实习报告30145014.doc

化学与生命科学学院生物工程系实 习 报 告专 业 生 物 班 别 学号 姓 名 实习类型 生产实习 实习日期 成 绩 一、 实习总体情况 时间、地点、主要工作等二、 实习单位简介广东省市质量技术监督局（简称市质监局）主要负责管理全市标准化、计量、质量、生产加工环节食品安全和特种设备安全管理工作及执法监督职能的行政机构。茂名市质监局内设11个科室，办公室、政策法规科、质量科、食品监管科、标准化科、计量科、锅炉压力容器安全监察科、特种机电设备安全监察科、计划财务科、人事教育科、监察室（与纪检组、机关党委办公室合署）。1三、 实习内容在师兄的指导下，我学习和工作了检测工作，有粮油检验植物油脂加热实验、食品中富马酸二甲酯的测定高效液相色谱法、小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定、植物油中叔丁基羟基茴香醚（BHA）、2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定高效液相色谱法、甲醛原液的标准化及黄曲霉毒素B1（AFB1）酶联免疫定量测试盒3.1 粮油检验植物油脂加热试验3.1.1 原理纯净的油脂加热至280时，仍呈透明状态，如果油脂中存在磷脂，则在280下磷脂就会析出或分解，是油色变深变黑。当油中磷脂含量较高是，甚至会产生絮状沉淀。3.1.2 操作步骤3.1.2.1 初始样品色泽测定水平放置罗维朋比色计，安好观测管和碳酸镁片，检查光源是否完好。将混匀并澄清的试样注入25.4mm比色槽中，达到距离比色槽上口约5mm处，将比色槽置于比色计中。打开光源，先移动黄色、红色玻片色值调色，直至玻片色与油样色近似相同为止。如果油色有青绿色，须配入蓝色玻片，这时移动红色玻片，使配入蓝色玻片的号码达到最小值为止，记下黄、红、蓝玻片的色值的各自总数，即为被测初始样品的色值。3.1.2.2 样品加热取混匀样品约50ml于100ml烧杯内，置于带有砂浴盘的电炉上加热，用铁支柱悬挂温度计，使水银球恰好在试样中心，在16min18min内加热使试样温度升至280，取下烧杯，趁热观察有无析出物。3.1.2.3 加热后样品色泽的测定 将加热后的样品冷却至室温，注入25.4mm比色槽中，达到距离比色槽上约5mm处。将比色槽置于已调好的罗维朋比色计中。按照初始样品的黄值固定黄色玻片色值，打开光源，移动红色玻片调色，直到玻片色与油样色相近色泽为止。记下黄、红或黄、红蓝玻片的色值的各自总数，即为被测油样的色值。3.2 食品（月饼）中富马酸二甲酯的测定高效液相色谱法3.2.1 原理用氨水甲醇溶液提取样品中的富马酸二甲酯，定容过滤后，滤液中的富马酸二甲酯经高效液相色谱柱分离，以紫外检测器于220nm处检测，外标法定量。3.2.2 分析步骤3.2.2.1 固态试样月饼准确称取约2g，精确至0.0001g，置于50ml烧杯中，待测。3.2.2.2 提取和净化试样中加入10ml氨水甲醇溶液，混合后置于超声波水浴中处理15min。冷却至室温，用盐酸溶液调至pH至6.0.转移试样溶液至25mL容量瓶中，用10mL水分次淋洗，使完全转移，并用水定容，混匀。滤纸过滤，收集滤液用滤膜过滤，试液用于高效液相色谱仪测定。3.3小麦粉与大米粉及其制品（腐竹）中甲醛次硫酸氢钠含量的测定3.3.1原理在酸性溶液中，样品中残留的甲醛次硫酸氢纳分解释放出的甲醛被水提取，提取后的甲醛与2,4-二硝基苯肼发生加成反应，生成黄色的2.4-二硝基苯肼，用正己烷萃取后，经高效液相色谱仪分离，与标准甲醛衍生物的保留时间对照定性，用标准曲线法标定，3.3.2 分析步骤3.3.2.1色谱分析条件 化学键合C18柱，4.6mm*250mm；乙腈+水流动相，流速0.8mL/min;紫外检测器，检测器波长355nm。3.3.2.2 样品前处理称取腐竹20g，捣碎，转入250ml具塞三角瓶中，加200ml盐酸-氯化钠溶液，置于振荡机上振荡提取40min。将提取液倒入20ml离心管中，于4000r/min离心30min，上清液备用。3.3.2.3标准工作曲线绘制分别量取0.00ml、0.25ml、0.50ml、1.00ml、2.00ml、4.00ml甲醛标准使用液于25ml比色管中，分别加入2ml盐酸-氯化钠溶液、1ml磷酸氢二钠溶液、0.5ml衍生剂，然后补加水至10ml，盖上塞子，摇匀，置于50水浴中加热40min后，提取用流水冷却至室温。准确加入5.0ml正己烷，将比色管横置，水平方向轻轻振摇3次5次后，将比色管倾斜放置，增加正己烷与水溶液的接触面积。在一个小时内，每隔5min轻轻振摇3次5次，然后再静置30min，取10微升正己烷萃取液进样。以所取甲醛标准使用液中甲醛的质量为横坐标，甲醛衍生物苯肼的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。3.3.2.4样品测定取2.0ml样品处理所得上清液于25ml比色管中，加入1ml磷酸氢二钠溶液、0.5ml衍生剂，补加水至10ml，盖上塞子，摇匀。以下按3.3.2.3自“置于50水浴中加热40min后”起依法操作，并与标准曲线比较定量。注意振摇是不宜剧烈，以免发生乳化。如果出现乳化现象，滴加1滴2滴无水乙醇。3.4植物油中叔丁基羟基茴香醚（BHA）、2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）的测定高效液相色谱法3.4.1 原理样品中叔丁基羟基茴香醚（BHA）、2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ）经甲醇提取纯化，反相C18柱分离后，用紫外检测器280nm检测，外标法定量。3.4.2 分析步骤3.4.2.1 试液的制备准确称取植物油样约5g，置于15ml具塞离心管中，加入8ml甲醇，漩涡混合3min，放置2min，以3000r/min离心5min，取出上清液于25ml容量瓶中，残余物每次用甲醇提取2次，清液合并于25ml容量瓶中用甲醇定容，摇匀，经0.45微米有机相滤膜过滤，滤液待液相色谱分析。3.5 甲醛原液的标准化3.5.1 原理一整分量原液与过量的亚硫酸钠反应，用标准酸液在百里酚酞指示下进行反滴定。3.5.2操作程序移取50ml亚硫酸钠如三角烧瓶中加百里酚酞指示剂2滴，如需要，加几滴硫酸直至蓝色消失。移10ml甲醛原液至瓶中，用硫酸滴定至蓝色消失，记录用酸体积。3.6黄曲霉毒素B1（AFB1）酶联免疫定量测试盒3.6.1 原理通过抗黄曲霉毒素B1抗体与酶表抗原、待测抗原的竞争免疫反应以及酶的催化显色反应相结合来检测黄曲霉毒素B1，适用于各类食品、原粮及其制品、饲料及相关原料中AFB1的定量检测。3.6.2 测试盒组成1.包被抗体的反应板2.A试剂：样品稀释液3.B试剂：AFB1标准溶液4.C试剂：酶标抗原5.D试剂：酶标抗原稀释液6.E试剂：浓缩洗涤液7.F试剂：显色底物液a8.G试剂：显色底物液b9.H试剂：终止液10.反应板框架3.6.3 实验步骤1.试剂平衡：将测试盒于室温中放置15min以上，平衡至室温。2.小孔编号：根据实验需要截取相应孔数放置反应板框架上。设定1号孔为一起调零孔，2-7号孔为AFB1标准对照孔，其余孔为样品孔。3.洗涤：每孔加入250微升左右洗涤液，洗涤液不得溢出，放置1min后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，重复洗板一次。4.反应组成：按下列步骤所示，以此加入配好的溶液剂待测样液。第一步：1号孔加入50微升A试剂（样品稀释液），2-7号孔分别加入系列的B试剂（AFB1标准溶液：0,0.1,0.25,0.5,1,2ng/ml）50微升，其余孔加入相应的待测样液。第二步：1号孔加入50微升D试剂（酶标抗原稀释液），其余各孔加入50微升C试剂（酶标抗原稀释液）。第三步：轻轻地振摇，使各孔中的反应物混匀。5.反应：将反应板放入37恒温培养箱中孵育30min。6.洗涤：取出反应板，用力甩掉反应液，拍干。每孔加入250微升左右洗涤液，洗涤液不得溢出，放置2min后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，重复洗板4次。7.显色：每孔分别加入F试剂（显色底物液a）和G试剂（显色底物液b）各50微升，摇匀，将反应板放入37恒温培养箱中显色15min。8.终止与仪器测定：每孔分别加入H试剂（终止液）50微升，摇匀后用酶标测定仪（或黄曲霉毒素B1专用测定仪）在450nm波长处测定各孔的吸光度A值。9.样品定量计算：将系列AFB1标准溶液（0,0.1,0.25,0.5,1,2ng/ml）测得的吸光度A值，绘制成标准曲线。横坐标为标准溶液浓度的常用对数值（IgC），纵坐标为各标准液孔A值与Ong/ml标准液孔的A值得比值。四、五、收获体会对于任何一位大学生来说，毕业实习是一个很关键的学习内容，也是一个很好的锻炼机会。对于我们来说，平常学到的都是书面上的知识，而毕业实习正好就给了我们一个在投身社会工作之前把理论知识与实际设计联系起来的机会，毕业实习作为学校为我们安排的在校期间最后一次全面性、总结性的教学实践环节，它既让我们看到实际的中设计生产状况，也我们在就业之前“实战预演”。对于毕业实习来说，其中一个主要目的就是通过实习所学的内容来完善我们的毕业设计，当然我们在实习过程中还会收集相关资料、了解相关生物化学领域的基本技术和发展现状，从而制定毕业设计设计思路与方法，了解相关的工艺以及工序，这也是我们在毕业设计中要符合实际的现成参考文件。认真完成