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结核分枝杆菌及其临床诊断 郴州市第一人民医院医学检验中心李胜涛 目录 1结核分枝杆菌感染现状2结核分枝杆菌生物特性 致病性及临床诊断3结核分枝杆菌检测方法及其应用4本室目前结核分枝杆菌检测试剂情况分析5病例分析 1结核分枝杆菌感染现状 1我国拥有近5 5亿的结核感染人群2我国每年新发生肺结核患者100万例3结核病主要经呼吸道传播4只要坚持正规治疗 绝大多数肺结核患者是可以治愈的AIDS患者极易合并结核分枝杆菌感染 2结核分枝杆菌生物特性与致病性 2 1生物特性抵抗力强 尘埃上保持传染性8 10d 在干燥痰内可存活6 8个月 痰液可增强结核分枝杆菌的抵抗力 变异性 可发生形态 菌落 毒力 免疫原性易发生耐药性 MDR和XDR 每年有大约44万例多药耐药型肺结核新患者出现 约15万患者死于多药耐药型肺结核 2 2致病物质 荚膜 亲和吞噬细胞 含有多种酶 能抑制溶酶体同吞噬体结合该菌细胞壁脂质含量较高 约占干重的60 索状因子 主要损伤细胞线粒体和抑制氧化磷酸化过程 抑制粒细胞游走和引起肉芽肿磷脂 能促进单核细胞增生 并使巨噬细胞转变为类上皮细胞 从而形成肉芽肿硫酸脑苷酯 能抑制溶酶体同吞噬体结合蜡质D 可激发机体产生迟发超敏反应蛋白质 可激发机体产生超敏反应 2 3结核病的临床诊断流行病学 临床表现 体征 胸部影像学实验室检测 痰涂片细菌培养结核菌素实验结核抗体检查 可供参考组织病理检查 3结核分枝杆菌检测方法及其应用 3 1染色检测结核分枝杆菌方法抗酸染色法 玻片法 浓集法 夹层杯法 妻 尼染色法荧光染色法 3 2微生物检测结核分枝杆菌的方法细菌培养罗 琴氏培养基 2周 5周才能长出菌落BactecTB460 BactecMGIT960 20天液体变色培养基 德国MBRedox系统噬菌体裂解试验 噬菌体D29对缓慢生长的结核分枝杆菌有亲噬性结核杆菌L型 涂片其形态不易与其他细菌的L型相区别 蚌埠医学院研制的结核杆菌L型液体培养基使结核杆菌L型生长迅速 3 3免疫学方法检测结核分枝杆菌抗体PPD试验 结核菌素蛋白衍生物皮肤试验LAM 脂阿拉伯甘露聚糖 抗原 敏感74 5 结核菌分泌性蛋白抗原 敏感性70 9 纯化BCG 卡介苗 蛋白 敏感性80 0 PPD抗原 敏感性83 6 结核蛋白芯片 ESAT 6 CFP10 LAM 38KD和16KD等 新的免疫检测技术TSPOTTB技术 QuantiFERON TB利用结核杆菌感染者外周血单核细胞中存在结核特异的活化T淋巴细胞 这些淋巴细胞在受到结核杆菌特异抗原刺激后分泌干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验 3 4结核分枝杆菌分子生物学诊断技术 巢式PCR PCR 免疫层析法 多重PCR 定量PCR 新的PCR技术应用于检测SSCP 单链构象多态性分析 SSCP用于结核杆菌基因的突变和耐药性的快速检测PCR RFLP技术 PCR和限制性内切酶相结合的技术 于鉴定分枝杆菌菌种 基因突变和耐药性检测GeneChips 检测结核杆菌 菌种鉴定 研究耐药基因以及基因组比较分析有灵敏快速 特异性高等特点 纳米技术的应用HSAM 杂交信号放大方法利用Dynal磁珠杂交分离靶基因省去了DNA提取步骤 组装的纳米颗粒作为报告信号的结合载体 拥有数量巨大的亲和素位点 增加了报告信号 Biotin FITC 数量 放大了信号强度 提高了检测的灵敏度 3 5上述方法应用比较染色检测 是临床诊断快速廉价易行的方法 但是阳性率太低 细菌培养 结核菌感染的诊断金标准 速度太慢 阳性率仍然较低 免疫学方法 一种快速 简单 有较好敏感性和特异性的结核病辅助诊断 但检测敏感性和特异性有待提高 但新的免疫方法的应用带来希望 但还需要大量的样本认证 分子生物学方法 快速 有效 特异性和敏感性均较高 4免疫室目前结核分枝杆菌检测试剂应用情况报告 1 检测结核抗体2 采用是金标法3 应用过二种以上的金标试剂4 采用的原理相同 但针对的特异性抗体不相同5 试剂的准确度 敏感性及特异性还有较大的提升空间 5病例分析 一 男性患者 31岁 因反复咳嗽 咳痰 发热 盗汗伴游走性关节疼痛及结节性红斑1年 患者1年前因受凉后发热 咳嗽 咯痰 在某院诊为 上感 经抗生素及对症治疗病情无缓解 咳嗽日渐加重 伴盗汗 乏力 踝 膝关节游走性红 肿 热痛及双下肢结节性红斑 曾就诊于数家医院均诊断为风湿性关节炎并发慢性支气管炎 查体 T37 5 P86 分 BP14 7 9 3kPa 发育正常 贫血貌 心界不大 心率86 心律规则 各瓣膜区无杂音 左肺可闻及干啰音 双膝 踝关节红肿 以左踝为著 双下肢可触及数个蚕豆大小结节性红斑 实验室检查 WBC6 4 109 L N0 65 L0 33 L Hb95g L ESR85mm h 抗 O 450U RF阴性 ECG正常 彩色多谱勒超声心动图检查未见异常 胸片两肺文理增多 左踝关节X线摄片骨质未见异常痰涂片查抗酸杆菌3次阴性 纤维支气管镜检查左上叶支气管粘膜充血水肿 有粗糙不平小颗粒 刷检涂片见大量抗酸杆菌 活检病理诊断为支气管内膜结核 诊断 支气管