免疫复合物及检测PPT课件.ppt

免疫复合物及检测 1 当Ag在体内持续存在或由微生物与宿主细胞不断释放入细胞外液时 可引起特异性Ab产生 从而形成免疫复合物 一 免疫复合物含义及形成 一 含义 immunecomplex IC它主要指AgAb复合物及AgAbC复合物两种 2 二 IC的形成 1 Ag持续存在于体内 产生Ab 形成AgAb或AgAbC 感染 是Ag持续存在于体内的最常见原因 如细菌 病毒 寄生虫感染 组织Ag 自身组织的部分成分发生变异 如DNA IgG等 外源性Ag 在生活 工作环境中接触的外来性物质如粉尘 药物等 肿瘤Ag 如白血病等 3 2 IC的清除受阻 形成的IC一般分为大分子IC 中等大小的IC及小分子IC三种 大分子IC 沉降系数为19S MW 100万 易被巨噬细胞吞噬而清除 小分子IC 可溶性 沉降系数 6 6S MW 50万 易被肾小球滤过而排除 中等大小的IC 沉降系数在8 8S 19S间 MW在50 100万间 既不易被巨噬细胞吞噬也不易被肾小球滤过 而沉积在血管壁 肾小球基底膜处 形成免疫复合物病 4 二 免疫复合物病 一 致病机理 中等大小的IC沉积在体内 通过激活补体 激活血小板而致病 激活补体 a 激活C3a C5a C567 趋化嗜中性粒细胞 释放溶酶体酶 引起组织损伤 b 激活C3a C5a 过敏毒素 作用于肥大细胞和嗜碱性粒细胞 释放血管活性物质 血管通透性增加 引起组织水肿 5 激活血小板 与血小板上的IgGFc受体结合 使血小板聚集 微血栓形成 局部出血缺血 坏死 6 7 常见病损部位肾小球 关节 皮肤 8 二 所致疾病内脏毛细血管炎 如急性肾小球肾炎 变态反应性肺泡炎 溃疡性结肠炎关节炎 风湿性关节炎 类风湿性关节炎 皮肤 皮肤炎 脉管炎 全身 SLE 9 血清病 10 类风湿性关节炎 体内变性IgG刺激机体产生抗体 称为类风湿因子 IgM型 形成IC 沉积于全身小关节滑膜处 引起小关节红肿 变形僵直 失去运动功能 11 系统性红斑狼疮 细胞核物质 如DNA RNA 核内可溶性蛋白 刺激机体产生抗核抗体 形成IC 沉积于全身毛细血管 关节滑膜 心脏瓣膜等处 引起全身性损伤 12 三 IC检测方法的分类 一 局部组织中IC的检测 制备局部组织切片 用光学显微镜或电镜检测IC所致典型病理改变 或用IF 免疫酶技术检测IC在组织中的沉着 二 循环中IC的检测 Circleimmunecomplex 简称CIC CIC检测方法大致分为两类 13 1 抗原特异性方法 利用IC中Ag的特异性而设计的方法 但由于每一待测标本中Ag的特异性是不同的 不同Ag就需不同方法进行检测 造成方法不统一 因此临床上使用较少 2 抗原非特异性方法 利用CIC与游离的Ag或Ab相比较 在物理性质 生物学活性上的差异而设计的方法 14 根据物理性质上的差异而设计的方法 A 根据CIC与游离的Ag或Ab分子大小不同而设计的方法 凝胶过滤超滤法 蔗糖密度超速离心法 B 根据CIC与游离的Ag或Ab溶解度不同而设计的方法 聚乙二醇 PEG 沉淀试验 15 根据生物学性质的差异而设计的方法 A 根据C1q CIC AgAb 而设计的方法 抗补体试验 C1q结合试验 B 根据IgGFc受体 CIC AgAb 而设计的方法 血小板凝集试验 C 根据C3b受体 CIC AgAbC 而设计的方法 Raji细胞试验 16 四 IC检测方法概述 1 聚乙二醇 PEG 沉淀试验 原理 PEG为水溶性多聚体 在3 4 低浓度时 能使血清中CIC沉降 17 方法 PEG 待测血清 使PEG终浓度达到3 4 4 过夜离心 取出沉淀 将沉淀用NaOH溶解 在分光光度计上测定OD A 值 18 优缺点 该试验不但可检测IC 还可获得IC 收集沉淀 简单 快速 特异性差 易受血清中大分子物质干扰 常作为CIC检测的粗筛试验 19 2 抗补体试验 原理 C1q IC方法 豚鼠血清 含补体 待测血清 56 1h灭活其中补体 再加入致敏羊红细胞 不溶血溶血 IC阳性 IC阴性 20 21 优缺点 该试验敏感 干扰因素多 易出现假阳性凡引起补体失活的原因都可引起假阳性 因此豚鼠血清必须保持新鲜 待测血清在56 1h灭活自身补体时 对其中的Ig构型有改变 可引起Ig聚集代替IC而与C1q结合 出现抗补体活性 22 3 C1q结合试验 原理 C1q IC方法 待测血清 灭活补体 同位素标记的C1q PEG 使IC沉降 测定沉淀物中的放射活性优点 对IC的检测既可定性又可定量 重复性好 结果客观 缺点 易出现假阳性 C1q不但能与IC结合 还能与血清中鱼精蛋白 C反应蛋白结合 23 4 血小板凝集试验 原理 IC 血小板上的IgGFc受体 血小板凝集方法 待测血清 血小板若出现凝集 则待测标本中含有IC 若不出现凝集 则待测标本中无IC 特点 由于不同个体血小板对IC的敏感性不同 所以实际运用时 至少需要三份不同个体的混合血小板 可出现假阳性 高浓度的Ig 凝血酶 蛋白溶解酶 胶原等都可使血小板凝集 24 5 Raji细胞试验 原理 Raji细胞是一种有B细胞特征的淋巴母细胞样细胞 由Burkitt氏淋巴瘤衍变而来 其表面无SmIg 含有大量的补体受体 尤其是C3b受体 该法仅适用于检测AgAbC复合物 方法 待测血清 Raji细胞孵育 洗涤 加入同位素标记的抗人IgG 离心 洗涤 检测沉淀细胞的放射活性 25 五 IC检测的有关技术问题 到目前为止 所有检测IC的试验 还没有另人满意的标准化措施 在体外制备的IC还很不稳定 因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜 目前普遍应用的标准品是HAHG 热聚合人IgG 不是真正的IC 26 检测IC的理想方法 操作简便 敏感 可检测各种类型IC 能分析IC的大