生物法病毒诱导融合.ppt

温故知新 1 什么是细胞融合 2 诱导细胞融合的方法有哪一些 3 植物体细胞杂交技术是细胞融合的应用之一 他的原理是什么 有什么优势 优势 克服了远缘杂交不亲和的障碍 创造新物种 定向改造生物性状 原理 细胞的全能性 细胞膜的流动性 采用自然或人工的方法使两个或多个不同细胞融合成一个细胞 1 定义 在一定的条件下法使两个或多个不同的动物细胞融合成陈一个细胞的过程 三 动物细胞融合与单克隆抗体 一 动物细胞融合 两个细胞正在融合 受精作用 2 诱导融合的方法生物法 灭活的病毒诱导融合 利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故 病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能 化学法 聚乙二醇PEG诱导融合 物理法 电刺激融合 病毒颗粒黏附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞融合 形成杂种细胞 思考讨论 为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活 不灭活行吗 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布 细胞膜打开 细胞发生融合 不灭活的话会感染细胞 而不能诱导细胞融合 从血清中分离抗体 缺点 产量低 纯度低 且抗体的特异性差 灵敏度低 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 1 传统获得抗体的方法 二 动物细胞融合的应用 单克隆抗体的制备 3 一个大胆的猜想将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起 形成杂交瘤细胞 杂交瘤细胞既能在体外快速生长 又能持续分泌成分单一的特异性抗体 这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子 就是单克隆抗体 2 一个美丽的发现 在动物免疫反应的过程中 体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体 但是每一种B细胞只产生一种抗体 想要获得大量的单一的抗体 必须对单个B细胞进行无性 即克隆 米尔斯坦 阿根廷 和科勒 德国 因此在1984年获诺贝尔奖 4 单克隆抗体的制备 单抗的制备过程要点 4 单克隆抗体的制备 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基筛选1 专一抗体检测 克隆化 单克隆抗体 有限稀释法培养筛选2 1 注射抗原的目的是什么 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基筛选1 专一抗体检测 克隆化 单克隆抗体 有限稀释法培养筛选2 2 诱导细胞融合的手段有哪些 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基筛选1 专一抗体检测 克隆化 单克隆抗体 有限稀释法培养筛选2 3 若细胞两两融合后 有几种融合情况 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂交细胞 选择性培养基筛选1 专一抗体检测 克隆化 单克隆抗体 有限稀释法培养筛选2 4 第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测 5 实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 有限稀释法稀释多次 稀释 将培养皿孔内的上清液取出 检测抗体 常用的方法有 酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定 动物特异性免疫分离B淋巴细胞 B 找到骨髓瘤细胞 G 注意B淋巴细胞是一个系列 B1 B2 B3 Bn 细胞融合 三种融合方式 BB BG GG 第一次筛选 在 选择培养基培养 上培养筛选杂交瘤细胞 只有BG杂交瘤细胞存活 但BG杂交瘤细胞也是一个系列 如B1G B2G BnG 而BB GG在此培养基上不能存活 第二次筛选 在 多孔培养板上 培养杂交瘤细胞系列 每孔只放一个杂交瘤细胞 克隆化培养 每个杂交瘤细胞 并进行 单一抗体检测 检测阳性 的孔内即是所需要的杂交瘤细胞 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群 体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖 提取单克隆抗体 3 为何要进行两次筛选 4 如何进行第2次筛选 培养在多孔培养板上 每孔只有一个杂交瘤细胞 第1次筛选得到杂交瘤细胞 多种 第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群 问题强化 1 本过程利用了哪些原理 免疫原理 细胞融合原理和动物细胞培养原理 2 为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合 这样融合成的杂交瘤细胞 继承了双亲细胞的遗传物质 不仅具有B细胞分泌抗体的能力 而且还有无限增殖的本领 因而可以获得大量单克隆抗体 1 作为诊断试剂 在临床生化诊断 病理组织定位 体内肿瘤的定位等 与常规抗体相比 具有准确 高效 简易 快速特点 2 用于治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗 生物导弹 抗癌细胞的单克隆抗体 放射性同位素 化学药物或细胞毒素 单克隆抗体 导向 准确找到癌细胞位置 原位杀死癌细胞 2 单克隆抗体的优点 特异性强 灵敏度高 可大量制备 3 单克隆抗体的应用 具有一定的流动性 C 有丝 不变 抗体能与抗原发生特异性结合的特点 例题2 1 在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时 将抗原注射到小鼠体内 可获得 多选 A T淋巴细胞B 效应B淋巴细胞C 抗体D 记忆细胞 2 下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中 正确的是 多选 A B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合 一般需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导B 融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖 又能产生单克隆抗体C 体外培养时 一个B淋巴细胞可以产生一种抗体 但不能无限增殖D 单克隆抗体与常规抗体相比 特异性强 灵敏度高 优越性明显 BCD ACD 已知细胞合成DNA有D和S两条途径 其中D途径能被氨基嘌呤阻断 人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径 但一般不分裂增殖 鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径 但能不断分裂增殖 将这两种细胞在试管中混合 加聚乙二醇促融 获得杂种细胞 请回答 1 试管中除融合的杂种细胞外 还有种融合细胞 2 设计一方法 不考虑机械方法 从培养液中分离出杂种细胞 并说原理 方法 原理 培养液中加入氨基嘌呤 收集增殖的细胞 加入氨基嘌呤后 使D合成的途径阻断 所以仅D合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不能增殖 但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法 设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案 制备单克隆抗体 B细胞 抗体 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞 分泌抗体 无限增殖 原代 传代 50 例3 1 动物细胞工程技术的基础是 A 动物细胞融合B 胚胎移植C 动物细胞培养D 核移植 课堂练习 在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中 正确的是 A 结果是相同的B 杂种细胞的形成过程基本相同C 操作