流式细胞术在临床中的应用PPT课件.ppt

流式细胞术在临床中的应用 马雷 1 流式细胞术 20世纪60年代末发展起来的细胞定性和定量的技术 通过收集激光照射到细胞后的散射光信号和荧光信号反映细胞的物理化学特征 并且根据细胞的物理化学特征分选得到感兴趣的细胞 2 流式细胞仪构造模式图 液流系统光学系统电子系统分选系统 3 细胞与分子生物学 流体力学 电磁理论和生物技术 激光技术 荧光技术 光电子技术 单克隆抗体技术 计算机技术 纳米技术等 流式细胞术是现代科学技术发展的综合交叉的产物 是集多种技术发展于一体的 大成者 涉及多种学科及技术 4 5 6 7 流式在肿瘤学中的应用 1 JY细胞周期与DNA倍体分析 标本类型 胸水和腹水血液标本组织块标本 8 原理 9 临床意义 肿瘤的早期诊断与鉴别良恶性胸腔积液和腹水的鉴别诊断用于临床肿瘤治疗效果监测用于临床抗肿瘤治疗时药物的选择用于早期淋巴瘤的诊断用于良性肿瘤与中低度恶性肿瘤的鉴别用于肿瘤患者的预后判断 10 流式在肿瘤学中的应用 2 JY细胞凋亡分析标本类型 胸水和腹水血液标本组织块标本 11 原理 12 13 临床意义 用于临床抗肿瘤疗效监测早期凋亡细胞百分数是临床抗肿瘤治疗有效的较早期评价指标 14 流式在肿瘤学中的应用 3 JY肿瘤多药耐药基因CD243检测标本类型 胸腔积液腹水组织标本贴壁培养细胞 15 原理 化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用 依赖于进入细胞内部的药物浓度的高低 多药耐药基因 1是一种糖蛋白 编号为CD243 这种糖蛋白可以大量捕获进入细胞内部的化疗药物 并将其 搬出 细胞 使细胞内部化疗药物浓度降低 造成药物对瘤细胞的杀伤作用降低或消失 最终出现耐药性现象 16 临床意义 了解瘤细胞CD243表达水平 如果是高表达 提示化疗疗效可能很差 宜采取放疗 如果瘤细胞CD243表达水平很低或不能检出 化疗过程中建议定期监测瘤细胞CD243水平 辅助判断预后 17 流式在免疫学中的应用 4 JY淋巴细胞亚群标本类型 静脉血临床意义可将淋巴细胞分类为 18 临床意义B细胞减少见于原发及继发性免疫功能低下 严重的病毒感染等情况 B细胞增高 提示机体体液免疫功能被增强 见于临床各种细菌性感染 及B细胞白血病 NK细胞数量是肿瘤临床病情判断 疗效监测的指标 NK细胞减少见于脑心肌炎病毒 流感病毒 EB病毒 柯萨奇病毒等 19 流式在免疫学中的应用 5 JY总T T4 T8淋巴细胞标本类型 静脉血 20 临床意义T4增高 主要见于临床各种细菌性感染性疾病 T4降低 主要见于临床各种病毒感染性疾病 有助于艾滋病的诊断 疾病分期判断和疗效监测 正常人 HIV感染者 AIDS病人 21 T8增高 多见于HBV 巨细胞病毒 CMV 人类疱疹病毒 EB 及结核杆菌感染 CD8 CD38 亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标 T8减低 多见于r免疫球蛋白缺乏症 胸腺发育不良和糖尿病等 AIDS病人 HIV感染者 正常人 23 流式在免疫学中的应用 6 JY辅助性T细胞 Th 和诱导性T细胞 Ti 检测临床意义 Th细胞 CD4 CD29 减少见于免疫缺陷 严重感染 肿瘤患者 可作为肿瘤诊断及疗效监测的指标 增多见于各种感染 Ti细胞 CD4 CD29 具有诱发免疫应答的功能 24 流式在免疫学中的应用 7 JY效应T细胞 Th1 Th2 检测8 JY调节性T细胞检测9 JY辅助性T细胞17 Th17 检测 25 CD4 T细胞亚群的分化与细胞因子的关系 26 TH1 TH2 自身免疫病 参与 拮抗 27 28 天然TREG细胞在免疫系统中的作用 平衡状态 既可有效清除外来病原体 又可避免过度的炎症反应 缺乏调节性T细胞 免疫反应过度 造成自身免疫病 哮喘 过敏反应 移植排斥 流产等 过多的调节性T细胞 免疫反应低下 无法有效清除病原体及肿瘤 造成感染及癌症 29 Th17细胞参与炎性反应和宿主抗胞外病原体反应 作为可分泌IL 17A的Th的一个亚群 Th17在自身免疫病发生过程中发挥重要作用 临床意义Th17细胞释放的IL 17可引发自身免疫性脑炎 EAE 哮喘 类风湿性关节炎 RA 等自身免疫性疾病 30 流式在细菌感染疾病中的应用 10 JY中性粒细胞膜表面CD64检测标本类型 静脉血原理 无论胞内或胞外细菌感染 都会引起CD64特异性增高 临床意义 查阅中 外文献 发现中性粒细胞膜表面CD64检测与CRP PCT 中性粒细胞计数相比 可以提高对感染和脓毒血症的检出率 且具有早期诊断价值 灵敏度和特异性均较高 31 CD64分析可以更好区分感染性与非感染性炎症反应 诊断急性感染和全身感染的灵敏度和特异性较高门 急诊患者细菌感染的筛查和预后判断细菌性感染与非细菌性感染的鉴别诊断术后感染与应激反应的鉴别诊断感染患者的抗生素治疗监测 指导抗生素用药 32 流式在自身免疫性疾病的鉴别诊断 11 JY红细胞表面相关免疫球蛋白 EAIg 检测临床意义 阳性见于临床免疫性溶血性贫血 IHA 系统性红斑狼疮等疾病 用于IHA的鉴别诊断与亚型分类用于新生儿溶血性疾病的监测 33 流式在自身免疫性疾病的鉴别诊断 12 JY粒细胞表面相关免疫球蛋白 GAIg 检测临床意义 用于自身免疫性白细胞减少症的鉴别诊断与亚型分类 34 流式在自身免疫性疾病的鉴别诊断 13 JY血小板表面相关免疫球蛋白 PAIg 检测临床意义 用于临床特发性血小板减少性紫癜 ITP 的筛查与诊断 35 流式在强直性脊柱炎鉴别诊断中的应用 14 JY强直性脊柱炎相关抗原HLA B27检测标本类型 静脉血 2 3ml 原理 HLA B27是脊柱关节病病因及发病机制的关键已经被广泛认同 各种假说均支持患者由于存在HLA B27的高表达引起了体内异常的免疫应答 从而导致了脊柱关节病的发生 临床意义 用于强直性脊柱炎的辅助诊断与鉴别诊断用于临床强制性脊柱炎高危人群的筛查 36 流式在造血干细胞移植中的应用 15 JY静脉血造血干细胞计数标本类型 静脉血2ml原理 造血干细胞表达CD34而不表达CD38 造血祖细胞既表达CD34也表达CD38 利用单克隆抗体 临床流式技术可以很轻松对造血干细胞计数 临床意义 用于临床进行干细胞采集前 对捐献者动员后外周血干细胞的动员效果进行监测和是否实施单采的时机判断 用于贫血的鉴别 再障属于干细胞受累 其静脉血中的干细胞数量明显减少 而缺铁性等贫血干细胞数量正常 37 流式在阵发性睡眠性血红蛋白尿症中的应用 16 JY阵发性睡眠性血红蛋白尿症单克隆检测标本类型 静脉血 2 3ml 原理 阵发性睡眠性血红蛋白尿 PNH 是一种补体介导的以血管内溶血为主要特征的获得性造血干细胞克隆性疾病 主要特征是血细胞膜上的锚蛋白减少甚至消失 通过测定红细胞表面标志物CD235a 锚蛋白CD59和能与中性粒细胞膜表面锚蛋白结合的FLAER 发现百分之一的PNH细胞克隆 是一种非常灵敏 特异的方法 临床意义 用于PNH的诊断与鉴别诊断用于贫血的鉴别诊断 38 鉴别系别 淋 髓 区分亚型特殊类型 杂合型 AUL 细胞遗传学异常预