滤器和超滤管.ppt

滤器和超滤管 赵慧彬2015年6月3日 针头式过滤器采用透明级高分子材料丙烯腈 丁二烯 苯乙烯 ABS 或聚丙烯 PP 制成 与一次性注射器配套使用 为实验室常规使用的快速 方便 可靠的小体积样品的过滤处理装置 主要应用 样品的预滤 实验室生物流体 血液 尿液等 培养基和媒介添加剂的除菌过滤 2种直径规格可选 13和30cm5种膜类型 MCE NYLON PVDF PES PTFE 混纤膜 MCE 由硝酸纤维素和醋酸纤维素混合而成 亲水性 化学兼容性强 蛋白吸附量高 用于颗粒分析 颗粒去处 生化分析 HPLC样品制备和溶剂过滤尼龙膜 NYLON 化学相容性好 能在PH值1 12的条件下使用 适用于生物制品 培养基 溶液的除菌过滤 聚偏氟乙烯膜 PVDF 亲水性PVDF膜结合的蛋白远远少于硝酸纤维素 尼龙和PTFE过滤膜 可与水溶液和多种有机溶剂兼容 适用性广泛 耐氧化性和耐热性好 极适用于HPLC GC的制备 聚醚砜膜 PES 低蛋白吸附 高流速 PH值范围广 化学相容性好 适用于样品的制备 水溶剂过滤 微生物研究 环境分析 生物分析 HPLC流动相过滤等 聚四氟乙烯 PTFE 化学稳定性和惰性 适用于化学腐蚀性较强的有机溶剂 水溶液和气体 对大多的酸性 碱性和溶液都有耐受性 黄色的是PVDFDurapore膜的 是又一款hero产品 其亲水型PVDF膜是所有膜中蛋白吸附最低的 如果是含有蛋白成分的样品 用黄色的Millex 样品活性成分损失最小 绿色的是PES膜的 MilliporeExpressPLUS商品名代表的是 最快流速 这个得益于密理博对PES膜的特别工艺改造 漏斗形的膜孔结构带来业界标杆性的使用效果 既快又好 200mL的样品轻松搞定 蓝色的MCE 紫色的Nylon 白色的PTFE膜等在化学兼容性方面更为宽泛 适合含有特殊 有机 化学成分和酸碱性较强的样品 白色的有PES膜 也有PTFE膜 具体规格根据客户需要 处理量分别是15ml 4ml 2ml 0 5ml 再生纤维素膜具有一系列截留分子量 有3KD 10KD 30KD 50KD 100KD 使用超滤管的优势 高回收率 90 垂直结构的膜减少了浓差极化 加快离心速度 快达5分钟热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低100 完整性检测确保性能可靠透明外壳和体积刻度方便样品察看直接吸取样品减少处理步骤高浓缩倍数 80 100倍 应用 生物样品浓缩 包括抗原 抗体 酶 核酸或微生物 组织培养提取物或细胞裂解液中大分子组分的纯化 对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩 脱盐和缓冲液更换 换浓缩蛋白时超滤管的处理 超滤管可以重复使用 用0 1M的NaOH浸泡1 2h 用水清洗 再在离心机上用相关溶液 灭菌水或PBS 清洗3次 即可用于浓缩新的蛋白 长时间放置超滤管的处理 较长时间不使用的超滤管 在用0 1M的NaOH浸泡1 2h 用水清洗 用20 的乙醇浸泡保存 务必保持滤膜润湿 不能长菌 超滤管使用的离心转速 离心转速一般采用4000rpm 一般建议为3000g 最大不能超过4000g 离心5 8分钟 即可将4ml样品浓缩至1ml以下至几十微升 速度过高 目的蛋白会离下 导致目的蛋白丢失 速度过低 耗时 工效低 枪头伸入超滤管中时注意事项 加蛋白液或Buffer到超滤管时 可以用蓝枪头 但从超滤管底吸取浓缩好的目的蛋白时 必须用黄枪头 用枪头伸入超滤管中时 必须防止碰到滤膜 以免戳破滤膜 减少超滤管对蛋白的吸附损失 超滤管的滤膜能吸附蛋白 会导致目的蛋白减少可达30 左右 为减少蛋白损失 在吸尽目的蛋白液后 再用蛋白Buffer吹洗超滤管的管底 可以将滤膜吸附的蛋白洗下大部分而减少目的蛋白的损失 如纯化的蛋白较浓时 注意浓缩的体积不可过小 一般无论如何离心 底部会保留有200 l左右的蛋白液 如何