原创-机能实验-尿生成因素.doc

.影响尿生成的因素和肾缺血再灌注损伤邵先森南方医科大学摘要 目的 通过观察家兔在正常、注射生理盐水，高渗葡萄糖等情况下，各项指标的变化来探究影响尿生成的因素和肾脏的缺血再灌注损伤。 方法 对正常家兔和肾缺血再灌注损伤的家兔，进行GS、NS注射下，检测其血压、尿量、内生肌酐清除率等的变化。 结果 注射20mlNS和10mlGS都使家兔血压升高，尿量增多，缺血再灌注后的家兔通过三种治疗方案，其血压尿量也增多，但肌酐清除率下降 结论 增加循环血容量，血压上升，肾血流量增加，肾小球滤过血液增多，尿量增加；增加小管液浓度，使原尿重吸收减少，尿量增加；肾缺血再灌注后，其尿量减少，经过治疗，尿量虽有不同程度的恢复，但内生肌酐清除率下降，排泄能力降低，功能受损。关键词：肾脏；尿生成；尿肌酐；缺血再灌注损伤 肾是机体的主要排泄器官之一，同时也具有内分泌的功能，探究肾泌尿功能的影响因素，可以让我们更加对肾的排尿机制有所了解，同时可以指导临床根据不同病变部位进行用药，根据不同靶点研制特异性靶向性更强的药物。肾缺血再灌注损伤在临床很常见，所以对其机制及预防方法的研究就显得格外重要，通过对内生尿肌酐清除率这一指标的测量，来研究在肾缺血再灌注后其功能的变化。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物 家兔1.8kg（由南方医科大学动物实验中心提供）1.1.2 试剂 20乌拉坦溶液；生理盐水；20高渗葡萄糖溶液；0.2 肝素；肌酐测定试剂1.1.3 器材 家兔手术台；PcLab及计算机；动静脉输尿管插管；动脉夹；压力换能器；三通管；注射器；兔绳；纱布；剪刀；分光光度计；离心机；称重称1.2 方法1.2.1 实验动物前期处理 取一只家兔称重，按照5ml/kg，从耳缘静脉注射20乌拉坦溶液进行麻醉，麻醉成功指标为：四肢肌肉松弛；疼痛反射、角膜反射消失。待麻醉麻醉效应趋于平稳后，将家兔仰卧位固定，备皮，沿甲状软骨下正中剪开皮肤，分离左颈动脉，右颈静脉。左颈动脉插管，右颈静脉插管，补液30ml NS，待血压平稳后，左输尿管插管。计算其每分钟尿量，同时用分光光度计测量尿中肌酐含量1.2.2 尿的生成过程 1.从右颈静脉注射20ml NS，15分钟后，测其心率、血压、尿量等指标。2.再从右颈静脉注射10ml GS，15分钟后，测其心率、血压、尿量等指标。1.2.3 肾缺血再灌注损伤 1.从腹正中切口，游离左肾动脉，动脉夹夹闭15分钟，观察其心率、血压、尿量等指标。2.松开动脉夹，记录其在15分钟内，各指标的变化，并测量尿的肌酐浓度。3.分为3组，分别对其家兔通过右颈静脉注射，NS 20ml，或NS 19ml 速尿 1ml，或NS 10ml GS 10ml，分别测量尿中肌酐浓度。1.2.4 尿肌酐测定方法 1取样：取尿液10l与2ml蒸馏水按1：200比例稀释。加样（ml）标准管测定管空白管测试样品上清01.60试剂一(Cr标准品)1.600蒸馏水001.6试剂三0.5 0.5 0.5 试剂四0.5 0.5 0.5 2加样表1 . 尿肌酐测定加样量表 3测定 37 10min水浴，以蒸馏水调零， 测510 nm 处光密度。4计算 尿肌酐(mmol/L) = （测定管OD - 空白管OD）/ （标准管OD 空白管OD ）x标准品浓度 x 201倍内生肌酐清除率Ccr =尿肌酐浓度/血肌酐浓度x 尿量(ml/min)5参考值 血肌酐浓度：正常：152.3umol/L ：175.6umol/L 标准品浓度：10umol/L标准管OD值 = 0.075, 0.0692.结果2.1 尿生成的影响因素从表1，可以看出注射NS后，家兔血压、尿量都有减少，注射GS后，血压、尿量也减少，且幅度更大。与预期相反，应该跟实验过程中意外导致的大出血有关。表1.平均动脉压尿量初始140mmHg0.25ml/min注射NS 20ml135 mmHg0.15 ml/min注射GS 10ml57.4 mmHg0.17ml/min2.2 肾缺血损伤再灌注从表2，可以看出夹闭肾动脉后，血压下降，同时因为阻断了肾脏血流供应，使其不排尿。再灌注后，使肾的损伤进一步加重，但毕竟恢复了血流供应，所以有一定的尿液排出。当分别采用三种不同的治疗方法后，尿量均有提高。表2.平均动脉压尿量夹闭左肾动脉15min110 mmHg0 ml/min再灌注15min后118 mmHg0.1 ml/min注射10mlNS 10mlGS129 mmHg0.2 ml/min注射19mlNS1ml速尿85mmHg0.15ml/min注射20mlNS94mmHg0.11ml/min2.3 尿肌酐测定结合表3.4.5及其他两种治疗方法所得数据，可以看出肾缺血再灌注后，其内生肌酐清除率低于正常值，其后经过治疗，内生肌酐清除率虽有提升但仍旧低于正常值，提示肾损伤依旧存在。实验初始时，家兔尿肌酐测定值，如表3表3标准管空白管测定管OD值一0.0530.579OD值二0.0540.588OD值三0.0550.582平均OD值0.0690.0540.583肌酐清除率为83.1肾缺血再灌注后，尿肌酐测定值，如表4表4标准管空白管测定管OD值一0.0530.498OD值二0.0530.510OD值三0.0540.502平均OD值0.0690.0530.503肌酐清除率为23.4采用NS 10ml GS 10ml治疗后，尿肌酐测定值，如表5表5标准管空白管测定管OD值一0.0510.472OD值二0.0540.552OD值三0.0570.517平均OD值0.0690.0540.513肌酐清除率为50.1采用注射NS 20ml的治疗方法，其正常内生肌酐清除率为9.9；再灌注后内生肌酐清除率为0.8；注射20mlNS治疗后，内生肌酐清除率为5.8采用注射NS 19ml+1ml速尿的治疗方法，其正常内生肌酐清除率为43.4；再灌注后无尿液产生；注射NS19ml+速尿1ml后，内生肌酐清除率为1.23.讨论3.1 影响尿液生成的因素有肾小球滤过膜通透性，有效渗透压。在本实验中，初始血压140mmHg，经过注射20ml生理盐水，增加了家兔的循环血量，使其BP上升，循环血量的增多刺激迷走神经抑制VP的合成与释放，使得远端肾小管和集合管对水的冲吸收减少，同时NS的注入使肾小球的血浆渗透压降低，有效滤过压升高，肾小球滤出液增多。重吸收减少，有效滤过压升高，导致家兔尿量的增多。1理论上是如此，但在实际操作中，由于三通管使用出现了一个失误，导致家兔丢失了一定量的血液，导致循环血容量下降，所以实际来看，尿量减少，血压还下降了一些。3.2 注射高渗葡萄糖溶液，可以看出其对血压的升高作用相比于注射生理盐水明显弱一些，原因可能是，首先其注射量相比于生理盐水就明显要少一些，而且其中葡萄糖含量较高，主要起到增加血浆渗透压的作用，使得有效滤过压降低，减少了水在肾小球部位的滤过，增加了循环血量，使血压上升。但由于葡萄糖浓度过高，其从肾小球滤过进入小管液中，增加了其渗透压，超过了肾小管的肾糖阈，使得在远端肾小管和集合管对水，钠重吸收大大减少，在某种程度上又减少了循环血量。3.3 导致肾缺血再灌注损伤的主要原因是活性氧损伤、钙超载、白细胞呼吸爆发、补体的级联作用。在这四种作用的影响下，使得肾损伤进一步加重，血肌酐上升，而尿肌酐则下降。同时由于恢复了血流供应，所以尿量及血压都有了一些提升。23.4 对肾缺血再灌注家兔进行三种不同方式的治疗后，可以发现由于静脉注射液体的原因，其血压及尿量均有不同程度的上升，由于此项操作是分组进行完成，参考其他组数据可以看出，10mlNS+10mlGS和19mlNS+1ml速尿的治疗方案对于损伤大鼠的肾功能恢复效果相对较好，GS的作用在3.2已做说明，速尿的作用机制则是，呋塞米与髓攀升至粗段的钠钾氯共同转运系统可逆结合，抑制其转运能力，是氯化钠重吸收减少，降低肾脏的浓缩功能，产生了利尿作用，排出等渗尿。3.5 在内生肌酐清除率计算中，当缺血再灌注后，测其清除率可以发现明显低于正常值，甚至出现根本无尿的现象，主要就是肾脏因为15min的缺血缺氧导致其功能受到损害，再恢复灌注后，由3.3的讨论可知，更加加重其功能损害，所以出现肌酐清除率下降的现象。应用三种不同的治疗方法治疗后，可观测到其内生肌酐清除率均有提升，尤其是NS10ml+10mlGS效果最为明显。主要是单纯使用20mlNS治疗时，稀释了肌酐在血中的浓度，也就导致了尿肌酐含量的下降，所以虽然清除率较治疗前有提高，但仍旧低于其他两种治疗方法。References:1.温敏霞, 王黎明与覃莉