结果更容易阅读 玻片法 直接在平板上测试 IDCOLORCATALASE接触酶试剂 玻片法 将待检菌落乳化於一滴试剂中直接平板测试 将一滴试剂直接滴於平板上的菌落 步骤 或 即时产生气泡 5秒内 代表阳性结果 鉴定用接触酶显色剂 接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应 由於传统方法的弱阳性结果 这个试验没有得到充分应用 IDColorCatalase 产品规格 氧化酶试验 氧化酶试验 用于分辨肠道杆菌及非发酶菌 氧化酶试验 原理 TMPD 氧化TMPD 氧化酶 TMPD 2甲基一对一苯撑二胺 深紫色 透明 氧化酶纸片法 液体API氧化酶试剂 试剂方法 用2个试管载1 2ml无菌水 第一管为阴性对照 加一滴OX试剂 第二管为测试管 加可疑菌落然後再加二滴OX试剂 比较二支管的颜色 阴性对照 透明 浅紫色 结果 OX 透明 浅紫色OX 紫色 深紫色 结果阅读 菌落 等待10到30秒钟 阳性 紫色 深紫色 OXIDASE氧化酶试剂 原理 对葡萄糖 Glucose 的发酵 F 或氧化 O 代谢的产酸试验 显色剂会把培养基从绿色转为黄色 OF培养基 操作规程 步骤1 接种前把OF培养基在沸水浴溶解 步骤2 在室温冷却后 每试验分装2个安培的固体OF培养基 步骤3 利用接种针挑单个菌落 穿刺到OF培养基 深度约1cm 步骤4 把其中一个已接种好的安培 OF F 用石爉油覆盖1cm 把两个安培盖上朔料帽 培养35 37 C 24 48小时 OF培养基 结果阅读 O F O F O F oil 发酵菌 非发酵菌 低活性 OF培养基 原理 使用半固体培养基 含低瓊脂 明胶 让高活力的微生物在穿刺线周围扩散生长 操作规程 步骤1 接种前把M培养基在沸水浴中溶解 最长5分钟 步骤2 在室温冷却后 利用挑单个菌落 穿刺M培养基 步骤3 培养35 37 C 24 4小时 部分细菌孵育22 25 C M培养基 结果阅读 有动力 无动力 M培养基 用于分辨 Staphaureus 金葡球菌 Staphhyicus 猪葡萄菌 Staphintermedius 中间 COAGULASECOAGULASEPOSITIVE 凝固酶 NEGATIVE 凝固酶 其他葡萄球菌 凝固酶实验 革兰氏阴性杆菌分类 氧化酶 非发酵菌鉴定API20NE 肠道杆菌鉴定API20E API20E及API20NE 革兰氏阴性杆菌例子 大肠杆菌x1000 革兰氏阴性弧菌例子 x1000 革兰氏阳性杆菌分类 触酶 触酶 短小脱色含有异染颗粒slightdiscoloration granulations 短球杆菌 延长状杆菌 细小不透光菌落 20 25 C有动力37 C无动力 李斯特菌鉴定APIListeria 乳酸菌鉴定API50CHL 棒状杆菌鉴定APICoryne 大体积产芽孢杆菌 芽孢菌鉴定API50CHB APIListeria及API50CHB 革兰氏阳性产芽孢杆菌