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微生物基础知识培训 微生物实验室主讲 司徒梦仪 培训内容 微生物概述洁净区微生物的控制了解微生物的监测 微生物概述 什么是微生物 微生物概述 微生物是一类肉眼不能直接看见 必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍 几千倍甚至几万倍才能观察到的微小生物的总称 微生物概述 微生物特点 微生物 分布广 种类多 体积小 繁殖快 代谢强 易变异 微生物概述 微生物分类按其结构 化学组成可分为 原核细胞型微生物真核细胞型微生物非细胞型微生物按其致病性可分为 病原性微生物 有致病性 非病原性微生物 无致病性 微生物概述 原核类 仅有原始核质 无核仁或核膜 细胞器很不完善 如细菌 放线菌 螺旋体 支原体 衣原体 立克次氏体 细菌 是一类细胞细而短 直径一般为0 5 5 0 m 结构简单 细胞壁坚韧 以二分裂方式无性繁殖的原核微生物 分布广泛 生长最适温度为30 35 主要去除方法有紫外杀菌法 滤膜过滤法及高温杀灭法等 个别细菌如 嗜热脂肪芽孢杆菌 能在121 条件 可耐受4 5min 微生物概述 真核类 细胞核的分化程度较高 有核膜 核仁和染色体 细胞器完整 如真菌 酵母菌和霉菌 真菌 是一类有细胞壁 无叶绿素 以寄生或腐生方式生存 少数为单细胞 多数为多细胞 能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物 包括单细胞与多细胞两类 单细胞真菌呈圆形或卵圆形称为酵母菌 多细胞真菌由菌丝和孢子组成 称为丝状菌或霉菌 真菌生长的最适的温度为23 28 一般加热60 70 1小时即被杀死 用一定浓度的酒精及甲醛也可杀死 微生物概述 各种病原真菌的菌落 青霉的菌落 青霉的菌落 微生物概述 各种曲霉的菌落 微生物概述 酵母菌的细胞形态 酵母菌的细胞形态 酵母菌细胞结构的显微照片 微生物概述 各种酵母菌的菌落 啤酒酵母的菌落 红酵母的菌落 微生物概述 非细胞类 体积微小 能通过除菌过滤器 如病毒和朊病毒 病毒 属非细胞型微生物 在自然界分布非常广泛 可在人 动物 植物 真菌和细菌中寄居并引起感染 病毒是体积最小 结构最简单的微生物 它仅有一种核酸 DNA或RNA 作其遗传物质 微生物概述 控制菌 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌在自然界中分布广泛 空气 水 地面 物体表面 人和动物的体表 粘膜等处均有存在 食品药品中生长有金黄色葡萄球菌 是食品药品卫生的一种潜在危险 因为金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素 食后能引起食品中毒 微生物概述 金黄色葡萄球菌 微生物概述 控制菌 金黄色葡萄球菌繁殖条件金黄色葡萄球菌能在12 45 生长繁殖 最适生长温度为37 特征伤口化脓的地方 口 鼻子等处繁殖 污染来源于手指的可能性很高 产生的毒素 非常耐热 预防 手指处有伤口 化脓口的人 不要直接接触产品 彻底对手指进行洗净消毒 佩戴手套 要戴帽子 戴口罩 杀灭条件加热80 30分钟才能杀死 煮沸可迅速使它死亡 微生物概述 控制菌 沙门氏菌沙门氏菌常在动物中广泛传播 人的沙门氏菌感染也非常普遍 世界上沙门氏菌的食物中毒占首位 因此 检查食品药品中的沙门氏菌非常重要 生存环境沙门氏菌在水中不易繁殖 但可生存2 3周 冰箱中可生存3 4个月 在 25 可存活10个月 在自然环境的粪便中可存活1 2个月 繁殖条件沙门氏菌最适繁殖温度为37 在20 以上即能大量繁殖 因此 低温储存食品是一项重要预防措施 污染渠道沙门氏菌的来源主要是患病的人和动物 及人和动物的带菌者 其中在肉类中最为多见 杀灭条件沙门氏菌对热及外界环境的抵抗力属于中等 60 20 30分钟75 5分钟即被杀死 100 立即被杀死 微生物概述 沙门氏菌 微生物概述 沙门氏菌 微生物概述 控制菌 大肠菌群大肠菌群为人和动物肠道中的常居菌 在一定条件下可引起肠道外感染 生存环境大肠菌群在自然界中分布广泛 在15 46 均可生长 最适生长温度为37 在水和土壤中大量存在 对自然环境有较强的抵抗力 主要污染的食品是肉类 水产品 蔬菜等 85 热水1 3分钟灭菌 微生物概述 大肠菌群 微生物概述 大肠菌群 微生物概述 控制菌 铜绿假单胞菌原称绿脓杆菌 在自然界分布广泛 为土壤中存在的最常见的细菌之一 各种水 空气 正常人的皮肤 呼吸道和肠道等都有本菌存在 本菌存在的重要条件是潮湿的环境 铜绿假单胞菌感染可发生于很多解剖部位 包括皮肤 皮下组织 骨 耳 眼 尿路和心脏瓣膜 微生物概述 铜绿假单胞菌 微生物概述 微生物分布微生物在自然界的分布 土壤 是微生物生活的最适环境 土壤中的微生物又可分为如下几类 细菌 占土壤微生物总数的70 90 放线菌 占土壤中微生物含量的5 30 霉菌 主要生活在靠近地面的土壤中 在通气良好的土壤中 霉菌数量很多 酵母菌 普通土壤中酵母菌含量很少 微生物概述 微生物分布水 仅次于土壤的微生物分布 定居的第二场所 90 为革兰氏阴性菌 主要有假单胞菌 黄杆菌等空气 空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘 这类微生物大多数是腐生性的 还来源于人和动物 它们大多数是通过呼吸道排出的 其中也包含有病原微生物 悬浮在大气中 微生物概述 微生物在人体中的分布 微生物概述 人体中的微生物部位常见菌种皮肤表皮葡萄球菌 类白喉杆菌 绿脓杆菌 耻垢杆菌等口腔链球菌 甲型或乙型 乳酸杆菌 螺旋体 梭形杆菌 白色念球菌 真菌 表皮葡萄球菌 肺炎球菌 奈瑟氏球菌 类白喉杆菌胃正常一般无菌肠道类杆菌 双歧杆菌 大肠杆菌 厌氧性链球菌 粪链球菌 葡萄球菌 白色念球菌 乳酸杆菌 变形杆菌 破伤风杆菌 产气荚膜杆菌等鼻咽腔甲型链球菌 奈氏球菌 肺炎球菌 流感杆菌 乙型链球菌 葡萄球菌 绿脓杆菌 大肠杆菌 变形杆菌等眼结膜皮表葡萄球菌 结膜干燥杆菌 类白喉杆菌等 消毒与灭菌消毒 杀死物体上病原微生物的方法 并不一定能杀死含细菌的芽胞 消毒所用的试剂称为消毒剂 灭菌 杀灭物体上所有微生物的方法 灭菌比消毒要求高 包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物 洁净区微生物控制 洁净区微生物控制 洁净区微生物控制 一 物理消毒灭菌法用于消毒灭菌的物理因素有热力 辐射 过滤等 1 热力灭菌法高温对细菌具有明显的致死作用 因此最常用于消毒与灭菌 多数无芽孢的细菌经55 60 作用30 60分钟后死亡 经80 湿热5 10分钟可杀死所有细菌繁殖体 真菌和酵母菌 热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两大类 相同温度下 后者的灭菌效力比前者大 2 辐射灭菌法 1 紫外线作用于DNA 使细菌DNA的复制和转录受到干扰 导致细菌变异或死亡 常用于室内的空气消毒 2 电离辐射对各种细菌均有致死作用 常用于大量一次性医用塑料制品的消毒和食品的消毒 3 微波是一种波长为1mm 1m的电磁波 可穿透玻璃 塑料薄膜及陶瓷等物质 但不能穿透金属表面 多用于检验室用品 无菌室的用具的消毒 3 滤过除菌法用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去 以达到除菌目的 滤菌器含有微细小孔 0 22微米 只允许液体或气体通过 而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 适用范围 血清 毒素 抗生素以及空气等的除菌 二 化学消毒灭菌法许多化学药物能影响微生物的化学组成 物理结构和生理活性 从而发挥防腐 消毒及灭菌的作用 洁净室 区 应定期消毒 使用的消毒剂不得对设备 物料和成品产生污染 消毒剂品种应定期更换 防止产生耐药菌株 洁净区微生物控制 洁净区微生物控制 试想一下 哪些途径可能导致药品 化妆品的微生物污染呢 制药厂房环境的空气 制药用水 操作人员 物料 设备等 都可能导致药品的微生物污染 洁净区微生物控制 洁净区微生物控制 1 空气中的微生物空气中的微生物来自灰尘微粒 自然因素如风 人为因素如车 来自人的皮肤与衣服 以及谈话 咳嗽 打喷嚏等造成的飞沫 空气中微生物数量取决于灰尘量和活动状况 例如 有活跃人群的地方微生物多 不清洁的房间比清洁的房间多 潮湿的地方比干燥的地方多 因此 空气是侵袭我们产品的污染物的主要媒介 因此保持空气洁净是极为重要的 如何减少空气中微生物数量 采用消毒剂作用于室内空气和物体表面 采用紫外线对室内空气进行照射 2 制药用水中的微生物从理论上来讲 微生物在纯水中是不能生长的 但是 所有的各类水不管怎样仔细蒸溜或过滤 总会含有一定量的可溶性有机物和盐类 正是这些可溶性的物质被微生物利用作为它们生长的养料源泉 工艺用水在制药企业防止污染及作为制药用水方面至关重要 因为它不仅直接用于产品的生产 而且也用于清洗设备 药品微生物污染的关键环节在于工艺用水 常用的对水消毒的方法 化学消毒剂方法对水的消毒以化学消毒剂方法较常用 效果也最好 常使用次氯酸钠或通氯气 在使用中 应注意到水系统中不能留有消毒不到的 死角 膜过滤法适用于水系统的连续循环处理 紫外线照射法在水系统中应用紫外线照射消毒 适用于需要特殊处理的水 如光学透明度要求高 一般在末端之前 这种方法因处理过的水无臭无味 而优于化学消毒剂方法 因不产生微生物移居滤器的现象 而优于膜滤器 在水系统中 这3种方法综合应用 设计安装在适当的位置 洁净区微生物控制 3 厂房建筑与设备表面的微生物厂房建筑物的内表面 以及设备表面 容器内外表面等 都可以是微生物寄生存的地方 即使表面看起来很干净 而实际上已经被千百万个微生物所污染了 除非已经做了正确的消毒灭菌 所以药品生产过程中使用的设备和容器 最好表面不透水 光滑平整 无裂缝 接口严密 无颗粒物脱落 并能耐受清洗和消毒 洁净区微生物控制 洁净区微生物控制 4 人体的微生物以下举出一些人员污染的途径和方式 人的头发和皮肤 水滴 衣着 化妆品和珠宝手饰生产过程中人们所引起的混杂和误差 1 人的头发和皮肤每分钟从人类皮肤中要散发出约10 000个微生物 我们的手上 也拥有大量的微生物 此外 在人们正常的日常活动中都接触大量微生物 皮肤上经常存在白色葡萄球菌 枯草杆菌 类白喉杆菌 大肠杆菌等 有时还有非致病性的抗酸菌 真菌等 2 水滴呼吸和咳嗽将产生出大量水滴 这种水滴既含有尘粒污染也含有微生物污染 口腔是对污染最为敏感的地区 常见的微生物有白色葡萄球菌 类白喉杆菌 乳酸杆菌 放线菌 真菌 螺旋体等 呼吸道常存在空气中的细菌 如葡萄球菌 类白喉杆菌 在鼻咽部还有链球菌 奈氏菌属 一次咳嗽或喷嚏将把千百万个微生物引入工作环境内 3 衣着纺织物中 可能散发出棉绒和淀粉粒 从而带进微生物污染 4 化妆品和珠宝手饰发胶 香水 睫毛膏 香粉等 为微生物污染提供了极好的源泉 耳环 戒指 项链 手链能传播微生物污染 如果 一小片珠宝碎片落入一批产品中 则可能引起严重的尘粒污染 洁净区微生物控制 洁净区微生物控制 药品生产人员需要做到的卫生注意事项 1 新进人员的健康检查药品生产企业在招收新职工时 一定要对新职工进行全面的健康检查 要确保新进厂的职工不患有急性或慢性传染病 另外还要根据新进职工安排的具体岗位性质再确定其它具体检查的项目 2 建立生产人员健康档案3 培养药品生产人员良好的个人卫生习惯勤洗手 勤剪指甲 定期洗澡 勤理发 勤换衣服 勤洗工作服 在生产区内做到三个禁止 禁止吃东西 禁止吸烟 禁止大声喧哗 4 洁净区生产人员要求洁净区工作人员要尽可能少而精 只有工作需要时才能进入 操作人员在洁净区动作要避免剧烈运动 以减少人的发尘量 洁净区的门应关紧 避免不必要的移动 以保持洁净区的风速 风量 风型和风压 洁净区微生物控制 5 物料的微生物物料系指原料 辅料和包装材料等 原辅料可能将大量的微生物带入到药物制剂中 因此 选用符合标准的原辅料 将有利于控制药品和环境的污染水平 中国药典对部分原辅料的微生物项目作了有关规定 洁净区微生物控制 洁净区微生物监测 微生物监测 目的 监测的目的 确保车间环境 工艺用水达到要求 及时发现问题和收集数据以备追溯 不要害怕监测 如果结果是合格的 就证明车间的环境或水质没问题 如果有异常也可以早点发现并解决问题 1 环境监测沉降菌测试尘粒数测试表面附着菌测试2 工艺用水监测菌落总数电导率测试3 取样量 微生物监测 目的 环境监测 沉降菌测试测试频率 A级B级 C级 万级 1次 月和需要时 D级 十万级 1次 季度和需要时 测试状态 动态 洁净区处于正常生产状态静态 洁净区内无生产人员 空调系统正常运行 设备已安装 微生物监测 目的 需车间同事配合的地方 在不影响生产的情况下 最好不要在平板放置处附近走动 动作应轻缓 不可以踢动或踩烂平板 更衣室放置平板时应尽量减少进出 不能避免进出时 更衣动作应轻缓 避免在平板上方活动 减少产尘量 微生物监测 目的 环境监测 尘粒数测试测试时间 C级 万级 D级 十万级 1point 3次 1分钟 次 A级 1point 3次 2分钟 次 测试频率 A级 C级 万级 1次 月和需要时 D级 十万级 1次 季度和需要时 测试状态 动态 洁净区处于正常生产状态 静态 洁净区内无生产人员 空调系统正常运行 设备已安装 微生物监测 需车间同事配合的地方 在不影响生产的情况下 测试尘粒数时 应避免在尘粒数仪周围活动 动作应轻缓 微生物监测 环境监测 附着菌测试测试点 人员以手部 工作服袖口 腹部为主洁净室主要有地面 设备表面 台面测试频率 A级 C级 调配人员生产期间1次 星期和需要时 眼药水B级区填充人员在生产期间每批次都要进行附着菌测试 D级 验证和需要时 洁净室地面 机器表面 验证和需要时 化妆品车间调料填充人员每月抽检 微生物监测 工艺用水监测菌落总数检查 注射用水 检验