食品中副溶血性弧菌的检验.pptVIP

第一节食品中副溶血性弧菌的检验 第八章食品中其它致病菌的检验 弧菌电镜照片 食品中副溶血性弧菌的检验 一 概况副溶血性弧菌 V parahemolyticus 于1950年从日本一次暴发性食物中毒中分离发现 该菌存在于近海的海水 海底沉积物和鱼类 贝壳等海产品中 根据菌体O抗原不同 现已有13个血清群 主要引起食物中毒 尤以日本 东南亚 美国及我国台北地区多见 也是我国大陆沿海地区食物中毒中最常见的一种病原菌 食品中副溶血性弧菌的检验 一 概况本菌广泛存在于海水中 偶亦见淡水 在海水中能存活47日以上 淡水中生存1 2日 在37 pH7 7 含氯化钠3 4 的环境中生长最好 本菌嗜盐畏酸 在无盐培养基上 不能生长 3 6 食盐水繁殖迅速 每8 9分钟为1周期 低于0 5 或高于8 盐水中停止生长 对酸敏感 在2 醋酸中或50 的食醋中1分钟即可死亡 不耐热 56 5分钟即可杀死 90 1分钟灭活 对低温及高浓度氯代钠抵抗力甚强 一 概况目前已发现本菌有12种菌分为 型 从患者粪便分离出菌株属于 型 自致病食物分离的菌株90 以上属于 型 致病性菌株能溶解人及家兔红细胞 称为 神奈川 试验 kanagawatest 阳性 其致病力与其溶血能力平行 这是由一种不耐热的溶血素 分子量42000 所致 本菌能否产生肠毒素尚待证明 食品中副溶血性弧菌的检验 食品中副溶血性弧菌的检验 一 概况媒介食品副溶广泛存在于海岸和海水中 海生动植物常会受到污染而带菌 海鱼 虾 蟹 蛤等海产品带菌率极高 被海水污染的食物 某些地区的淡水产品如鲫鱼 鲤鱼等及被污染其他含盐量较高的食物如咸菜 咸肉 咸蛋亦可带菌 也可因受到污染而引起中毒 带用少量该菌的食物 在适宜的温度下 经3 4小时细菌可急剧增加至中毒数量 进食肉类或蔬菜而致病者 多因食物容器或砧板污染所引起 媒介食品 食品中副溶血性弧菌的检验 一 概况临床表现潜伏期多为10小时左右 一般8 40小时 主要症状有恶心 呕吐 上腹部阵发性剧烈腹痛 频繁腹泻 洗肉水样或带粘液便 无里急后重 每日5 6次 体温39 重症病人可有脱水 血压下降 意识不清等 病程2 4天 一般预后良好 无后遗症 少数病人因休克 昏迷而死亡 二 生物学特性 一 形态与染色1 革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌 单端鞭毛 两端浓染 杆状 棒状 甚至球状 丝状等 二 培养特性 1 需氧或兼性厌氧 生长最好2 在2 NaCL培养基中生长最好 无盐或食盐 10 不能生长 3 最适温度36 PH7 5 7 8 7 7 4 在专用选择性平板上 菌落呈圆形凸起 混浊不透明 表面光滑 较湿润 边缘不整齐 5 血平板 可见溶血环 三 生化特性 1 分解GLU 血葡萄糖 产酸不产气 不分解乳糖 蔗糖 2 H2S V P 靛基质 精氨酸 3 甲基红 赖氨酸 溶血 V P试验 阴性 阳性 靛基质试验 阴性阳性 甲基红试验 阳性 阴性 四 抗原结构 O抗原O1 O1313个群 H抗原 K抗原 K1 K7065个型缺 K2K14K17K35K62 三 检验操作要点 采样 样品处理 增菌培养 分离培养 3 5 氯化钠三糖铁培养基 嗜盐性试验 生化鉴定 动物试验 结果报告 1 采样 患者粪便 呕吐物 可凝食品 从海产品的体表面 肠内容物 鳃等取样必要时包装物 炊具用具 取样后尽快送检 不宜低温保存以免死亡 2 增菌培养 Nacl结晶紫增菌液 37 8 16小时 3 分离培养 Nacl蔗糖平板 圆形 半透明或不透明 无粘性 绿 兰色 直径2 4mm嗜盐选择性平板 直径2 5mm 圆整或不齐 隆起混浊 无粘性 无色 湿润 4 选择性培养取上述可疑菌落接种于3 5 Nacl TSI培养37 24小时5 镜检 取上述可疑菌落镜检 应为革兰氏阴性 无芽胞多形态 两端浓染 副溶血弧菌在蔗糖琼脂 tcbs 平板上的菌落 副溶血性弧菌在海博弧菌显色培养基上典型特征 典型副溶血性弧菌显蓝色至蓝绿色 霍乱弧菌和其它弧菌显无色 6 嗜盐性试验 将可疑培养物接种于不同盐浓度的盐胨水中 37 24小时 观查生长情况 盐含量0 3 7 9 11 在3 7 生长良好 11 7 生化试验 分别接种各类生化培养基 置37 恒温培养 除V P 靛基质 甲基红试验培养48小时后加试剂观察外 其他均可在24小时观察 试验结果判定参照下表 7 生化试验 副溶血性弧菌的生化性状表 8 动物试验 凡符合副溶血弧菌生化反应的菌株 一般都有毒力 因此都应做动物试验 常用的试验方法有 小白鼠毒力试验 将上述各类反应的副溶血弧菌接种到3 5 氯化钠胨水中 置37 培养16 18小时待用 用3 5 氯化钠胨水培养物0 3ml注射到体重13 15g小白鼠的腹腔内 观察2 3d 常见有竖毛 不活泼 食欲不振 腹部贴在饲养缸底 呼吸困难 不幸蹒跚 有时发生痉挛性跳动 四肢抽搐及尾部痉挛性震动 大多在24 48小时内死亡 将小白鼠进行解剖检查和分离培养 8 动物试验 De试验将家兔的腹壁手术切开 露出小肠 选取约5cm的一段 将两头用手术线结扎 注入3 5 氯化钠胨水培养物 并另选两段作阳性和阴性对照 如分离段膨胀隆起 小肠水肿充血说明该菌有致病性 9 结果报告 样品经过增菌培养 分离培养后 根据形态观察 生化试验 动物试验的结果判断是否发现