「国家一类新兽药-喹烯酮（仅供参考）」.doc

国家一类新兽药喹 烯 酮技术手册2005北京中农发药业有限公司出品（原中国万牧新技术有限责任公司）广东、广西、海南总代理广州新牧饲料贸易有限公司目 录前言-（3）一、 喹烯酮的特点-（3）1、 喹恶啉类药物的特点-（3）2、 喹烯酮的特点-（3）二、 喹烯酮的药学研究-（4）1、 结构确认及解析-（4）2、 原料药的稳定性-（4）3、 配伍禁忌问题-（4）三、 喹烯酮的药理学研究-（4）1、 体外抑菌试验-（4）2、 喹烯酮对大白鼠增重试验结果-（5）3、 50ppm喹烯酮对鸡的增重试验结果-（5）4、 75ppm喹烯酮对鸡的增重试验结果-（5）5、 喹烯酮对猪的增重结果-（6）6、 喹烯酮药代动力学试验-（6）四、 喹烯酮的毒理学研究-（6）1、 急性毒性试验-（6）2、 畜积毒性试验-（7）3、 亚急性毒性试验-（7）4、 慢性、亚慢性试验-（7）5、 特殊毒理学试验-（7）（1） 致畸试验-（7）（2） 小白鼠致癌试验-（9）（3） 喹烯酮的致突变试验-（9）（4） 喹烯酮对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验-（10）（5） 喹烯酮对雄性小白鼠精子畸变试验-（10）五、 喹烯酮在机体内残留试验-（10）1、 14C标记喹烯酮的肌体组织消除规律研究-（11）2、 最高残留限量及休药期确定-（11）六、 动物传代繁育试验-（12）七、 环境毒性试验-（12）1、 对植物的环境毒性-（12）2、 对鱼的环境毒性-（13）八、 临床试验结果-（14）1、 肉鸡应用效果-（14）2、 猪的临床验证效果-（15）九、 经济效益分析-（16）十、 结束语-（16）十一、特别提示-（17）十二、证书、批文复印件-（18-19）前 言自八十年代末期始，我们以研制畜禽共用，高效低毒的化药为目标进行了为期十五年的艰苦研究，研制成功了国家一类饲料添加化药“喹烯酮”。“喹烯酮”的作用机理为：促进同化代谢生长激素产生继发性增加，从而加速动物生长；抑制消化道内病原微生物的生长，防止或减少疾病发生。“喹烯酮”毒性极低（口服LD50小白鼠为14398mg/kg、大白鼠为8179mg/kg），近于无毒；有较强的抗菌作用，能有效抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、克雷伯氏杆菌、变形杆菌、禽巴氏杆菌、鼠伤寒、痢疾杆菌；促生长效果明显，有效提高饲料转化率。由于“喹烯酮”的溶解范围和溶解度均很小，几乎不被消化道吸收（93%以上以原形物排出），因此在可食性动物组织中几乎没有残留。动物的排泄物亦不会对环境造成不良影响。在研制新药的15年间，我们反复对以下项目进行了研究、试验；喹烯酮的药理学试验（包括体外抑菌试验、药物代谢动力学试验、增重试验），毒理学试验（包括急性毒性、蓄积毒性、亚急性毒性、慢性毒性、三致试验），同位素标记试验（兽药研制国内首例）、残留试验，动物传代繁育试验，环境毒性试验（包括对植物和鱼的环境毒性试验），原料药和预混剂的稳定性试验。经红外光谱、紫外光谱、核磁共振谱、质谱及元素分析，确定了喹烯酮的化学结构。通过在广东、湖北、山东、陕西、山西、甘肃、辽宁、吉林、上海、北京、河南等省市的临床试验及申报新药证书过程中的复核试验（药理、毒理、残留、传代、结构确认），证明各项数据真实可靠。一、 喹烯酮的特点：1、 喹恶啉类药物的特点效果确实：抗病、促生长，提高饲料转化率，改善畜产品质。动物专用：6000吨/年老产品的不足：毒副作用大（De Vries,1990;Molen,1989）(Nabuurs,1990)，仅用于猪。2、“喹烯酮”的特点：作用全面：抗菌、促生长；提高饲料转化率。安全无毒：无急、慢性毒性和特殊毒性，比现有药物毒性低，近于无毒。应用广泛：成年家畜、家禽及幼年家畜、家禽。生产工艺：原料易得，无污染。质检监控技术：成熟、先进。动物专用：不受人用产品影响。配伍广泛：可与其他营养成分及辅料任意配伍。 二、 喹烯酮的药学研究1、 结构确认及解析（1） 理化性质：黄色结晶或粉末，无臭无味，不溶于水，溶于氯仿、二甲基亚砜、熔点190-193（2） 元素分析、紫外光谱、红外光谱、质谱及核磁共振均确证了喹烯酮化学结构的正确性。2、 原料药稳定性对光不稳定，应避光保存。对高温（60）、高温（75%、92.5%）稳定，室温下长期（3年）避光保存，无变化。3、 配伍禁忌问题除勿与含膨润土的饲料外，可与其他营养成分及辅料任意配伍。三、 喹烯酮的药理学研究经过小白鼠、大白鼠、鸡、猪的药效实验，确认“喹烯酮”对鸡、猪有明显的抗菌、促生长作用。1、 体外抑菌试验 最小抑菌浓度（MIC）（g/ml）试验菌金黄色葡萄球菌（+）大肠杆菌克雷伯氏杆菌变形杆菌禽巴氏杆菌鼠伤寒痢疾杆菌喹烯酮200.0062.5031.2531.2515.6331.2531.25喹乙醇200.0062.5031.2531.2515.6331.2531.252、“喹烯酮”对大白鼠增重试验效果克/只组别性别动物素平均始重平均增重纯增重增重率（%）t值测定空白对照组1078.7302.5223.8100.0050ppm组1078.3342.8264.5118.19P0.01100ppm组1068.0326.0258.0115.28P0.012、 50ppm“喹烯酮”对鸡的增重试验效果增 克/羽周龄2345678空白对照185.6313.1513.6762.31017.51165.21382.550ppm喹乙醇185.6316.4515.9773.51042.31238.11486.150ppm喹烯醇185.5342.9574.4836.81082.11278.71598.8纯增重1196.91300.51413.3纯增重(%)100.00108.65p0.01118.08p0.014、75ppm“喹烯酮”对鸡的增重试验效果克/羽周龄2345678空白对照170.2318.5538.6773.51042.31382.11509.175ppm喹乙醇170.3321.3582.3836.81165.21447.11752.175ppm喹烯醇170.2331.4596.7872.51168.71463.61803.6纯增重1338.91582.81633.4纯增重(%)100.00118.14p0.01121.99p0.01 5、“喹烯酮”对猪的增重效果饲喂天数组别头数始重（kg）终重（kg）净增重（kg）增重率（kg）肉料比30空白对照组50ppm喹烯酮50ppm喹乙酮10101065.466.065.5123.0137.5139.057.6771.573.5100.00123.80p0.01127.27p0.011:3.151:2.451:2.3830空白对照组50ppm喹烯酮50ppm喹乙酮101010240.7244.2244.5378.7387.0382.7138.0142.7138.0100.00103.44100.001:3.041:2.941:3.0460空白对照组50ppm喹烯酮50ppm喹乙酮10101065.266.065.5214.7231.0231.2149.5165.0165.7100.00110.37p0.05110.87p0.051:3.171:2.871:2.86 6、“喹烯酮”药代动力学试验用合成14C标记喹烯酮在猪、鸡体内进行药代动力学研究，所得结果：静注给药符合二室开放模型：猪，T1/2=0.1899h, T1/2=4.5528h, Kel=0.8654h-1 AUC=0.00925mgh-1L-1鸡，T1/2=0.1637h, T1/2=3.8189h, Kel=1.6834h-1AUC=0.005046mgh-1L-1 口服给药符合一级吸收一室开放模型：猪，T1/2k=0.4678h, T1/2k=3.7445h, Tp=1.3367hCmax=0.000713gml-1, AUC=0.00303mgh-1L-1鸡，T1/2k=0.5142h, T1/2k=4.6637h, Tp=1.8459hCmax=0.000897gml-1, AUC=0.00773gh-1L-1 说明喹烯酮口服给药后，其吸收较快，消除相对也较快，生物利用度低。喹烯酮代谢物分析表明喹烯酮给药后，90%以上以消化道以原形排出，少量吸收以肝代谢，从肾脏仍主要以原形排出。四、“喹烯酮”毒理学研究1、 急性毒性试验 大白鼠口服“喹烯酮”急性毒性LD50为8178.99mg/kg, LD50的95%可信限为7473.09-8295.51 mg/kg.小白鼠口服“喹烯酮”急性毒性LD50为14397.93mg/kg, LD50的95%可信限为13372.11-15502.44 mg/kg.以上均在实际无毒范围之内。耐受量大（g/kg）鸡 30只饲喂5g/kg2周， 无死亡猪 3头灌服2g/kg3周， 无异常2、 蓄积毒性试验 20天蓄积毒性试验，1/20、1/10，1/5，1/2LD50剂量灌服，确定“喹烯酮”在小白鼠体内无明显蓄积作用。小白鼠连续口服1/2LD50（7500mg/kg）20天共服药150g/kg，再加上赋型剂325g/kg，大剂量，20只中只有5只机械致死（腹胀死亡），余15只仍能回复正常。可见该药毒性之低。3、 亚急性毒性 亚急性毒性试验无异常“喹烯酮”对小白鼠亚急性毒性生理生化指标的影响。组别项目空白对照组（5只）喹烯酮实验组（5只/组）75ppm150ppm300ppm红血球计数百万/毫米3始7.97.37.58.2终8.57.69.07.8血红蛋白测定克/100ml血始13.712.014.213.8终14.014.614.813.5肝功能检查SGPT /100ML血始7.607.487.707.63终7.507.507.657.52肾功能检查X.P.Nmg/100ml始31.534.632.735.9终33.233.731.937.4从上表中可见，实验组与空白对照组生理生化指标无明显差异，实验组开始前与结束无明显差异。4、 慢性，亚慢性毒性试验慢性，亚慢性毒性试验选择剂量为正常给药剂量的2-4倍，连续饲喂90天和20个月（600天）均未出现毒副反应。病理组织学及生理生化检测指标均正常。5、 特殊毒理学试验（1） 致畸试验在饲料中添加“喹烯酮”75ppm、150ppm、300ppm三个剂量组，经过F1、F2、F3三代长期饲喂，三个组各代小白鼠的总胎数均比空白对照组有明显提高，胚胎吸收率降低，差异显著。各试验组及空白对照均未见活胎外观畸形、骨骼及内脏畸变。喹烯酮对小白鼠胚胎的影响组别繁育代数孕鼠数总胎数活胎数吸收胎数吸收率%对照组75ppm组150ppm组300ppm组F1F1F1F11010 101011410811312210610610711682667.021.855.314.92对照组75ppm组150ppm组300ppm组F1F1F1F1101010101051231321349011512112615811814.296.508.335.97 P0.05p0.01p0.01p0.01喹烯酮3个剂量组的体重增加均高于空白对照组，阳性对照药水杨酸钠与空白对照组相比，有明显的阻止体增重作用（减重），差异显著。喹烯酮对怀孕大白鼠胚胎致畸作用组别剂量(mg/kg/d)平均活胎数（只）平均窝重（克）死胎率（%）吸收率（%）空白对照喹烯酮喹烯酮喹烯酮水杨酸钠020451110222008.811.09.610.03.833.634.137.136.59.91.141. 91 2.102.0057.8911.002.007.5010.5046.433个试验组平均活胎数和平均窝重高于空白对照组,其吸收率低。死胎率差异不显著。“喹烯酮”对大白鼠胚胎外观、内脏及骨骼无影响，未见畸变而阳性对照药水杨酸钠对照组出现部分胎鼠脑外露，尾断裂、尾尖卷曲及环状出血、体小、尾短等畸变。（2） 小白鼠致癌试验试验共分四个组，每组饲喂期限均为20个月，每组数量为110只组别剂量临床检查血液及生化检查病理组织检查病变及癌变频变死亡数t值测定空白对照喹烯酮喹烯酮喹烯酮075ppm150ppm300ppm无异常无异常无异常无异常正常正常正常正常36 1412 4 9内脏 9体表9 339181519P0.01P0.01P0.01结果表明“喹烯酮”具有防病作用，试验期间给药组动物体表及脏器疑似癌肿的出现频度和小白鼠的自然残废数明显低于对照组，差异显著（p0.01）。空白组癌变有肛门外肿瘤及尾赘生物和肺组织肿瘤；试验组主要为尾部赘生物。（3） 喹烯酮的致突变实验喹烯酮对鼠伤寒沙门氏菌回变菌数的影响受试物剂量（g/皿）TA98+S9 -S9TA100+S9 -S9喹烯酮015105035 5334 3631 3432 3218 19135 169 132 154 112 147 116 140 109 123自发回变 34 67 127 138阴性对照 30 37 139 171阳性对照NaN39-芴酮2-AF 1657 26531546 1700 无论直接作用或代谢活化作用，均未呈现致突变性。 （4）“喹烯酮”对小白鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验受试物剂量（mg/kg体重）动物数观察细胞数含微核细胞数微核率（）花生油喹烯酮环磷酰胺0.5ml/只750150010006055555500050005000500050005334611.00. 60. 60. 812.5试验组与对照组相比,未见微核率明显增加。（5）“喹烯酮”对雄性小白鼠精子畸变试验受试物剂量（mg/kg体重）动物数观察精子数畸变精子数畸变率（）豆油对照喹烯酮环磷酰胺0.5ml/只50075030006055555500050005000500050001601521551516491. 23.0 3.1 3.0 13.1p0.05与对照组豆油相比, “喹烯酮”未引起小鼠精子畸变率明显增加。五、“喹烯酮”在机体内残留试验1、 14C标记喹烯酮的机体组织消除规律研究鸡、猪多次内服喹烯酮（7.0mg/kg，每隔12h1次，连用6次） 第6次给药后喹烯酮在鸡、猪组织中的浓度（g/g,ppm）时间（h）脂肪肌肉肝脏肾脏鸡猪鸡猪鸡猪鸡猪681012244896120NDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDNDND3.06831.4517.2.10000.67231.87000.91131.48300.34791.25100.22201.01300.5311NDND0.71000.50120.43000.31120.0301NDNDND1.71500.77971.39310.85091.09310.38390.84330.32390.60370.42530.46590.1917NDND0.49000.31780.28570.20000.0250NDNDND ND=not detectable(测不到) 数据为6只鸡的平均值标准差 鸡、猪多次内服喹烯酮（7.0mg/kg，每隔12h1次，连用6次）第6次给药后组织中消除情况组织消除速率常数(h-1)相关系数消除半衰期（h）鸡猪鸡猪鸡猪肝肾0.20910.26910.17770.16450.9900.9970.9960.9973.3142.5753.9004.213理论残留时间(h)0.10.050.010.001鸡猪鸡猪鸡猪鸡猪肝肾17.011.717.715.820.314.321.520.028.020.330.529.839.028.843.543.8ppm(mg/kg)多次内服喹烯酮的粪便排泄以每日7mg/kg剂量，鸡、猪内服，每隔12h1次，连用6次，从给药后收集粪便，计算药物在粪便中排泄量。组数第一组（6h）第二组（8h）第三组（10h）第四组（12h）第五组（24h）第六组（48h）鸡猪鸡猪鸡猪鸡猪鸡猪鸡猪给药量（mg）78.7211.077.7223.177.7209.556.3219.895.5215.674.6218.9粪便中测得药量（mg）67.5166.669.41196.670.07189.950.8200.186.1198.567.8201.4粪便排泄量占总给药量百分比（%）85.779.089.388.190.290.690.391.090.392.190.893.0 鸡、猪内服喹烯酮后，10小时内有90%以上喹烯酮以原形从粪便中排出，吸收入血及组织的量很少。2、最高残留限量及休药期确定： 日允许摄入量（ADI）为0.225mg/kg,合理的ADI值为0-0.225mg/kg即0- 225g/kg，对60kg体重成年人来说ADI值为0-13500g。ADI=NOEL（mg/kg）*体重（kg）安全系数 人体重假定为60kg,安全系数为100。NOEL：对适宜的试验动物、无可观察到的作用时的剂量。组织停药6h用14C标记法测得标示残留物的平均值（ppm）计算所得的容许量（ppm）鸡猪肝肾肌肉脂肪3.06831.715NDND0.710.49NDND5101.710 停药后6小时所有可食用鸡、猪组织中“喹烯酮”浓度均低于计算所得的安全组织浓度。因此，停药期为零天。六、动物传代繁育试验小白鼠三代繁殖情况比较级别鼠数代数出生总数4天内成活数21天内成活数成活率（%）哺育成活率（%）24天窝重（g）平均只重（g）对照组101010F1F2F386 8592868391868390100.0097.6597.83100.00100.0098.9093110.3475ppm101010F1F2F3919611091961109096110100.00100.00100.0098.90100.00100.00124411.31150ppm101010F1F2F38790110878999878999100.0098.8999.00100.00100.00100.00115411.61300ppm101010F1F2F3889110888891088889108100.0097.90100.00100.00100.00100.00129311.97通过三代繁育观察，试验组提高了产仔数、成活数、窝重及个体平均重，差异显著(p0.01)。七、环境毒性试验1、 对植物的环境毒性 为考查药物经过动物代谢后排出体外的粪便对环境的影响，将粪便堆积发酵作为肥料，置花盆进行施肥试验，经长期观察，花生长旺盛，叶绿花多，未出现不良影响。检测叶与花无“喹烯酮”残留，对环境无不良影响。花的品种观察时间对生长的影响喹烯酮的残留量试验花与叶对照花与叶花叶君子兰一品红马蹄莲对 红无花果佛 手万年青扶 桑二年二年二年二年二年二年二年二年花期长、叶绿花期长、叶绿 花白、叶绿花红、叶绿有果、叶绿花多、叶绿叶大花白、叶绿花期短、叶绿花期长、叶绿 花小、叶绿花红、叶绿无果、叶绿花多、叶绿叶小花少、绿黄无无无无无无无无无无无无无无无无2、对鱼的环境毒性组别鱼种尾数水休12天观察结果15天观察存活尾数喹烯酮对环境影响对照组鲫鱼13不清10天全部死亡背部有圆形溃烂腹有出血点，鳞片脱落050ppm试验组鲫鱼14清澈微重1尾死亡，其腹有出血点，鳞片脱落13无75ppm试验组鲫鱼13清澈微黄2尾死亡腹有出血点11无 三组等量通气，水温19-20，每天换水一次。八、临床试验结果1、 肉鸡应用效果9批“喹烯酮”对明显肉鸡临床应用后的效果统计 单位：g、%批次组别鸡数存活数死亡率（%）始重末重增重增重率（%）肉料比1空白对照组50ppm二甲硝咪唑50ppm喹烯酮预混剂75ppm喹烯酮预混剂303030302525253016.6716.6716.67044547342546219182168214422331473169517191771100.00115.10116.70120.201:3.051:2.651:2.621:2.422空白对照组75ppm喹烯酮预混剂90ppm喹烯酮预混剂1001001009395957.005.005.00400414411196721122084156716981673100.00108.40106.801:3.301:3.031:3.123空白对照组75ppm喹烯酮预混剂75ppm喹烯酮加20ppm痢菌净6666665659580.671.673.33462464472197222332048151017691576100.00117.20104.401:3.071:2.491:2.844空白对照组75ppm喹烯酮预混剂75ppm喹烯酮加20ppm痢菌净12012012010311511410.004.175.00540588558197621712069143615831511100.00110.20105.201:3.001:2.641:2.785空白对照组75ppm喹烯酮预混剂75ppm喹烯酮加55ppmDVD75ppm喹烯酮加5ppmDVD加0.5%腐殖酸钠60606060575853555.003.3311.678.333463653463751406170512951520111413409491145100.00120.3085.20102.801:2.801:2.421:2.461:2.876空白对照组75ppm喹烯酮预混剂70110661055.714.546316251966213013351505100.00112.701:2.511:2.427空白对照组75ppm喹烯酮预混剂19020016818311.588.509009152090234511001430100.00120.201:2.651:2.448空白对照组75ppm喹烯酮预混剂16521413820116.366.079259452195234512701400100.00110.201:2.571:2.459空白对照组75ppm喹烯酮预混剂11692499108423947.274.207487552000223012521475100.00117.801:2.541:2.452、喹烯酮对猪的临床验证效果10批猪试验结果 kg,%试验次数鉴别始重饲喂30天饲喂40天或60天发生腹泻头数头数体重净增重增长率饲料消耗肉料比体重净增重增长率饲料消耗肉料表1 1 试验组对照组1010121.05120.35209.50201.0088.3880.65109.6100.0119.50119.501:3.001:3.28330.00308.00208.00187.65111.03100.00648.00648.001:3.101:3.4523722 试验组对照组1010120.20121.50210.50121.5590.3085.20106.00100.00268.75268.751:2.971:3.1513323 试验组对照组55560.5060.0060.00111.50107.75108.0051.0047.7548.00106.2598.43100.00201.50201.50201.501:3.951:4.26(喹乙醇)1:4.194 试验组对照组66666.0065.5065.25137.50139.00123.0071.5073.5057.75123.80127.27100.00175.50175.50175.501:2.451:2.381:3.15231.00231.25214.75165.00165.75149.50110.37110.87100.00474.00474.00474.001:2.571:2.86喹乙醇)1:3.175 试验组对照组999244.25244.50240.75387.00382.50387.75142.75138.00138.00103.44100.00100.00419.50419.50419.501:2.941:3.04(喹乙醇)1:3.042432496 试验组对照组9982.0082.25342.50331.75260.50249.50104.41100.00577.00577.001:2.211:2.3121507 试验组对照组5454481.20468.00561.00537.0079.8069.00115.70100.00336.00336.001:4.211:4.8725508 试验组对照组5454482.40468.00558.00537.0075.6069.00109.57100.00336.00336.001:4.441:4.879 试验组对照组6060554.50549.50748.00597.50194.25148.00131