血糖测定邻甲苯胺.pptVIP

血液中葡萄糖的测定 邻甲苯胺法 一 实验目的 1 了解血糖的概念 2 掌握血糖的测定方法 邻甲苯胺法 二 实验原理 血糖及正常血糖水平 血糖 指血液中的葡萄糖 正常血糖浓度 空腹波动在3 89 6 7mmol L 70 110mg dl 餐后2h内应 7 8mmol L 140mg dl 糖的重要生理功能 血糖的来源 去路 高血糖症与糖尿病 高血糖症 空腹血浆血糖 FPG 6 7mmol L 130mg dl 生理性 包括饮食性 高糖饮食 或情感性 情绪紧张 肾上腺分泌增加 病理性 见于糖尿病 内分泌腺 甲状腺 肾上腺皮质或髓质 胰岛细胞功能亢进 颅内压升高刺激血糖中枢 呕吐 腹泻 高热等引起的脱水 尿糖 若血糖浓度高于肾糖阈值9 0mmol L 出现尿糖 糖尿病 diabetesmellitus DM 定义 是一种慢性 复杂的代谢紊乱性疾病 系胰岛素相对或绝对不足 或利用缺陷引起 临床特征 血糖持续升高 甚至出现糖尿 长期患有糖尿病常有脂类 蛋白质代谢紊乱以及眼 肾的微血管病变及神经病变等并发症 严重者还可出现水 电解质紊乱及酸碱平衡紊乱 表现为高脂血症 酮症酸中毒等 重者可致死亡 糖尿病的分类 IDDM 也称 型糖尿病 好发于青春期 对胰岛素敏感 NIDDM 型 常见于中年肥胖病人 病变在于靶细胞膜上的胰岛素受体的数目减少或者缺陷 因而对胰对胰岛素不敏感 继发性糖尿病 如嗜铬细胞瘤 库欣病等 或其它因素 两类原发性糖尿病的特征 特征1型2型基本病因遗传 环境发病机制自身免疫性疾病生物活性降低占DM 15 85 可发展为1型 发病年龄通常 20岁 40岁身体肥胖罕见多见血胰岛素 绝对不足 或 相对不足 病情及酮症较重 常见较轻 少见治疗胰岛素敏感控制饮食 减肥 无机化学法 有机化学法 酶法 血糖的测定 一 无机化学法 氧化还原法 方法类型原理用途及备注班氏法半定量G Cu Cu2O 尿糖测定 Benedict 磷钼酸法定量G Cu Cu2O 历史意义 Folin Wu 分光Cu 磷 砷 钼酸盐操作复杂 需制滤液 砷钼酸法同上蓝色络合物特异性差 新铜试剂法 660nm 受还原物质影响结果偏高10 碱性高铁同上G Fe CN 6 3 Fe CN 6 4历史意义氰化物法黄色无色Technicon曾用 二 有机化学法 缩合法 方法类型原理用途及备注邻甲苯胺定量G 邻甲苯胺 G基胺操作简便 法 630nm 无需滤液 特异性较高 中小医院使用普遍 很少用于自动 邻甲苯胺法 三 酶法 方法类型原理用途及备注己糖激酶定量G ATP G 6 P ADP血清尿液脑脊液 HK 法分光G 6 P NADP 公认参考方法动态 GA 6 P NADPH操作简便 特异终点 340nm 性和灵敏性均高手工 自动化分析葡萄糖氧同上G O2 GA H2O2推荐常规方法化酶 POD H2O2 染料 有色染料偶联法 还原型 氧化型 可制试纸片定量 Trinder 4 氨基安替比林 酚半定量筛选试验 红色琨类化合物505nm 方法类型原理用途及备注葡萄糖氧定量G O2 GA H2O2与HK法有最佳化酶氧消电化学用O2电极作极谱测定 相关性耗法动态求O2的消耗量 CX3生化仪 终点葡萄糖脱定量G NAD GA NADH偶有使用氢酶 GDH 分光 340nm 可自动化分析法动态 刺血针 血糖仪 二 实验原理葡萄糖在热的醋酸溶液中 与邻甲苯胺缩合成雪夫氏碱 Schiffbase 雪夫氏碱呈兰绿色 其最高吸收峰为630nm波长 颜色深浅与葡萄糖含量成正比 反应式如下 三 实验器材分光光度计 630nm 比色皿计算纸 9cm 9cm 3 水浴锅4 10ml容量瓶四 实验试剂1 邻甲苯胺溶液2 5g硫脲溶于冰醋酸 加入邻甲苯胺150ml及2 4 硼酸100ml 用冰醋酸定容至1升2 葡萄糖标准母液 10mg ml 用饱和苯甲酸溶液配制 3 血清 100ml 血液经抗凝处理后的全部血液为全血 离心除去血细胞后所得到的淡黄色液体为血浆 如血液不经抗凝处理 让他自行凝固 则在抽血后的一段时间内 血液会自动在一系列凝血因子的作用下发生凝集 血液首先凝固成一个整体 再经过一段时间或用离心机离心 血液中凝固的部分会与一些清澈淡黄色的液体分离开 这些液体称为血清 血清与血浆从表面上看似乎没有什么不同 但其内在的主要区别是血清中不含纤维蛋白原 是未经抗凝处理过的血液凝固后得到的 血清多用于血液生化 免疫等方面的测定 血浆多用于凝血等方面的测定 全血则多用在血细胞 血常规 血沉等方面的测定 五 实验步骤取5支10ml容量瓶 标号 依次加入葡萄糖母液0 25 0 5 1 0 2 0 3 0ml 用饱和苯甲酸稀释至10ml 混匀 则上述溶液100ml葡萄糖含量为25 50 100 200 300mg 混匀后 置沸水中15分钟 立即移入冷水浴中冷却 以0号管调零 在630nm处比色 见下表 以各管的吸光度为纵坐标 相应管中葡萄糖含量 mg 为横坐标 绘制标准曲线 并根据测定管吸光度查找含量 标准曲线 standardcurve 是指通过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性质 而得到的性质的数值曲线 标准曲线是标准物质的物理 化学属性跟仪器响应之间的函数关系 建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属性 常用标准曲线法进行定量分析 通常情况下的标准工作曲线是一条直线 六 注意事项1 本法不需要除去蛋白质 邻甲苯胺试剂只与醛糖显色 血液中其他还原性物质基本上无影响 2 邻甲苯胺试剂与葡萄糖显色的深浅及其稳定性与试剂中邻甲苯胺浓度 冰醋酸浓度 加热时间有关 此法显色稳定