环境卫生学及管理监测.ppt

环境卫生学监测及采样 东南妇幼医院刘秀平 主要内容 一 空气消毒效果的采集及监测二 紫外线灯管消毒效果监测三 手消毒效果监测四 物品和环境表面消毒效果监测五 使用中消毒液染菌量测定六 灭菌质量监测 一 空气消毒效果监测 采样时间 采用洁净技术净化空气的房间在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样 未采用洁净技术净化空气的房间在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样 或怀疑与医院感染暴发有关时采样 采样的高度 应设在距离 垂直 地面80 150cm高度范围内 非洁净区域空气消毒效果监测 布点方法 1 室内面积 30 设置内 中 外对角线3个点 内 外布点部位距墙壁1m处 一条对角线上取3个点即中心一点 两端距离墙壁1cm处各取一个点 盖 盖 盖 2 室内面积 30 设4角及中央5点 4角布点部位距离墙面1m处 东 西 南 北点距离墙壁1m 盖 盖 盖 盖 盖 3 采样方法 沉降法 将血平皿或普通营养琼脂平皿 直径9cm 放在室内各采样点处 采样高度为距离地面80 150cm 采样时将平板盖打开 扣放于平皿旁 暴露规定的时间后 盖好立即送检 非洁净手术室 非洁净骨髓移植病房 产房 导管室 新生儿室 器官移植病房 烧伤病房 重症监护病房 血液病区平皿暴露15min 儿科病房 母婴同室 妇产科检查室 人流室 治疗室 注射室 换药室 输血科 消毒供应中心 血液透析室 急诊室 化验室 各类普通病室 感染疾病科门诊及其病房空气平皿暴露5min 4 检测方法 将采样后平皿置37 温箱培养48h 计数菌落数 7 5 注意事项 采样前应关好门窗和空调 无人走动情况下 静止10min再进行采样 1 取培养基时 应用手托住培养基的底座 避免污染 2 打开培养基时 盖子向下扣放于平板旁 3 取样后将培养基的盖子盖好 方可离开治疗室 4 送检时间不超过6h 若样品保存于0 4度条件时 送检时间不能超过24小时 5 送检过程中如盖子不小心打开 应该重新留取标本送检 6 结果判断 方法一 医疗机构消毒技术规范 A 6 3平均每皿的菌落数报告 cfu 皿 暴露时间 1 非洁净手术部 室 非洁净骨髓移植病房 产房 导管室 新生儿室 器官移植病房 烧伤病房 重症监护病房 血液病区空气中的细菌菌落总数 4cfu 15min 直径9cm平皿 2 儿科病房 母婴同室 妇产科检查室 人流室 治疗室 注射室 换药室 输血科 消毒供应中心 血液透析中心 室 急诊室 化验室 各类普通病室 感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数 4cfu 5min 直径9cm平皿 方法二 医院空气净化管理规范 8 2 2 2 未采用洁净技术净化空气的部门 其监测方法及结果的判断应符合GB15982的要求 7 监测频度 医院空气净化管理规范 8 2 1 医院应对感染高风险部门每季度进行监测 洁净手术部 室 及其他洁净场所 新建与改建验收时以及更换高效过滤器后应进行监测 遇医院感染暴发怀疑与空气污染有关时随时进行监测 并进行相应致病菌微生物的检测 空气监测流程 取配备好的培养皿 标准防护后进入监测部门 30 的房间5个点 东 南 西 北 中 采样高度 与地面垂直80 150cm 其中东 西 南 北点距离墙壁1m 30 的房间在一条对角线上取3点 即中心一点 两端各距墙1m处各取一点 采样高度 与地面垂直80 150cm 9cm直径平皿暴露规定时间后 收集培养皿 监测室用含氯消毒剂擦拭物体表面后关好门窗 紫外灯照射60分钟 37 1 恒温箱培养48h后观察结果 记录每个平皿上的菌落数计算结果 平均每平皿的军落数 4cfu 15min 9cm平皿 4cfu 5min 9cm平皿 洁净手术室静态空气净化效果的监测 手术区 级手术台两侧边至少各外推0 9m 两端至少各外推0 4m后 包括手术台 的区域 级眼科专用手术室手术区每边不小于1 2m 级手术台两侧边至少各外推0 6m 两端至少各外推0 4m后 包括手术台 的区域 级手术台四边至少各外推0 4m后 包括手术台 的区域 级不分手术区和周边区 周边区 洁净手术室内除去手术区以外的其他区域 一 采样时间 洁净手术室房间清洁并擦试消毒后 使净化空调系统达到自净时间并处于开启状态 然后进行测试 室内应无工作人员 二 监测人员要求 穿洁净服 戴口罩 手卫生 动作要轻 避免产生二次污染 三 布点方法注意 乱流洁净室应尽量避开高效送风口正下方 同时布点位置应避开障碍物 1 洁净度局部百级周围千级设置13个点 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 2 洁净度局部千级周围万级设置9个点 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 3 洁净度局部万级周围十万级设置7个点 盖 盖 盖 盖 盖 盖 盖 4 洁净度三十万级设置5个点 盖 盖 盖 盖 盖 四 布点顺序 沉降法 放置培养皿从总平面中最靠近里的房间开始布置 依次向外 最后人员撤出 每间房间也是从房间最靠里的点开始布置 最后布置门附近的点 然后人员撤出 收集培养皿的顺序相反 从最外边的房间开始收 每间房间从门附近的培养皿开始收 最先布置的皿最后收 沉降时间略有差别 五 检测方法 将平皿放在室内各采样点处 采样点可布置在地面上或不高于地面0 8m的任意高度上 在手术区检测时应无手术台 当手术台已固定时 检测高度应在台面之上0 25m 在100级区域检测时 采样口应对着气流方向 在其他区域检测时 采样口均向上 采样时将平板盖打开 扣放于平板旁 暴露30min 盖好立即送检 采样后的培养皿应在37 条件下培养24h 并计算菌落数 六 计算方法 菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后1位 注意手术区与周边区分别计算 卫生部 医院洁净手术部建筑技术规范 GB50333 2002 中洁净手术室等级标准 空态或静态 沉降法 浮游法 细菌最大平均浓度 表面最大 空气洁净度级别 手术室 等级 染菌浓度 名称 手术区 周边区 手术区 周边区 特别洁净 0 2个 30min 90皿 0 4个 30min 90皿 5个 cm2 100级 1000级 手术室 5个 m3 10个 m3 标准洁净 0 75个 30min 90皿 1 5个 30min 90皿 5个 cm2 1000级 10000级 手术室 25个 m3 50个 m3 一般洁净 2个 30min 90皿 4个 30min 90皿 100000 5个 cm2 10000级 手术室 75个 m3 150个 m3 级 准洁净 5个 30min 90皿 5个 cm2 300000级 手术室 175个 m3 注 1 浮游法的细菌最大平均浓度采用括号内数值 细菌最大平均浓度是直接所测的结果 不是沉降法和浮游法互相换算结果 2 1级眼科专用手术室周边区按10000级要求 3 90皿为采样直径90mm的培养皿 洁净辅助用房等级标准 空态或静态 沉降法 浮游法 细菌最大平 等级 表面最大染菌浓度 空气洁净度级别 均浓度 0 4个 30min 90皿 10个 m3 5个 cm2 1000级 局部100级 1 5个 30min 90皿 50个 m3 5个 cm2 10000级 4个 30min 90皿 150个 m3 5个 cm2 100000级 5个 30min 90皿 175个 m3 5个 cm2 300000级 主要洁净辅助用房分级 等级 用房名称 需要无菌操作的特殊实验室 体外循环灌注准备室 刷手间 消毒准备室 预麻室 一次性物品 无菌敷 料及器械与精密仪器的存放室 护士站 洁净走廊 重症护理单元 ICU 恢复 麻醉苏醒 室与更衣室 二更 清洁走廊 七 浮游菌法 可选择六级撞击式空气采样器或其他经验的空气采样器 监测时将采样器置于室内中央0 8m 1 5m高度 按采样器使用说明书操作 每次采样时间不应超过30min 房间面积 10 者 每增加10 增设一个采样点 计算方法 空气中菌落总数 cfu m3 采样器各平皿菌落数之和 cfu 采样速率 L min 采样时间 min 1000 结果判断 同平板暴露法 二 紫外线灯监测 2003年11月1日 紫外线杀菌灯 实施新的国家标准 GB19258 2003 新标准对紫外线灯强度和寿命都提出更高的要求 新灯管30w 40w辐照强度不同 使用过程中其辐照强度逐渐降低 故应定期测试 卫生部 消毒技术规范 要求 直管紫外线灯 30w 新灯管的辐照度值在灯管下方垂直1m的中心处 应 90uw c 使用中的灯管的辐照度值应 70uw c 低于此值应予更换 辐照强度检测关键参数1 镇流器 电感 电子 基准 2 电压3 强度仪 253 7nm 检定 1 物理检测 紫外线灯强度仪测试 检测方法 开启紫外线灯5min后 操作者戴好防护用具 将测定波长为253 7nm的紫外线辐照计探头置于被检紫外线灯下 米处垂直照射 待仪表稳定后 所示数据即为该紫外线灯的辐射照度值 化学检测法 紫外线测试卡 检测方法 开启紫外线灯 min后 操作者戴好防护用具 将紫外线检测尺挂在紫外线灯管中央处 开启托板 取出测试卡 放于托上 有图案的一面朝上 照射1min取下卡 观察指示卡色块的颜色 将其与标准色块比较 3 生物学检测法 1 人工染菌检查法 选定试验用的菌种在表面光滑载体上经紫外线灯照射看杀菌效果 2 自然菌空气消毒试验 选用两个相同体积房间对照 一间消毒用紫外线照射 一间用水代替消毒不照射 做空气培养 看紫外线杀菌效果 4 监测频度 每季度进行一次紫外线灯管检测 特殊时随时进行 三 手的消毒效果监测 一 采样时间 在接触患者 进行诊疗活动前采样 二 采样方法 被检者五指并拢 用浸有含相应中和剂的无菌洗脱水液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指跟到指端往返涂擦2次 一只手涂擦面积约30c 涂擦过程中同时转动棉拭子 将棉拭子接触操作者的部分剪去 投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内 及时送检 外科手消毒监测采样 2 三 检测方法 将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次 用无菌吸管吸取1 0ml待检样品接种于灭菌平皿 每一样本接种2个平皿 平皿内加入已溶化的45 48 的营养琼脂15ml 18ml 边倾注边摇匀 待琼脂凝固 置36 1 温箱培养48h 计数菌落数 四 计算方法 细菌菌落总数 cfu c 平板上菌落数 稀释倍数 采样面 c 五 结果判定 医务人员手卫生规范 4 4手消毒效果应达到如下相应要求 卫生手清毒 监测的细菌菌落总数应 10cfu c 外科手消毒 监测的细菌菌落总数应 5cfu c 六 监测频度 医务人员手卫生规范 8 1监测要求医疗机构应每季度对手术室 产房 导管室 层流洁净病房 骨髓移植病房 器官移植病房 重症监护病房 新生儿室 母婴室 血液透析病房 烧伤病房 感染疾病科 口腔科等部门工作的医务人员手进行消毒效果的监测 当怀疑医院感染暴发与医务人员手卫生有关时 应及时进行监测 并进行相应致病性微生物的检测 医务人员手卫生监测流程 采样 被检人员五指并拢 将浸有无菌稀释液的棉拭子 在双手屈面从指根到指端往返涂擦2次并转动棉拭子 剪去手接触的部分 将棉拭子放入10ml含相应中和剂的试管内震打数次 接种平板 37 恒温箱培养48h待看结果 37 恒温箱培养48h待看结果 细菌菌落总数 cfu c 平皿上菌落的平均数 稀释倍数 采样面积 c 四 物品和环境表面消毒效果监测 一 采样时间 在消毒处理后进行采样 二 采样面积 被采面积 100c 取全部表面 采样面积 100c 取100c 三 采样方法 棉拭子法 压印法两种 棉拭子法 用5 5cm的标准灭菌规格版 放在被检物体表面 用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子 在规格板内横竖往返均匀涂抹5次 并随之转动棉拭子 可连续采样1 4个规格板面积 剪去手接触部分 并将棉拭子放入装有10ml含相应中和剂的试管内 立即送检 门把等小型物体则采用棉拭子直接在物体表面按一定顺序涂抹采样 结果计算用cfu 件表示 四 检测方法 充分震荡采样管后 取不同稀释倍数的洗脱液1 0ml接种平皿 将冷至40 45 的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15ml 20ml 36 1 恒温箱培养48h 计数菌落数 怀疑与医院感染暴发有关时 进行目标微生物的检测 五 计算方法 规则物体表面物体表面菌落总数计算方法物体表面菌落总数 cfu c 平均每皿菌落数 洗脱液稀释倍数 采样面积 c 小型物体表面的结果计算 用cfu 件表示 六 结果判定 医疗机构消毒技术规范 A 5 5 洁净手术部 其他洁净场所 非洁净手术部 室 非洁净骨髓移植病房 产房 导管室 新生儿室 器官移植病房 烧伤病房 重症监护病房 血液病病区等 物体表面细菌菌落总数 5cfu c 儿科病房 母婴同室 妇产科检查室 人流室 治疗室 注射室 换药室 输血科 消毒供应中心 血液透析室 急诊室 化验室 各类普通病室 感染疾病科门诊及其病房等 物体表面细菌菌落总数 10cfu c 物体表面监测流程 采样时间 消毒处理后 采样面积 100c 取100c 100c 取全部面积 摆放规格板 将灭菌规格板放在被检物体表面 用棉拭子在规格板内横竖往返各涂抹5次 将拭子放入装有10ml含有相应中和剂的灭菌采样液的试管中 涂抹采样 送检接种培养 震荡80次 取采样液1ml接种平皿注入营养琼脂后37 温箱培养48h 结果计算 细菌菌落总数 cfu c 平皿上菌落的平均数 采样液稀释倍数 采样面积 c 结果判断 10cfu c 五 使用中消毒液染菌量测定 一 采样时间 采取更换前使用中的消毒剂与灭菌器械保存液 二 采样量及方法 在无菌条件下 用无菌吸管吸取1 0ml被检样液 加入9 0ml含相应中和剂的采样管内混匀 三 用无菌吸管吸取一定稀释比例的中和后的混合液1 0ml接种平皿 将冷至40 45 的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15ml 20ml 36 1 恒温箱培养72h 计数菌落数 怀疑与医院感染暴发有关时 进行目标微生物的检测 五 使用中消毒液染菌量测定 四 消毒液染菌量计算消毒液染菌量 cfu ml 平均每皿菌落数 10 稀释倍数 五 结果判断 医疗机构消毒技术规范 A 7 2 2使用中灭菌用消毒液 无菌生长 使用中皮肤黏膜消毒液菌量 10cfu ml 其他使用中消毒液染菌量 100cfu ml 注意事项 采样后4小时内检测 使用中消毒剂的监测流程 采样时间 使用中消毒剂 灭菌剂 用灭菌吸管吸取1ml消毒剂 加入9ml中和剂内混匀 送检 采样 取1ml放入平皿内 加入已溶化的45 48 的普通琼脂15 18ml 边倾注边摇匀 待琼脂凝固 接种 培养 36 1 培养72h 计数菌落数 结果计算 菌落总数 平均每皿菌落数 10 稀释倍数 结果判断 无菌生长 10cfu ml 100cfu ml 六 灭菌质量的监测 压力蒸汽灭菌的监测 一 物理监测法 每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度 压力和时间等灭菌参数 二 化学监测法 应进行包外 包内化学指示物监测 采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时 应直接将一片包内化学指示物置于待灭菌物品旁进行化学监测 六 灭菌质量的监测 生物指示剂有芽孢悬液 芽孢菌片以及菌片与培养基混装 自含式 的指示管 指示菌株 嗜热脂肪杆菌芽孢 ACTT7953或SSIK31株 菌片含量为5 0 105 5 0 106cfu 片 在121 0 5 条件下 D值为1 0 1 9min KT值 19min ST值为 3 9min 六 灭菌质量的监测 1 监测方法为 将生物指示物置于标准试验懈的中心部位 标准试验包由16条41cm 66cm的全棉手术巾制成 制作方法 将每条手术巾的长边先折成3层 短边折成2层 然后叠放 制成23cm 23cm 15cm大小的测试包 经一个灭菌周期后 在无菌条件下取出标准试验包的指示菌片 投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中 经56 1 培养7d 自含式生物指示物按产品说明书执行 观察培养结果 四 结果判断 阳性对照组培养阳性 阴性对照组培养阴性 试验组培养阴性 判定为灭菌合格 阳性对照组培养阳性 阴性对照组培养阴性 试验组培养阳性 则灭菌不合格 同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致 六 灭菌质量的监测 2 采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时 应直接将一支生物指示物 置于空载的灭菌器内 经一个灭菌周期后取出 规定条件下培养 观察结果 3 监测周期 生物监测应每周监测一次 三 生物监测法 指示菌株 枯草杆菌黑色变种芽孢 ACTT9372 菌片含量为5 0 105 5 0 106cfu 片 在160 2 条件下 D值为1 3 1 9min KT值 19min ST值为 3 9min 四 结果判定 阳性对照组培养阳性 阴性对照组培养阴性 若每个指示菌片接种的肉汤均澄清 判为灭菌合格 若阳性对照组培养阳性 阴性对照组培养阴性 而指示菌片之一接种的肉汤管混浊 判为不合格 对难以判定的肉汤管 取0 1ml接种于营养琼脂平板 同灭菌L棒或接种环涂匀 置36 1 培养48h 观察菌落形态 并做涂片染色镜检 判断是否有指示菌生长 若有指示菌生长 判为灭菌不合格 若无指示菌生长 判为灭菌合格 干热灭菌的监测 一 物理监测法 每灭菌批次应进行物理监测 监测方法为将多点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层内 中 外各点 关好柜门 引出导线 由记录仪中观察温度上升与持续时间 温度在设定时间内均达到预置温度 则物理监测合格 二 化学监测法 每一灭菌包外应使用包外化学指示物 每一灭菌包内应使用包内化学指示物 并置于最难灭菌的部位 三 生物监测法 指示菌株 枯草杆菌黑色变种芽孢 ACTT9372 1 监测方法 常规生物测试包放在灭菌器最难灭菌的部位 整个装载灭菌包的中心部位 灭菌周期完成后应立即将生物指示物从被灭菌物品中取出 36 1 培养7d 自含式生物指示物应遵循产品说明 观察培养基颜色变化 同时设阳性对照和阴性对照 2 监测周期 应每灭菌批次应进行生物监测 环氧乙烷灭菌 一 物理监测法 每次灭菌应连续进行物理监测 二 化学监测法 每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物 作为灭菌过程的标志 每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物 通过观察其颜色变化 判定其是否达到灭菌合格要求 三 生物监测法 1 监测方法为 将枯草杆菌芽孢菌片分别装入超负荷运转试管内 1片 管 灭菌器与每层门把手对角线内 外角处放置2个含菌片的试管 试管帽置于试管旁 关好柜六 经一个灭菌周期后 待温度降至80 时 加盖试管帽后取出试管 在无菌条件下 加入普通营养肉汤培养基 5ml 管 36 1 培养48h 观察初步结果 无菌生长管继续培养至第7日 2 监测周期 生物监测应每周监测一次 四 结果判定 阳性对照组培养阳性 阴性对照组培养阴性 试验组培养阴性 判定为灭菌合格 阳性对照组培养阳性 阴性对照组培养阴性 试验组培养阳性 则灭菌不合格 同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致 灭菌过程验证装置 PCD对灭菌过程有预定抗力的模拟装置 用于评价灭菌过程的有效性 其内部放置化学指示物时称化学PCD 放置生物指示物时称生物PCD 灭菌质量的监测通用要求 按照灭菌装载物品的种类 可选择具有代表性的PCD进行灭菌效果的监测 注 1 新安装 移位 大修 灭菌失败 包装材料或被灭菌物品改变 应对灭菌效果进行重新评价 包括采用物理监测法 化学监测法 生物监测法进行监测 重复三次 监测合格后 灭菌器方可使用 2 检测所用化学和微生物指示物必须经卫生部批准 并在有效期内使用 过氧化氢等离子灭菌的监测 一 物理监测法 二 化学监测法 三 生物监测 指示菌株 嗜热脂肪杆菌芽孢 ACTT7953 监测周期 应每天至少进行一次灭菌循环的生物监测 7 监测注意事项 1 采取的样本要有代表性及足够的样本数量 并应仔细分析污染来源 2 被采样本面积 100cm2取全部表面 被采样面积 本表100cm2取100cm2 3 若消毒因子为化学消毒剂 采样液中应加入相应的中和剂 4 采样时 尽量用大小一致的无菌棉签 并将棉签通过采样管壁挤压 去除多余的采样液 使之处于湿润状态 而不是浸泡状态 然后按30 角度轻轻地有序地用力均匀地涂抹采样品 禁用干棉签采样 5 送检时间不得超过6h 若样品保存于0 4 则不得超过24h 6 采样时应注意无菌操作规程 以保证结果的准确性 7 样液接种于平皿后应尽快倾注营养琼脂培养基 避免样液干燥于平皿上 影响结果的准确性 8 倾注时琼脂培养基不得超过45 以防损伤细菌或真菌 倾注和摇动时 动作应尽量平稳 以利于细菌分散均匀 便于计数菌落 勿使培养基外溢 以免影响结果的准确性和造成环境的污染 9 每日观察细菌生长情况 培养至规定时间 计数最终结果的菌落数 环境卫生学监测结果分析流程 正视结果 不要盲 细菌学数据超标 目地重复采样 是 回忆采样过程 否 是否存在污染 到一线去查看设施和每个操作环节 询问相关人员的日常操作方法 检查