白细胞检验PPT课件.ppt

1 白细胞检验 2 主要内容 白血病的MICM分型及诊断中的应用急性白血病FAB分型的形态学特征慢粒的实验室检查特征骨髓增生异常综合症 MDS 多发性骨髓瘤骨髓细胞形态学特征与诊断依据 3 白细胞检验的基础理论 粒细胞淋巴细胞 浆细胞单核 巨噬细胞白细胞抗原 4 第四节白细胞抗原 HLA抗原 主要组织相容性抗原 MHA 指的是对于组织相容性起决定作用的一组抗原 编码MHA的基因是一组呈高度多态性的基因组 通常集中分布在某对染色体的特定区域 称之为主要组织相容性复合体 MHC 人类白细胞抗原 HLA 是指HLA基因复合体编码的产物 5 白细胞分化抗原 是指血细胞在分化成熟为不同谱系 分化的不同阶段以及细胞活化过程中 出现或消失的细胞表面标志 1982年国际统一使用分化群 CD 作为白细胞分化抗原和相应McAb的命名 CD分化抗原不仅表达在细胞膜上 不仅存在于血细胞 也存在于其他非造血细胞 6 白细胞检验的基本方法 白细胞功能检验白细胞代谢及其产物检验白细胞动力学检验白细胞免疫标记检测 7 白细胞免疫标记检测的临床意义 造血干 祖细胞的研究 分析和鉴定T细胞亚群检测急性白血病分型诊断恶性淋巴瘤分类诊断微小残留白血病诊断骨髓移植与免疫重建的鉴定血小板研究 8 第十一章白细胞检验的临床应用 急性白血病的分型及诊断中应用慢性白血病中的应用骨髓增生异常综合症浆细胞中的应用 多发性骨髓瘤 9 第一节急性白血病的分型及诊断 一组恶性血液病造血干细胞克隆性疾病具有高度异质性 白血病概述 10 特点 白血病细胞特点 白血病细胞异常增生 分化成熟障碍 细胞质量和数量异常 凋亡减少 正常造血功能受抑制 白血病细胞造血组织外浸润 异常增生 分化成熟障碍 细胞质量和数量异常 凋亡减少 正常造血功能受抑制 白血病细胞造血组织外浸润 11 白血病 临床表现 贫血 出血 感染 肝脾和淋巴结肿大 胸骨压痛发病率与死亡率 2 67 10万人发病率 死亡率高 第六 第八位 第一位 儿童和35岁以下人群急性与慢性的区分 根据白血病细胞成熟障碍 阻滞的阶段 12 一 急性白血病分型 FAB协助组2001年 1976FAB分型 L1 L3M0 M7 1985 1987MIC分型 形态 免疫 细胞遗传 分子生物学分型 M MICM分型 WHO分型 原始细胞 20 造血和淋巴组织肿瘤新分型 MICM 一 分型的历史 13 M0M1M2M3M4M5M6M7M2aM2bM3aM3bM4aM4bM4cM4E0M5aM5b 14 一 分类与分型 1 FAB分型原始细胞 30 为急性白血病的诊断标准 15 2 MICM分型法 M Morphology形态学I Immunology免疫学C Cytogenetics细胞遗传学 以细胞染色体为基础 M Molecularbiology分子生物学 16 FAB分型 急性淋巴细胞白血病 ALL acutelymphocyticleukemia 急性髓细胞白血病 AML acuteMyeloblasticleukemia 17 1 急性淋巴细胞白血病acutelymphocyticleukemia L1以小细胞为主 直径 12um L2以大细胞为主 直径 12um L3以大细胞为主 胞浆有空泡 18 小细胞为主 1 直径 12um 大小较一致 染色质较粗 核仁小不清 19 大细胞为主 2 直径 12um 大小不一 染色质较疏松 核仁较大 1个至多个 20 大细胞为主空泡 3 大细胞为主 大小一致 染色质细点状均匀 核仁1个或多个 胞浆嗜碱 深蓝色有较多空泡 21 2 急性髓细胞白血病acuteMyeloblasticleukemia M1 M7 急性髓细胞白血病微小分化型 M0 1991年命名 22 M0微小分化型急性髓细胞白血病 原始细胞 30 无T B淋巴系标记 至少表达一种髓系抗原 免疫细胞化学或电镜MPO阳性 23 1 急性粒细胞白血病未分化型 M1 骨髓中原粒细胞 90 非红系细胞 早幼粒细胞很少 中幼粒细胞以下阶段不见或罕见 细胞化学染色 POX阳性 24 2 急性粒细胞白血病部分分化型 M2 M2a 骨髓中原粒细胞为 30 90 非红系细胞 单核细胞10 POX SBB阳性 Ph染色体阳性 25 急性粒细胞白血病部分分化型 M2b 骨髓中以异常的中性中幼粒细胞增生为主 其胞核常有核仁 有明显的核浆发育不平衡 此类细胞 30 POX SBB阳性常见染色体易位t 8 21 26 3 急性颗粒增多的早幼粒细胞白血病 M3 骨髓中以颗粒增多的异常早幼粒细胞增生为主 30 非红系细胞 其胞核大小不一 胞浆中有大小不等的颗粒 Aure棒状小体POX阳性分为 M3a 粗颗粒型 27 3 急性颗粒增多的早幼粒细胞白血病 M3 M3b 细颗粒型 28 急性粒 单核细胞白血病 M4 M4a M4b M4c M4Eo 非特异性酯酶染色阳性 NaF不抑制 单核系被抑制 29 按粒系和单核细胞系形态不同 可包括下列四种类型 M4a 原始和早幼粒细胞增生为主 原 幼单核和单核细胞 20 非红系细胞 M4b 原 幼稚单核细胞增生为主 原始和早幼粒细胞 20 非红系细胞 M4c 原始细胞既具粒细胞系 又具单核细胞系形态特征者 30 非红系细胞 M4Eo 除上述特点外 还有粗大而圆的嗜酸颗粒及着色较深的嗜碱颗粒 占5 30 非红系细胞 30 5 急性单核细胞白血病 M5 未分化型 M5a 骨髓中原单核 型 型 80 非红系细胞 31 急性单核细胞白血病 M5 部分分化型 M5b 骨髓中原始和幼稚单核细胞 80 非红系细胞 32 6 红白血病 M6 骨髓中有核红细胞 50 骨髓原始细胞 30 或周围血原始细胞 30 33 7 急性巨核细胞白血病 M7 外周血中有原巨核 小巨核 细胞 骨髓中原巨核细胞 30 电镜PPO阳性 血小板膜蛋白 b b a a或因子 相关抗原 vWF 阳性 34 2 MICM分型法 M Morphology形态学I Immunology免疫学C Cytogenetics细胞遗传学 以细胞染色体为基础 M Molecularbiology分子生物学 35 免疫学分型 Immunology 原理 用单克隆及免疫学技术对细胞膜表面 或细胞质的特异性抗原进行检测 分析其系列分化程度和功能状态 特点 与FAB分型比较 客观 准确 重复性好 确定细胞起源 分化阶段 补充形态学的不足 提高分型的准确性 不能取代形态学分型 36 急性淋巴细胞白血病免疫分型 37 急淋总体免疫标志CD10CD19CD22c mTdTHLA DRCD3c mCD7CD13CD33MPOB系 1 2 T系 3 c m为胞质或细胞膜1 急性早期B前体细胞白血病CD10为阴性2 急性B细胞白血病TdT为阴性 Smlg阳性 3 少于10 的T ALL具有HLA DR表达 38 急性白血病免疫分型标志 一线单克隆抗体二线单克隆抗体髓系CD13 CD117CD33 CD14 CD15 CD61Anti MPO CD41 CD42 血型糖蛋白AB淋巴系CD22 CD19 CD10 CD79a CD20 CD24 Cy SmIgT淋巴系CD3 CD7 CD2CD1 CD4 CD5 CD8非系列特异性TdT HLA DRCD34注 胞质表达 胞核表达 39 急性髓细胞白血病的免疫分型 分型与免疫标志亚型典型的免疫标志亚型典型的免疫标志 CD34 CD33 CD13 MPO CD33 CD14 MPO CD34 CD33 CD13 MPO CD33 CD13 MPO CD33 CD13 CD15 CD33 血型糖蛋白 MPO CD33 CD13 HLA DR阴性 CD41 CD42b CD61 1 CD34抗原表达与低分化形式的AML相关 2 CD13 CD15 CD33与分化程度相对较高的AML相关 3 CD14与单核细胞白血病 M4 M5 相关 4 抗髓过氧化物酶 MPO 单抗为AML所特有 比CD32 CD33更敏感 5 CD34阳性AML缓解率明显低于阴性的AML CD13阳性的AML预后差 生存期短 6 AML细胞表达淋系相关抗原CD2 CD7 CD10者 一般预后较差 40 检测方法1 流式细胞术 flowcytomery 对单个细胞或其他生物微粒 微生物 染色体 人工合成线粒体等 进行快速定量分析和分选的一门技术 CD1 CD247 92年以来 41 原理 细胞表面的抗原 或细胞膜受体 与相关的荧光抗体结合形成带有荧光的抗原抗体复合物 通过流式细胞仪测定 42 2 免疫组织化学染色 1 免疫荧光法 immunofluoresencetechnigue 43 免疫酶染色法 1 APAAP法 碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶 结果 抗原阳性细胞 显色抗原阴性细胞 无色 2 PAP法 过氧化物酶抗过氧化物酶 结果 基本相同 3 ABC法 亲和素 生物素 酶复合物 结果 阳性 显色阴性 无色 44 临床应用 一 识别髓系细胞的抗体 CD13 CD14 CD15 CD32 CD33 CD91 CD156 CD166等 45 识别淋巴细胞的抗体 CD1 CD2 CD3 CD4 CD5 CD8 CD9 CD10 CD19 CD21 CD52 CD77等 临床应用 二 46 临床应用 三 识别巨核细胞和血小板的抗体 CD41 CD42 CD61等 47 临床应用 三 检测T淋巴细胞亚群TH亚群CD 4 CD 8TS亚群CD 4 CD 8 48 临床应用 四 识别不同分化阶段的细胞造血干细胞的主要标志 CD34 CD90 Lin 造血干细胞向髓系定向的标志 CD34 CD33 49 T淋巴细胞系组细胞标志 CD34 TDT CD10 CD7 B淋巴细胞系组细胞标志 CD34 CD19 50 急淋总体免疫标志CD10CD19CD22c mTdTHLA DRCD3c mCD7CD13CD33MPOB系 ALL 1 2 T系 ALL 3 c m为胞质或细胞膜1 急性早期B前体细胞白血病CD10为阴性2 急性B细胞白血病TdT为阴性 Smlg阳性 3 少于10 的T ALL具有HLA DR表达 51 急性白血病免疫分型标志 一线单克隆抗体二线单克隆抗体髓系CD13 CD117CD33 CD14 CD15 CD61Anti MPO CD41 CD42 血型糖蛋白AB淋巴系CD22 CD19 CD10 CD79a CD20 CD24 Cy SmIgT淋巴系CD3 CD7 CD2CD1 CD4 CD5 CD8非系列特异性TdT HLA DRCD34注 胞质表达 胞核表达 52 五 细胞遗传学分析Cytogenetics 是采用染色体检测技术对白血病细胞进行核型分析并分型 找出与FAB分型的相关性或特定核型改变与治疗和预后的相关性 53 染色体命名法 臂 以着丝粒将每一染色体分为长臂 q 和短臂 p 区 两相邻界标之间的区域 从着丝粒往远侧依序编号 带 从着丝粒往远侧依序编号 作为界标的带属于此界以远的区 54 常见染色体结构异常chromosomestructureabnormal 常见染色体结构异常及其英文缩写1 缺失 deletion del 2 易位 translocation t 3 倒位 inversion inv 4 重复 duplication dup 5 等臂染色体 isochromosome i 6 环状染色体 ring chromosome r 55 93 AML核型异常 90 ALL克隆性核型异常AML核型异常ALL核型异常 平衡畸形 倒位和易位 与FAB分型相关 不平衡畸形 数目异常 与FAB分型无关 特异性染色体重排 与免疫学亚型相关 数目异常 与免疫学亚型无相关性 三 临床常见白血病的染色体改变 56 M2急性部分分化型白血病M2 Partofdifferentiationofacuteleukemia 57 M3 早幼粒细胞白血病M3 promyelocyticleukemia 58 临床常见白血病的染色体改变 急性白血病染色体异常见于各种亚型预后价值急性髓细胞白血病t 8 21 M2预后较好t 15 17 M3同上inv 16 del 16q M4E0同上 8各种亚型预后不良 21M1 M7 13双表型预后不良5q 5 7继发性白血病同上t 8 16 M5b同上t 9 22 M1等同上t 4 11 双表型同上急性淋巴细胞白血病t 4 11 L2预后较好t 1 9 L1预后不良t 8 14 L3预后较好超二倍体L1 L2预后较好t 9 22 同上预后较好t 10 14 T细胞型 59 分子生物学 Molecularbiology 白血病是基因突变一起的疾病 作用 1 补充MIC检查的不足 2 发现新的亚型 M3有4个亚型 3 研究白血病的发病机制M2b的融合基因AML ETO 60 染色体上已知与白血病相关的表达基因BCR ABL PML RAR PLZF CBF CBF NPM DEK ETO MYAII EVII CAN 如 MLLMLL AF9t 9 11 p22 q23 MLL AF15t 11 15 MLL ENLt 11 19 q23 q13 3 MLL GMPSt 3 11 MLL AF1qt 1 11 q21 q23 MLL AF10t 10 11 p12 q23 MLL LPPt 3 11 MLL AF6t 6 11 q27 q23 MLL LASP1t 11 17 q23 q21 MLL AF4t 4 11 q21 q23 MLL ELLt 11 19 q23 q13 1 delMLL 11q23 dupMLL 11q23 61 融合基因 AML ETO急性部分分化性粒细胞白血病 M2b BCR ABL慢性髓细胞性白血病 CML PML RAR 急性早幼粒细胞性白血病 M3 62 早幼粒细胞性白血病 M3 FAB分型形态学 63 早幼粒细胞性白血病 M3 细胞化学染色POX强阳性AS D阳性染色体易位T 15 17 64 二 急性白血病的诊断 临床表现形态学诊断 外周血象和骨髓象免疫学检验诊断 检测分化抗原遗传学和分子生物学检验骨髓细胞培养生化检查超微结构检查鉴别诊断 65 三 急性白血病的疗效评价 一 缓解标准 二 复发标准 三 长期生存 四 临床治愈 1 完全缓解2 部分缓解3 未缓解4 持续缓解 骨髓 原 幼 5 Hb 100g L plt 100 109 L N 1 5 109 L CR后无复发3 5年 原 幼 5 20 骨髓 血象 临床均未达标 1 原 早 20 2 原 早 5 20 一疗程骨髓未缓解 3 髓外白血病细胞浸润 确诊之日起 存活 5年 停止化疗5年生存或无病生存达10年 66 四 慢性白血病中的应用 一 慢性粒细胞白血病 CML 1 概述 是造血干细胞克隆性增生性疾病临床过程 慢性期 加速期 急变期 最突出特征是脾肿大 胸骨压痛 细胞遗传学 特征性的Ph染色体 t 9 22 q34 q11 分子生物学 bcr abl融合基因2 血象 白细胞数显著升高 以中 晚幼粒细胞多见 嗜碱粒细胞 嗜酸粒细胞增高 67 一 慢性粒细胞白血病 68 1 不明原因发热 贫血 出血加重 骨痛2 脾进行性肿大3 非药物引起血小板进行性减少或增多4 原始细胞 10 5 外周血嗜碱性粒细胞 20 6 骨髓中有显著的胶原纤维增生7 出现Ph以外的染色体异常8 对常规传统的药物治疗无效9 CFU GM培养显示增殖分化缺陷 集族增多 加速期 分期诊断标准 具备下列中两项 慢性粒细胞白血病的临床分期及其诊断标准 69 慢性粒细胞白血病的临床分期及其诊断标准 分期诊断标准 急变期 1 原始细胞 20 2 外周血原粒 早幼粒 30 3 骨髓中原粒 早幼粒 50 4 有髓外原始细胞浸润 具备下列各项之一 可以诊断 70 慢性粒细胞性白血病Chronicmyelocyteleukemia 71 二 慢性淋巴细胞白血病是单克隆性小淋巴细胞白血病 形态 小淋巴细胞免疫学 不成熟 功能不全 多为B细胞临床 老年人为主 起病隐匿 进展缓慢 全身淋巴结进行性肿大 伴有皮肤病变病程长短不一 免疫球蛋白减少易感染 感染是常见死亡原因 72 检验与诊断1 持续淋巴细胞增多 外周血淋巴细胞 6 109 L2 骨髓增生明显活跃至极度活跃 淋巴细胞 40 原淋 幼淋 10 3 PAS ACP阳性反应可被酒石酸抑制4 排除其他引起淋巴细胞增多的疾病5 可见到的染色体异常 12 t 11 14 q13 q32 t 14 19 q32 q13 13q14异常等 73 慢性淋巴细胞白血病chroniclymphocyticleukemia 74 五 少见类型白血病的应用 一 嗜酸性粒细胞白血病嗜酸性粒细胞恶性增生 浸润各组织器官引起各种损害 血象嗜酸性粒细胞可高达60 绝对值 1 5 109 骨髓象嗜酸性粒细胞增多 75 二 嗜碱性粒细胞白血病嗜碱性粒细胞增高可达30 80 三 浆细胞白血病 原始及幼稚浆细胞为主 见溶骨现象 四 多毛细胞白血病 外周血可全血细胞减少 76 五 幼淋巴细胞白血病 六 全髓白血病 骨髓红细胞 粒细胞及巨核细胞同时异常增生 伴巨幼样变 七 成人T细胞白血病 77 1 概述 原发性 老年人多见 增生 分化成熟MDS障碍 三系细胞 白前 继发性 年龄较轻 急白 AMLALL 低原始细胞白 骨髓增生异常综合征 myelodysplasticsyndrome MDS 78 分类 1 难治性贫血 refectrtyanemia RA 2 难治性贫血伴环状铁粒幼细胞增多 refrectoryanmiawithsideroblastosis RA B 3 难治性贫血伴原始细胞增多 refractoryanemiawithexcessofblasts RAEB 4 慢性粒 单细胞白血病 chronicmyelomonocyticleukemia CMML 5 难治性贫血伴原始细胞增多 转化型 refractoryanemiawithexcessofblastsintransformation BAEB T 79 检验 血象 粒 红 血小板减少1 3项减少且病态造血红细胞 大小不等 形态不一 大红细胞 有核红细胞 网织红 正 白细胞量 正 质 幼稚粒细胞 粒系浆内颗粒稀少或缺如 核分叶过多或过少 巨杆状粒 单核 血少板 巨大血少板 小巨核细胞 偶尔见 80 骨髓象 增生度 明显活跃红系 原红 早幼红 类巨幼样变 核碎裂 畸形 分叶 双核 多核 粒系 原粒 早幼粒 伴成熟障碍 核仁明显 颗粒缺少或颗粒粗大 巨晚幼 巨杆状 或分叶过多巨核系 多为小巨核 体积小 畸形 单 双 多核或分叶过多不等 核仁明显 81 细胞化学染色 外铁 内铁细胞 见环形铁粒幼红细胞骨髓组织检查 未成熟前体细胞定位异常正常 原 早定位 骨内膜表面异常 原早定位 簇状 骨髓中央 82 免疫学检验 CD3 CD4 细胞减少CD4 CD8比值减低或倒置 淋巴细胞亚群分布异常 染色体与分子生物检验 30 70 病人有染色体异常 如 5 5q 7 7q 8 20q y常见 预后较好 易变白 预后较好 83 用PCR和DNA直接测序法检测 N ras点突变常发生在12 13位密码子 转化成AML机率高ras点突变是预示向白血病转化的标志存在p53基因突变 同时存在17p 无效造血 造血细胞过度凋亡 84 体外造血祖细胞培养 细胞集落 CFU GM 形成能力 集落细胞成熟障碍集簇 集落比值升高 大多数转变为急性白血病无集落和形成大簇者易演变为 白血病 85 MDS的诊断 类型周围血骨髓RA原始细胞 1 红细胞系原始细胞 5 幼红细胞增生造血紊乱和 或红细胞系造血紊乱RAS与RA相似的特点 与RA相似的特征 环形铁粒幼有双形性红细胞细胞 有核细胞的15 RAEB原始细胞 5 累及二原始细胞5 20 三系血系或多系血细胞减少细胞造血紊乱 86 类型周围血骨髓RAEB T与RAEB相似的特 下列情况的任一条 1 血中原始细胞 5 2 M中原始细胞20 30 3 幼稚细胞有Auer小体 CMML单核细胞绝对值 1 109 L 同RAEB原始细胞原始C 5 粒细胞 并有5 20 幼单核颗粒减少或Pelger Huef异常 细胞增多 87 第八节浆细胞病中的应用 88 一 概念 多发性骨髓瘤 multiplemyeloma MM 是骨髓内单一浆细胞株异常增生的一种恶性肿瘤 89 二 病理过程 多发骨髓瘤最常侵犯骨骼 骨小梁被破坏 髓腔内充满灰白色瘤组织 骨皮纸变薄或被腐蚀 传破骨皮质 浸润骨膜及周围组织 90 检验 血象 bloodtest 1 贫血 全血细胞减少2 红细胞缗前现象3 可出现红系和粒系幼稚细胞4 可见骨髓瘤细胞 2 0 109 L时 诊断为浆细胞白血病 91 检验与诊断 骨髓bonemarrowfindings 异常浆细胞 骨髓瘤细胞 型 小浆细胞型 型 幼稚浆细胞型 型 原始浆细胞型 型 网状细胞型 92 骨髓象 瘤细胞核长圆 有1 2核仁 含嗜酸球状包涵体 Russel小体 可见大量空泡 halo 缗钱状红细胞 93 骨髓中有骨髓瘤细胞血清中出现单克隆免疫球蛋白或单克隆免疫球蛋白轻链广泛性骨质疏松和 或 溶骨性损害具有上述3项中第1和另外2项中任何1项 即可诊断MM 四 诊断标准 94 五 MM最易被误诊的原因分析 临诊医师缺乏MM的专业知识或缺乏对MM的警惕性MM临床表现多种多样而不具有特异性缺乏有关MM实验室检查设备 蛋白电泳 免疫电泳 轻链定量等 95 六 恶性淋巴瘤中的应用 原发于淋巴结或淋巴组织的实体瘤分为HD和NHL 临床见无痛性淋巴结肿大 肝脾肿大 一 霍奇金淋巴瘤 R S细胞1 分类及分期 2 血象 贫血 可见全血细胞减少3 骨髓象 R S细胞 96 4 组织病理检查 R S细胞 二 非霍奇金淋巴瘤 多中心起源1 分类2 血象及骨髓象 可见血细胞减少 晚期可转化为白血病3 组织病理学检验 诊断依赖于组织切片 可有四种类型细胞 淋巴细胞型 组织细胞型 混合细胞型 未分化型 4 组织化学检验 酸性磷酸酶染色5 免疫学检查 单克隆抗体检测 97 6 遗传学及分子生物学检验 染色体易位t 14 18 t 8 14 多见7 其他检验 免疫球蛋白检测 98 二 原发性巨球蛋白血症 B淋巴细胞恶性病变 分泌IgM 巨球蛋白 血象 见淋巴样浆细胞 红细胞呈缗钱样 血沉加快 血粘度增高骨髓象 多样性 可干抽 淋巴样浆细胞 嗜碱性粒细胞 组织嗜碱细胞 99 八 骨髓增生性疾病中的应用 一 原发性血小板增多症1 血象 PLT在1000 3000 109 形态正常或异常 常聚集 偶见幼粒2 骨髓象 巨核细胞增生明显 原幼巨核细胞比例增高 高者可达5 形态异常 红 粒系细胞增生 PLT生成增多3 细胞化学染色 糖原染色等 100 4 血小板功能检查 聚集 粘附 释放功能5 出凝血试验 PT APTT可延长6 其他 21号染色体的缺失7 诊断 101 二 骨髓纤维化骨髓造血组织被纤维组织取代巨大脾脏 肝肿大1 血象 贫血 可见幼红细胞 白细胞增高或正常 可见幼稚粒细胞 血小板形态异常 晚期数量减少2 骨髓象和骨髓病理检查 常干抽 早期增生活跃 后期增生低下 病理活检显示纤维组织明显增生3 其他检查 PLT功能缺陷 出凝血时间可延长 碱性磷酸酶活性增高 102 三 真性红细胞增多症不明原因的红细胞增多慢性骨髓