乙型病毒性肝炎的实验室检查VIP

乙型病毒性肝炎的实验室检查 报告人 付红伟天津医大总医院检验中心2011 1 21 我国HBV感染概况 一般人群HBsAg携带率高达7 18 现有慢性HBV感染者约9300万人 占全世界的1 4 其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过2000万例 占全世界慢性乙肝患者的1 3 15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著 1 4岁组仅为0 96 1 4岁组HBsAb阳性率由1992年15 75 升至72 25 抗HBcAb阳性率由1992年30 08 降至3 76 2 HBV基因组 HBVDNA是由长链L 负链 和短链S 正链 组成的不完全双链环状DNA 短链的长度相当于长链的50 85 HBVDNA长链载有病毒蛋白质的全部密码 有4个开放读码框架 ORF 分别称为S C P和X区 编码7个蛋白质 HBVDNA易发生变异 特别是前S或S区基因较易突变 嗜肝DNA病毒的共同特点 内含3 3 3kb松散环状 部分双链DNA基因组及DNA聚合酶 病毒的复制需逆转录过程 3 HBV抗原和抗体系统 表面抗原 HBsAg HBV外膜糖蛋白 S L M蛋白S蛋白 狭义的HBsAg指S蛋白 HBsAg阳性说明机体有HBV感染 中分子蛋白 preS2 S大分子蛋白 preS1 preS2 S S蛋白 中分子蛋白 大分子蛋白 1 HBsAg和抗 HBs e抗原 HBeAg 是可溶性蛋白质只存在于血液中是病毒复制和传染性的标志e抗体 抗 HBe 对HBV感染有一定的保护作用其出现标志着病毒复制减少 传染性降低 前C区 C区 前C C蛋白 HBeAg HBcAg 表达 切割 加工 HBeAg只存在于血清中 HBVC基因 分泌到细胞外 2 HBeAg和抗 HBe 5 HBV的三种形态 1 HepatitisBvirion Daneparticle 2 secretedfilament3 secretedsphere 6 7 HBV自然复制周期 8 HBV感染的实验室检查 1 乙型肝炎的生物化学检测 主要指标 ALT AST ASTm 血清白蛋白 血清胆红素 胆碱酯酶 甲胎蛋白 凝血酶原时间 PT 及部分凝血因子 9 方法学的发展ELISA 灵敏性高 成本低 适用于普通病人筛查 胶体金免疫层析法 金标法 简便易行 可用于急诊病人快速检测 化学发光法定量检测 价格昂贵 可用于HBVMs为临界值的病人的确证 可间接反映宿主HBV的复制水平 在评价抗病毒治疗的病毒学应答 疗效和判断预后方面有重要意义 新增检测指标Pre S1 Pre S2及其相应抗体对乙肝两对半的新认识 10 2 HBV血清标志物检测 11 HBV血清标志物检测方法的成本效果分析 1 12 HBV血清标志物检测方法的成本效果分析 2 Back 13 Terminalprotein Spacer ReverseTranscriptase RT RNaseH rt1 rt344 preS1 preS2 S s1 s266 HBsAg X MutationofS Pre S S基因 a 决定簇G145R变异 与抗 HBs的亲和力降低 S基因变异可导致隐匿性HBV感染 occultHBVinfection 表现为血清HBsAg阴性 但仍可有HBV低水平复制 血清HBVDNA常 104拷贝 ml 献血员人群 隐匿性HBV感染的检出率可达0 19 14 15 16 Pre S1检测的临床价值 前S1蛋白主要存在于Dane颗粒和管型颗粒上 在HBV感染宿主细胞过程及在病毒复制和刺激机体产生免疫反应中起重要作用 前S1抗原与HBeAg之间有高度相关性 并可区别因变异种及其他原因造成的乙肝病毒e抗原 HBeAg 假阴性 可作为HBeAg假阴性补充 从而准确反映患者体内病毒复制情况 可作为HBV感染及复制的标注 与其它血清标志物联合检测 相互补充 Back 17 大三阳 小三阳 vs HBV血清学标志检测结果分析 16 19 1916例HBV血清标志物阳性类型分布模式 20 21 22 HBVDNA定量检测病毒复制水平最可靠 最直接的证据 与传染性和疾病进展密切相关 主要用于HBV感染的判断 治疗适应症的选择及抗病毒疗效的判断 HBV基因分型基因分型的必要性 基因分型的主要方法 HBV耐药突变的检测 3 HBV分子生物学诊断 慢性HBV感染治疗适应症的选择 HBeAg阳性 HBVDNA载量 105copies ml ALT 2 ULN HBeAg阴性 HBVDNA载量 104copies ml ALT 2 ULN HBVDNA持续阳性 年龄 40岁 ALT大于正常上限 也可给予抗病毒治疗 HBVDNA持续阳性 年龄 40岁 ALT持续正常 应密切随访 动态观察疾病进展 必要时行肝组织检测 有病变证据时 可以给予抗病毒治疗 23 HBV感染抗病毒治疗的疗效评估 治疗终点 HBVDNA明显下降或低于检测下限 并伴有ALT正常 HBVDNA水平治疗开始后3个月内持续下降1log以上才说明治疗有效 每日0 5mg恩替卡韦治疗1年时 HBeAg阳性和阴性慢性乙型肝炎患者HBVDNA检测不到率分别为67 和90 恩替卡韦的HBeAg转换率为21 与其他口服抗病毒药相似 并不以HBeAg转阴或HBsAg转阴为治疗终点或目标 24 HBVDNA定量检测试剂盒的性能对比 25 26 同时可以实现对HCV HIV 1 衣原体 及淋病的一体化检测 Back 病毒基因突变 疾病进展 临床表现 对干扰素应答 耐药变异 生化学改善 HBeAg血清学转换 HBVDNA清除 急性乙型肝炎 慢性乙型肝炎 肝硬化 LC 肝细胞癌 HCC 27 HBV基因型 基因亚型 常用HBV基因分型方法比较 28 B型特异性 引物对 的特异度分析 B型特异性引物HB 正义链 5 ACCGTGAACGCCCACMGGAA 3 29 Back 4 HBV临床药物治疗监测 乙肝病毒的耐药性检测 是精准治疗乙肝的关键 目前由于治疗不够规范 造成我国目前超过95 的乙肝患者发生耐药 病毒变异 病毒耐药 变异检测势在必行 拉米夫定是第一个被批准治疗慢性乙型肝炎的口服抗病毒药 已在全世界广泛应用 但其耐药发生率高 治疗1年时耐药发生率为23 2年为46 3年为55 4和5年分别为65 和71 30 耐药 核苷 酸 类似物 NA 治疗失败最重要原因 31 拉米夫定LMV 阿德福韦酯ADV 替比夫定LdT 恩替卡韦ETV HBV 替诺福韦TDV NAs 抑制病毒复制 长期使用 耐药变异 临床耐药 表型耐药 基因耐药 耐药研究 32 33 34 Polymerase Terminalprotein Spacer ReverseTranscriptase RT RNaseH rt1 rt344 逆转录酶 RT 区某些位点变异与耐药相关 preS1 preS2 HBsAg s1 s266 可同时分析 耐药变异 HBsAg变异 基因型 血清型 全长RT区分析技术路线 HBVDNA提取 snPCR扩增RT区 PCR产物直接测序 生物信息学分析与数据信息挖掘 血清与资料收