T淋巴细胞亚群CD4、CD8、CD3 细胞检测临床应用技术讲座ppt课件.ppt

T淋巴细胞亚群CD4 CD8 CD3细胞检测 临床应用技术讲座 免疫功能量化指标 众所周知 体育锻炼能提高免疫功能 冬虫夏草能提高免疫功能 免疫球蛋白能提高免疫功能 蜂胶 螺旋藻亦能提高免疫功能 然而免疫功能是什么 免疫功能是否有效提高 提高到多少 缺少科学客观的量化指标 科学关注 食管癌患者存在着细胞免疫功能抑制 了解T淋巴细胞的免疫活性状态 对研究肿瘤的生物学行为具有重要意义 癌症 2005年第24卷07期 冬虫夏草制剂加化疗组化疗后 可以改善化疗所致的免疫功能低下 齐齐哈尔医学院学报 2006年12月第27卷17期 急性运动 有氧运动和长期适量运动与人体运动免疫调节产生非常重要联系 对T淋巴细胞及其亚群的免疫功能有重要影响 中国临床康复 2003年第7卷18期 免疫功能 我们究竟了解多少 以癌症为例 正常人每天都会产生100 200个原癌细胞 体内免疫系统能及时发现并消灭它们 若人体免疫机能下降 便无法有效清除癌细胞 细胞大量增殖最终形成肿瘤 免疫功能 人体抵御外来病原体侵袭 进行自我保护的一种能力 免疫功能 人体免疫防护伞 如肿瘤 80 以上肿瘤的发生 是因为人体免疫功能长期低下 肿瘤在免疫功能低下的情况下 易发生转移 复发 目前通常针对天平一端 如癌细胞进行各种检测 如 癌胚抗原 甲胎蛋白等肿瘤标志物 或早期癌细胞PET CT检测 对天平另一端 免疫功能 多以白细胞检测为主 缺少CD3 4 8细胞计数此类精细化检测项目 人体大部分的疾病与免疫功能低下有关 免疫功能 精细化检测 免疫系统简介 免疫系统 免疫器官 胸腺 骨髓 淋巴结等 T淋巴细胞B淋巴细胞NK细胞巨噬细胞 粒细胞等 CD3CD4CD8 T淋巴细胞 电镜图 免疫系统 是人体抵御病原体入侵最重要的保卫防护系统 由免疫器官 免疫细胞 以及免疫分子组成 免疫分子 抗体 细胞因子等 免疫细胞 T淋巴细胞 细胞免疫通过效应T细胞分泌穿孔素等 摧毁侵入到寄主细胞内的病毒 胞内寄生菌或外来的组织团块 癌变的细胞等 B淋巴细胞 体液免疫通过效应B细胞分泌抗体 与抗原发生特异性结合 清除的是游离在寄主细胞外的抗原及其产生的有毒物质 免疫细胞 细胞免疫主力军 T淋巴细胞 CD4细胞 诱导 辅助性T细胞 人体免疫系统最重要枢纽细胞 又被称作 人体免疫系统的司令官 CD3细胞 成熟T淋巴细胞 表示人体总T细胞水平 反映免疫功能状况 CD4 CD8比值 临床诊断敏感指标 CD4与CD8相互制约共同作用 比值异常 可迅速判断人体免疫功能发生紊乱 CD8细胞 抑制 细胞毒性T淋巴细胞 能直接识别并杀伤致病细胞 与CD4协作抵御外侵 目前已发现CD系列细胞有近百种 在人体细胞免疫中起重要作用 并具有临床意义 的主要是CD3 CD4 CD8等细胞 正常参考值 CD3 770 2860 ulCD4 414 1440 ulCD8 238 1250 ulCD4 CD8 0 7 2 87 汤钊猷中国工程院院士 全国重点学科肿瘤学学科带头人 著名肝癌专家 复旦大学肝癌研究所所长 对待癌症 除针对性治疗外 一定要努力改造自己 让自己提升免疫功能 才能在抗癌战争中占有利地位和优势 2011年诺贝尔生理学或医学奖授予美 法 加三位科学家在免疫系统方面的研究 免疫学是距离临床最近的学科 它涉及整个人体 每个细胞 在人类破解生命与疾病之谜道路上 发挥不可估量的作用 免疫 不可或缺的诊断 免疫 不可或缺的诊断 曹雪涛中国工程院院士 中国医学科学院副院长兼医学免疫学国家重点实验室主任 免疫学的研究成果已经渗透到临床的几乎每一个角落 应用免疫学技术和方法研究疾病发病机制以寻找可以应用于诊断 治疗和预防疾病的新方法 新试剂 新药物越来越得到重视 技术背景 项目起源 比尔 梅琳达 盖茨基金会成立CD4专项基金 全球征募具有简单 廉价 快速 有效特性的CD4细胞检测新方法 仪器投资大配套试剂贵工作条件苛刻操作人员要求高 制约 瓶颈和焦点 CD4细胞检测 传统CD检测方法 流式细胞法 被美国垄断 技术背景 9月相关论文发表于AmericanBiotechnologyLaboratory期刊 梦起圣地亚哥 2002年8月回国 开始该项目的研发 180多日的失败 实验条件的限制 实验理论饱受质疑 资金短缺 重重问题让研发举步维艰 艾滋成为坚持的动力 不仅仅是为一个期待的眼神 更是为一个生命的延续 艾滋成为动力 特异性抗体事先包被在芯片基板上 样本中表达有该特异性抗原细胞与芯片接触反应后 特异性细胞便被分离固定 再通过自动计数仪对固定细胞分析 CD3 4 8细胞检测玻片 技术原理 室温操作保存无需冷藏 长期保存 可随时随地复查 操作时间短易掌握 低成本 静脉 末梢血均可 仪器自动读数可视化分析 优势特点 2006年 MeasuringCellularMetabolismofImmobilizedCells 正式获得美国专利局批准 PATENTNo US7141369 SoloInventor CaoBo 以下三个美国专利 对该平台技术构成了一个完整知识产权保护体系 专利一 MeasuringCellularMetabolismofImmobilizedCells 专利二 Measurementofthecellactivityandcellquantity 专利三 Methodsandkitsfordetectingatargetcell 2010年 Methodsandkitsfordetectingatargetcell 正式获得美国专利局批准 PATENTNo US7855068 SoloInventor CaoBo 美国专利 北京协和医院 北京佑安医院 武汉大学附属人民医院 1300余例临床验证结论 SemiBio细胞免疫芯片与流式细胞仪相关性为0 95以上 上海中山医院 上海市公共卫生中心 上海市第六人民医院 临床验证机构 临床验证 医疗器械生产企业许可证 医疗器械注册证 QMS考核报告 新药证书 上海医学科技奖 美国专利 2010中国国际工业博览会创新奖 资质认证 政府支持 2004年上海市科委生物技术基础课题研究项目2005年上海市科委重大专项科技攻关项目2006年国家科技部创新基金2007年中小企业科技部创新资金2008年获上海医学科技奖2009年上海生物医药产业转化项目2009年上海高新技术成果转化项目2010年上海市科委 科技创新行动计划 生物医药领域重大专项2010年获中国国际工业博览会 创新奖 2011年通过WHO世界卫生组织 南非国家实验室 NHLS 泛非认证2012年第19届美国华盛顿 世界艾滋病大会 参展并发表大会论文 该技术被作为新技术收录于WHO2007版 LaboratoryGuidelinesforenumeratingCD4TLymphocytesinthecontextofHIV AIDS 中 成为对艾滋病提供有效的诊断和治疗手段的技术参考 对美国CDC实验室 南非卫生厅等相关技术人员进行该检测方法的培训 2011年4月 顺利完成南非国家实验室 NHLS 泛非认证 国际应用 Abiochipforspecificcellseparations AmericanBiotechnologyLaboratory September2002 28 AbiochipforCD4cellcount The2ndInternationalAIDSSocietyConference July2003 Paris HIVtestingtechnologiesaftertwodecadesofevolution IndianJMedRes121 April2005 LaboratoryGuildelinesforenumeratingCD4TLymphocytesinthecontextofHIV AIDS WHOJun 2007 一种CD4细胞计数方法 第二届亚洲检验技师学术大会 2005 细胞芯片法测定健康体检人群全血中CD4细胞的临床应用价值 实用医学杂志 2007 23 20 加味玉屏风汤对提高慢性病患者CD4指标临床观察 上海中医药杂志 2007 41 10 玉屏活血汤提高老年气虚证患者CD4 T细胞临床研究 江西中医药 2011 8 41 老年冠心病患者免疫反应的研究 检验医学 2011 26 12 发表论文 CD3 4 8玻片检测与流式比较 SemiBioAssay细胞免疫芯片 FCM流式细胞法 目前 细胞免疫相关检测在临床科室少有开展 滞后于日趋上升的临床需求 革命性突破 临床应用 临床应用 通过CD3 CD4 CD8T细胞检测 掌握疾病发病机制中 免疫参与程度 制定 免疫治疗 方案 在肿瘤 感染性疾病 心肺疾病 自身免疫性疾病 各种原因导致的免疫功能低下等疾病中广泛应用 掌握疾病治疗过程中 免疫动态变化 评估治疗风险 用药药效 及机体恢复程度 掌握亚健康人群 免疫水平及变化 筛查肿瘤等重大疾病隐患 临床应用 临床应用 肿瘤科 应用 肿瘤科 恶性肿瘤的发生 发展 转移与人体免疫功能下降密切相关 人体的抗肿瘤免疫以细胞免疫为主 体内发挥抗肿瘤免疫作用主要由CD4和CD8细胞完成 CD4细胞能促进效应细胞抗肿瘤作用 CD8细胞则主要起相反免疫抑制作用 机体处于肿瘤状态 体内组织胺水平升高 激活CD8 抑制性T淋巴细胞 分泌抑制因子 抑制CD4 辅助性T细胞 和B细胞增殖与分化 从而抑制机体免疫功能 1 肿瘤患者处免疫抑制状态 T淋巴细胞降低 2 肿瘤患者T淋巴细胞与病程相关 随病程逐渐降低 CD3 CD4 CD4 CD8细胞数下降程度 期 期 期 期 应用 肿瘤科 摘自 肿瘤学杂志 2004年第10卷第3期 临床案例 42例肺癌患者 转移患者CD3 CD4及CD4 CD8比值均显著低于未转移患者及正常组 3 肿瘤患者T淋巴细胞持续低下 转移率高 易复发 在化疗或放疗或手术前 及时给予免疫增强同步治疗 有助于提高疗效 组合治疗 化疗中 同步给予免疫增强剂 如干扰素 左旋咪唑等 后 CD8下降 CD4 CD4 CD8升高 机体自身抗肿瘤免疫效得到有力发挥 患者恢复良好 4 肿瘤患者的化疗 放疗 手术治疗会导致免疫抑制 杀伤或切除肿瘤细胞同时具有非选择性杀伤作用 会损害机体细胞免疫功能 应用 肿瘤科 应用 肿瘤科 T细胞CD4 CD8 CD3检测介入时间 1 入院基础检测 了解患者免疫功能初始状态 2 放疗 化疗 手术前检测 评估治疗前免疫状态 预测疗效及风险 3 放疗 化疗 手术后检测 评估治疗后免疫改善状况 4 出院前检测 预后判断 5 易转移 复发 每月跟踪检测 判断是否发生转移 复发 全国现有三级医院约1300家 二级医院约6500家 其中80 以上无流式细胞仪 同时由于流式成本昂贵 操作繁琐 CD3 4 8数量及比值检测 虽然对于肿瘤治疗意义重要 但临床基本未开展 世界新发肿瘤病人20 在中国 卫生部统计资料表明 中国年均肿瘤新发病例超220万 死亡病例超160万 其中2008年 中国肿瘤新发病例为280万 死亡病例为196万 同时 中国肿瘤治疗市场年增长率超30 应用 肿瘤科 临床应用 感染科 感染性疾病 应用 感染科 感染性疾病 感染和抗感染免疫贯穿于整个感染发生 发展及其不同转归全过程 人体抗感染作用主要由细胞免疫介导 免疫功能紊乱 易引发感染性疾病 感染 同时可直接抑制 干扰和损伤免疫系统 应用 感染科 感染性疾病 如乙型病毒性肝炎 当患者免疫功能低下便无法清除HBV病毒 以致其在体内持续存在 通过检测T淋巴细胞数值变化 可判断患者有无慢性化倾向 并为临床准确使用干扰素等免疫调节剂治疗提供依据 与HBV病毒载量检测同步或与之相对应 如HBVDNA病毒复制期 HBV持续感染期 HBV清除过程中 肝功能谷丙转氨酶 ALT 异常期 HBeAg抗体呈阳性后监测等 T细胞CD4 CD8 CD3检测介入时间 乙型病毒性肝炎 应用 感染科 感染性疾病 患者机体的全身免疫功能紊乱和尿路局部免疫功能低下 是造成尿路感染反复发作的重要原因 免疫功能低下发生尿路感染者 单纯使用广谱抗菌素 会导致霉菌感染和耐药菌株产生及菌群失调 反复尿路感染 结合免疫调节治疗 合理调节抗生素使用 缩短治疗及住院时间 改善患者治疗效果 临床应用 老年病科 随着年龄增长 免疫力的逐年减低更易引发感染 肿瘤 自身免疫疾病等反复发作 且病情较重治疗困难 而免疫功能的减退主要与T细胞有关 由于衰老 免疫力下降 导致抵抗力下降 老年人感染发病率明显增高 1 由外源性感染向内源性感染转变 2 感染多重性 易反复 3 病原微生物耐药 变异 治疗困难 老年感染性疾病 应用 老年病科 肿瘤可以发生任何年龄段 但65岁以上老人明显增多 消化系统尤为突出 资料显示 老人肿瘤生长速度与转移的情况较年轻患者缓慢 老年人肿瘤的增多与免疫力下降 特别是细胞免疫功能的减弱密切相关 老年肿瘤 生理衰老 衰老既是生理过程也是病理过程 提高免疫力可以抗衰老或减缓衰老 补锌可改善老年人的免疫功能 锌能够使胸腺维持正常功能与增强胸腺激素分泌作用 增强CD细胞杀伤功能 口服硫酸锌300mg d 一个月 疗程 免疫功能明显提高 中药抗衰老 人参 黄芪 灵芝 银耳 刺五加 党参 枸杞 鹿茸等 应用 老年病科 临床应用 呼吸科 应用 呼吸科 呼吸道是病毒感染主要靶器官 病毒感染可降低呼吸道防御功能 从而引起反复感染 免疫功能低下患者 细菌性肺炎发病率增高 其死亡率10倍于正常人 特别是金黄色葡萄球菌感染 由免疫力低下引起的肺炎约占肺炎的5 应用 呼吸科 其反复发作 难愈重要原因是反复呼吸道感染 此类患者均存在免疫细胞失衡和免疫紊乱 同时哮喘患者由于长期不规范应用抗生素和全身激素 更加使免疫功能紊乱 感染与免疫紊乱互为因果 形成恶性循环 急性发作期 与血气和肺功能FEV 检测同步参考 用药期间 每2 4周随诊检测1次 3个月后每2个月左右随诊检测1次 共观察12个月 定时监测控制 气道炎症是支气管哮喘的病理基础 肥大细胞释放炎性介质 引起支气管哮喘早期速发反应 而激活肥大细胞和启动炎症反应者主要是T淋巴细胞 T细胞CD4 CD8 CD3检测介入时间 支气管哮喘 应用 呼吸科 COPD反复发作和加重与呼吸道感染有关 免疫功能低下是引起老年COPD患者易受病毒 细菌感染的重要原因 老年COPD急性加重期患者因存在长期营养不良 感染等因素导致呼吸功能下降 机体氧供不足 易引起器官缺氧 从而影响机体免疫细胞的发育 成熟 导致机体免疫功能下降 从而引起全身及肺部免疫功能衰竭 慢性阻塞性肺疾病 COPD 临床应用 心内科 应用 心内科 其主要致病原是柯萨奇病毒 通过对心肌的直接损伤或诱发自身免疫反应导致心肌炎的发生 而感染病毒2周后 免疫所致心肌损伤是病毒性心肌炎的主要发病机制 大多数心血管疾病的发生有免疫学机制参与 免疫反应可导致心肌损伤及心肌能量代谢障碍 病毒性心肌炎 应用 心内科 患者发病入院后次日清晨 AMI患者发病12 20小时内 冠脉造影狭窄以心外膜下主要血管 50 等 作为心电图检查和血清酶检查的有力补充 其主要病因是冠状动脉粥样硬化 T细胞免疫参与动脉硬化的发展 免疫细胞失去平衡 造成斑块内平滑肌细胞破坏 从而导致斑块破溃 出血 形成血栓使血管闭塞等冠脉事件的发生发展 冠心病 T细胞CD4 CD8 CD3检测介入时间 临床应用 风湿免疫科 应用 风湿免疫科 自免疾病的发生是T细胞攻击自身细胞和组织 抗原免疫诱导自身免疫反应产生 导致组织器官损伤和生理功能障碍 RA患者活动期 缓解期 可通过T细胞变化 配合免疫抑制药物控制T细胞活化 从而抑制急性炎症反应 应用 风湿免疫科 RA是一种病因复杂的自身免疫性疾病 T细胞介导自身免疫反应失衡 是造成病人组织病理损伤重要原因 通过T细胞分析可评估RA缓解 复发可能性 指导选择停药时机 类风湿关节炎 RA T细胞CD4 CD8 CD3检测介入时间 临床应用 中医科 中医治未病 辨证论治的整体观念 是建立在人体免疫力平衡基础上 疾病的发生 主要由六淫七情之内外因所致 通过T细胞检测为中医辨证论治提供虚实阴阳判别在免疫学上依据 应用 中医科 如出现脾胃气滞 腑脏阴阳气血失调 湿浊内生等病机时 可依据细胞免疫变化加以判别 方剂用药判断疗效 T细胞CD4 CD8 CD3检测介入时间 女 28岁 主诉疲倦乏力 睡眠不佳 易感冒 无其他器质性疾病 舌淡 苔薄白 表面粗糙 脉浮虚 属正气不足 元气虚弱 辅以T淋巴细胞亚群检测 CD4偏低 CD4 CD8在正常范围下限 用玉屏风散 生黄芪120克 炒白术180克 防风60克 制成散剂 每日9克 代茶饮 一疗程后 患者CD4 CD4 CD8显著升高 主诉症状明显改善 感冒次数减少 说明患者正气提升 免疫功能得到有效提高 论文发表 加味玉屏风汤对提高慢性病患者CD4 指标临床观察 上海中医药杂志 2007年第41期第10卷 应用 中医科 临床应用 儿科 应用 儿科 多种小儿疾病原发或继发地存在T细胞异常 观察T细胞变化 对小儿疾病病因 发病机制以及协助临床诊断与治疗等具有重要价值 小儿发热症状 血常规CRP C反应蛋白 血常规CRP C反应蛋白 CD3 4 8检测 免疫力 结合退热 消咳 肺罗音消失时间观察T细胞变化 特别针对儿科患者可合理调节抗生素使用 改善预后 避免药物损伤 应用 儿科 易感儿 支气管炎 支气管哮喘 肺炎 病情迁延不愈或反复 重要病因是原发或继发性免疫功能低下 小儿支气管炎 T细胞CD4 CD8 CD3检测介入时间 临床应用 外科 应用 外科 手术 麻醉 围手术期输血均可产生免疫抑制 手术创伤是产生免疫抑制的重要原因 不同麻醉可造成不同程度的免疫抑制 同型异体输血 血液中免疫活性成分引起免疫调节作用 通过了解患者细胞免疫功能状况 及时掌握手术后恢复进程 减少患者手术并发症 术后感染发生率及死亡率 通过了解患者细胞免疫功能状况 可预测患者手术预后情况 特别是老年患者 提高老年患者免疫水平 可增加手术安全性 手术前 手术后 临床应用 妇科 应用 妇科 不孕妇女体内激素水平等生理及心理压力等因素影响 免疫细胞 如CD4 要不断调整适应变化 产生免疫耐受 表达抑制 功能降低 分泌细胞因子减少等情况 免疫性不孕 不孕妇女外周血成熟淋巴细胞凋亡过度 细胞数量减少 整体淋巴细胞免疫功能降低 造成不孕妇女免疫力低下或存在不平衡状态 临床治疗 应从免疫方面入手对不孕妇女进行保健和治疗 提高免疫功能 应用 妇科 正常妊娠的维持 有赖于胎儿与母体之间免疫平衡的建立和稳定 这种免疫平衡一旦失调 即可导致一系列血管内皮细胞病变 从而发生妊高征 妊娠高血压综合征 平均动脉压 妊高征患者CD4 CD8比值与其平均动脉压呈正相关 即妊高征患者细胞免疫功能失衡程度与妊高征严重程度相关 临床应用 皮肤 性病科 应用 皮肤 性病科 是由HPV感染引起 CA的发生 消退 复发及癌变与机体的免疫功能密切相关 T细胞在炎症性皮肤病发病机制中具有重要作用 常规治疗与免疫调节治疗组合使用 患者预后效果更好 尖锐湿疣 CA 根据不同的病程时间 在发病初期 治疗期 去疣体后康复期 3 6个月复查期内 定期对T细胞变化进行跟踪 可有效根治及预防复发甚至癌变 T细胞CD4 CD8 CD3检测介入时间 临床应用 体检科 应用 体检科 人体80 以上疾病的发生与免疫系统有关 疾病在免疫力低下的情况下易发生 反复 恶化 关注致病因子同时 需关注免疫功能 重大疾病初筛 如肿瘤发生潜伏期 疑似感染性疾病潜伏期 免疫类疾病潜伏期 血液病潜伏期等人群 亚健康普查 如出现食欲不振 头痛 失眠 心绪不宁 精神萎靡 注意力不集中 疲劳 健忘及性功