溶菌酶的溶菌作用PPT课件.ppt

第三次实验 溶菌酶的溶菌作用 小吞噬实验 1 溶菌酶的溶菌作用 实验原理溶菌酶 lysozyme 又称胞壁质酶 muramidase 或N 乙酰胞壁质聚糖水解酶 N acetylmuramideglycanohydrlase 是正常体液与分泌液中所含的一种小分子碱性蛋白质 它能水解革兰阳性菌细胞壁中的肽聚糖成分 作用于 1 4糖苷键 使细胞壁崩解 溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合 与DNA RNA 脱辅基蛋白形成复盐 使病毒失活 因此 该酶具有抗菌 消炎 抗病毒等作用 是非特异性免疫中一种重要的体液物质 2 实验材料与器材1 人的唾液 含有溶菌酶 溶菌酶标准品 生理盐水 2 细球菌 M Lysodeikticus 3 1 0 盐水琼脂管 7 8mL 管 灭菌的1mL吸管 毛细吸管 打孔器 平皿 竹签和橡皮乳头等 3 注 唾液 生理盐水 阴性对照 溶菌酶 阳性对照 实验步骤 1 取灭菌的小平皿一个 用灭菌1mL的吸管吸取0 5mL 9亿 mL 细球菌活菌菌液注入平皿内 2 取已溶化并冷却至45 55 的生理盐水琼脂管一支 倾注于上述平皿内 迅速水平混匀 平放待凝 3 用打孔器 孔径为6mm 打孔 用竹签挑出孔中琼脂 4 先用清水漱口 略待片刻将唾液吐于灭菌平皿内 用毛细吸管吸出 注意不要有气泡 不要溢出 并分别加入生理盐水和溶菌酶标准品 置37 18h后观察结果 4 预测实验结果阳性结果 加在唾液空周围出现一圈很明显的溶菌环 注意事项在实验中应该注意无菌操作 否则杂菌生长会影响溶菌环的观察 5 小吞噬实验 实验原理机体内具有吞噬功能的细胞可分为两大类 即小吞噬细胞和大吞噬细胞 小吞噬细胞一般指血液中的中性粒细胞 中性粒细胞 neutrophilicgranulocyte 在瑞氏染色血涂片中 胞质呈无色或极浅的淡红色 有许多弥散分布的细小的 0 2 0 4微米 浅红或浅紫色的特有颗粒 细胞核呈杆状或2 5分叶状 叶与叶间有细丝相连 其颗粒表面有一层膜包裹 颗粒中含髓过氧化物酶 酸性磷酸酶 吞噬素 溶菌酶 葡糖苷酸酶 碱性磷酸酶等 中性粒细胞具趋化作用 吞噬作用和杀菌作用 6 实验材料与器材 1 表面葡萄球菌菌液 9亿 mL 2 3 8 枸櫞酸钠或肝素 25U mL 3 毛细吸管 凹玻片 载玻片 牙签 甲醇 瑞氏 姬娒萨染料 PH6 4PB 酒精 棉球 采血针等 7 2020 1 8 8 实验步骤 1 取厚凹玻片一张 在凹孔中滴加一滴 0 4mL 3 8 枸櫞酸钠或肝素 25U mL 2 酒精棉球消毒手指后 用采血针从消毒部位采取2大滴 约0 2mL 加入凹孔中混匀 3 加表皮葡萄球菌菌液1滴 0 02 0 04mL 然后用牙签轻轻搅匀 9 4 将玻片放湿盒内 置37 孵箱中40 50min 5 作用完毕 取出1滴制成薄片 自然干燥 6 置瑞氏液1min 置PH6 4PB中3min 置瑞氏 姬娒萨染料染5 10min 蒸馏水洗 待干镜检 10 预测实验结果胞浆呈淡蓝色或淡红色 细菌呈深蓝色或紫色 红细胞呈褐色 细胞核呈紫红色 注意事项1 个体差异 年龄 健康状况的不同 其吞噬能力亦不同 2 涂血片时不宜太厚 否则不宜观察 结果 11 谢谢 12 胞质呈无色或极浅的淡红色 有许多弥散分布的细小的 0 2 0 4微米 浅红或浅紫色的特有颗粒 细胞核呈杆状或2 5分叶状 叶与叶间有细丝相连 返