各公司哺乳细胞表达载体比较.doc

Invitrogen公司pcDNA=CMV; pEF=EF-1a; pUb=Ub;-TOPO=TOPO克隆，/Gateway；-His/V5/myc tagged;抗性Neo/Zeo/Hyg/Bsd载体名称分子量启动子增强子内含子RNA聚合酶N端TagC端Tag特殊序列中止序列polyA复制起始抗性筛选克隆检测方法纯化表达方式备注pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO5.2CMV/V5,6*His有BGHpUCHygTOPO抗V5抗体检测Ni形成相同基因的细胞；必须和Fip重组表达载体pOG44共转染Fip细胞pEF5/FRT/V5-DST7.5EF-1aV5GatewaypEF5/FRT/V5-D-TOPO5.8TOPOpSecTag/FRT/V5-His-TOPO5.2V5,6*HisIgk信号，分泌表达融合蛋白NipcDNA5/FRTCMV酶切pcDNA3.2/V5-GW/D-TOPOCMV/T7V5attB1,attB2/TKpUCNeo稳定pcDNA6.2/V5-GW/D-TOPOBsdpcDNA3.2-DESTCMV/T7V5attR1,attR2;ccdB;CmR/TKf1,pUC,SV40Neo瞬时/稳定pcDNA6.2-DESTBsdpcDNA3.1/nV5-DEST7.1V5attR1,attR2;ccdB;CmR;TEV用于切割V5抗原BGHNeopcDNA3.2-DEST407.1V5,6*HisattR1,attR2;ccdB;CmRpUCNipDEST267.66*HisSV40f1,pUC,SV40NipDEST278.1GSTGSTpcDNA3.1-E, pcDNA4/HisMAX-E 载体在原来基础上增加了 -EEcho无需酶切,连接即可完成基因克隆pcDNA4/HisMax5.3CMVSP163/T76*His,XpressEK/BGHf1,pUC,SV40ZeoXpressNi瞬时/稳定有多种ORFpcDNA4/HisMax-TOPO5.3TOPOpcDNA3.1+/-5.4CMVCMV/T7/BGHf1,pUC,SV40Neo瞬时/稳定无tag的载体pcDNA3.1/Zeo+/-5/ZeopcDNA3.1/Hyg+/-5.6HygpcDNA3.1,4,6/His A,B,C5.5-5.0CMVCMV/T76*His,XpressEK/BGHf1,pUC,SV403.1=Neo, 4=Zeo,6=Bsd瞬时/稳定共22个载体，分别具有不同启动子、抗性、抗原tagpcDNA3.1,4,6/V5-His A,B,C5.5-5.0V5,6*His有pcDNA3.1,4,6/myc-His A,B,C5.5-5.1myc,6*HispEF1,4,6/His A,B,CEF-1aEF-1a同上瞬时/稳定pEF1,4,6/V5-His A,B,CpEF1,4,6/myc-His A,B,C瞬时/稳定pUB/V5-His A,B,CUbpRc/CMV25.5CMV/T7/BGHf1,ColE1,SV40Neo稳定MCS处有2个BstXI酶切位点pRc/RSV5.2RSV LTR/BGHf1,ColE1,SV40NeopZeoSV2(+/-)3.5SV40/T7代替T3/BGH pA代替SV40 pA，避免与Zeo下游的SV40 pA混淆重排f1,ColE1Zeo瞬时/稳定增加了转化和转染效率,与pcDNA3.1相同的MCS, 较pZeoSV去除了Sp6启动子pBudCE44.6CMV/EF-1a/V5-His/myc-His SV40/BGHpUCZeo稳定同时表达两个目的基因pCMV/Zeo,pSV40/Zeo和pCMV/Bsd,pEF/Bsd,pUB/Bsd分别是用于在一新载体上构建Zeo/Bsd抗性Xpresstagged表达载体融合部分可切；V5/BioEase/His/myc-His/Xpress-tagged表达载体在western Blot实验时低背景；myc-His-tagged的表达载体可有效检测的常用抗原，可免疫沉淀；His-tagged的表达载体可有效免疫沉淀；BioEasetagged的表达载体可有效检测的常用抗原，可免疫沉淀Stratagene公司载体名称分子量启动子增强子内含子RNA聚合酶N端TagC端Tag特殊序列中止序列polyA复制起始抗性筛选克隆检测方法纯化表达方式备注pExchange-1 core vector3.6CMV早期/T7, T3kozak有SV40f1,colE1, SV40无WB,免疫沉淀, 免疫荧光, pull down实验, 亲和层析;核酸探针,功能筛选,抗体筛选pExchange-24.3FLAG,c-myc有2套MCS+终止子pExchange-3A,3B,3C FLAGA,B,C三型;有3个ORF,易错;须在克隆目的片断后插入Neo/ Hyg/PurpExchange-4c-mycpExchange-5FLAGpExchange-6c-mycpCMV-Script4.3CMV早期/T7, T3有SV40早期f1,colE1, SV40 Neo上游b-lac启动子/ SV40 ori,下游TK polyA,KanpCMV-Tag14.3c-myc, FLAGkozak(gcca/gccatgg)抗体筛选FLAG/c-myc抗体有2套MCS+终止子pCMV-Tag2FLAG有3个ORF,易错pCMV-Tag3c-mycpCMV-Tag4FLAGpCMV-Tag5c-mycpSG54.1SV40兔b-球蛋白基因T7/有f1无瞬时表达在T抗原的细胞中高表达;可体内/外表达pBK-CMVCMV/T3,T7laclacZSV40早期f1,colE1,SV40Kan,Neo抗体探针,兰白斑噬菌体表达原核/真核细胞中融合表达;产生一系列exo/ mung删除pDual5.5CMV突变/T7lacO凝血酶酶切位点,RBS/ kozakT7SV40晚期f1,colE1,SV40Neo上游b-lac启动子/ SV40 ori,下游TK polyA,Kan兰白斑CBP亲和瞬时/稳定原核/真核细胞中融合表达pDual-GC6.6c-myc, 6*HisRBS/ kozakT7抗体/NiNovagen公司载体名称分子量启动子增强子内含子RNA聚合酶N端TagC端Tag特殊序列中止序列polyA复制起始抗性筛选克隆检测方法纯化表达方式备注pTriEx-1.1b-actinCMV有T7lac/His, HSVp10，T7兔b-球蛋白polyApUCNi瞬时T7lac利于在E.coli中诱导表达;p10利于在昆虫细胞表达;在MCS两端每个ORF上都有平末端的酶切位点以利于克隆pTriEx-2Hisp10,凝血酶/肠激酶酶切位点-N端tagpTriEx-3CMV/p10pTriEx-4Hisp10,凝血酶/肠激酶酶切位点-N端tag以上是瞬时表达载体，在其后加Hyg/Neo即是稳定表达载体，药物抗性基因由增强子CITE控制，其他特性同上Promega公司载体名称分子量启动子增强子内含子RNA聚合酶N端TagC端Tag特殊序列中止序列polyA复制起始抗性筛选克隆检测方法纯化表达方式备注pCI4CMV有T7/SV40晚期f1无瞬时pSI3.6SV40pCI-neo5.5CMVT7,T3Neo瞬时/稳定pTARGET5.7T7T克隆pCMVTNT4.1无瞬时QIAGEN公司载体名称分子量启动子增强子内含子RNA聚合酶N端TagC端Tag特殊序列中止序列polyA复制起始抗性筛选克隆检测方法纯化表达方式备注pQE-TriSystem His-Strep