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生物制药知识点 1、发酵生产三要素 生产菌种、发酵工艺、发酵设备2、蛋白质药物的缺点 药理作用的放大或延伸、免疫毒性、杂质或污染物引起的毒性。3、生产药物的天然微生物类型 大肠杆菌：G-，单细胞，杆状。鞭毛，无芽孢，一般无荚膜。裂殖菌落：白色至黄白色，光滑。酵母菌：单细胞真核生物，球形、椭圆形、卵形，芽殖、裂殖，在特定条件下才产生子囊孢子菌落：乳白色，有光泽，边沿整齐。4、常用兼性贴壁依赖性细胞 CHO细胞，BHK细胞，L929细胞。5、治疗性单抗适应症用于肿瘤的治疗：通过ADCC和CDCC等途径直接杀伤肿瘤细胞；改变细胞信号转导，诱导瘤细胞凋亡等。抗体还可以靶向运送细胞毒结合物直接杀伤瘤细胞。用于免疫性疾病治疗：通过结合免疫病理过程中的重要因子、阻断其功能而发挥作用。15、单域抗体单域抗体仅由重链构成，其抗原结合区仅是一个通过铰链区与Fc区连接的单结构域，而且这个抗原结合区自抗体上分离后仍具有结合抗原的功能16、人源化抗体采用DNA重组技术连接小鼠抗体可变区V区得基因片段和人抗体稳定区C区得基因片段，将其插入表达质粒，再转化骨髓瘤细胞，分泌的抗体即人源化抗体。6、游离植物细胞的制备定义：使细胞膜和细胞质中大部分蛋白质和脂质被溶解抽提掉，但细胞骨架系统蛋白质却不受破坏而被保存下来，经固定和染色后可在光镜下，见到网状结构的细胞骨架，然后融合某种细胞核。7、酶在医药领域的应用 疾病诊断：一是根据体内原有酶活力的变化来诊断某些疾病，而是利用酶来测定体内某些物质的含量，诊断某些疾病。疾病治疗：酶可以作为药物治疗多种疾病，用于治疗疾病的酶成为药用酶。药物生产：利用酶的催化作用将前体物质转变为药物。分析检测：酶法检测或酶法分析。18、微生物转化通过微生物细胞将复杂的底物进行结构修饰，即利用微生物代谢过程中产生的某个或某一系列的酶对底物特定部位进行的催化反应。12、微生物转化反应的特点蛋白酶为催化剂对立体结构合成上具有高度的专一选择性反应速度快反应条件温和24、基因工程药物的质量检控内容 危害性：操作的后果还存在不可预测性和不可控制性药物质量的不稳定性残留抗生素伤害正常的细胞可能出现变异体解决措施：构建表达载体时给目的基因组装诱导型启动子慎用选择标记基因或报告基因尽可能采用外源DNA定位整合载体完善对此类产品的严格质量控制。27、固定化酶的酶学特性的变化情况 、固定化对酶活性的影响：酶活性下降，反应速度下降。也有在个别情况下，酶经固定化后其活力升高，、固定化对酶稳定性的影响（1）操作稳定性提高。（2）贮存稳定性比游离酶大多数提高。（3）对热稳定性，大多数升高。（4）对分解酶的稳定性提高。（5）对变性剂的耐受力升高。、载体的带电性质对最适pH的影响1）带负电荷的载体，固定化酶的最适pH值比游离酶的高。带正电荷的载体，固定化酶的最适pH值比游离酶的低。2）产物性质对体系pH的影响 催化反应的产物为酸性时，固定化酶的pH值比游离酶的pH值高；反之则低。、固相酶的最适温度一般比天然酶高，个别会有所降低。、作用于低分子底物的酶， 特异性没有明显变化;既可作用于低分子底物又可作用于大分子底物的酶， 特异性往往会变化。、固定化酶的表观米氏常数Km随载体的带电性能变化。19、高密度培养菌体浓度（干重）至少达到50g/L以上的一种理想培养，发酵工艺的目标和方向。10、高密度培养的优点缩小发酵体积、增加表达量、成本低，生产率高。20、灌流（注）式操作培养液一起装入发酵罐，接种后培养过程中，不断补充新培养基，取出部分培养基，菌体仍然滞留罐内。特点：除去有毒害的代谢物补充营养物质23、发酵生产中pH的影响及其控制Ph与微生物的生命活动密切相关酶催化活性Ph变化是微生物代谢状况的综合反映基质代谢、产物合成、细胞状态、营养状况、供氧状况通过观察ph变化规律可以了解发酵的正常与否。控制：分阶段控制，生长最适ph和产物最适ph缓冲液控制，碳酸钙和磷酸盐缓冲液。补加酸或碱进行控制补料方式控制，流加糖率来控制ph28、发酵工程菌种选育改良的具体目标提高目标产物的产量提高目标产物的纯度，减少副产物改良菌种性状，改善发酵过程改变生物合成途径，以获得高产的新产品。22、愈伤组织在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞（细胞排列疏松、无规则）。8、菌种保藏的原理及措施 原理：DNA复制时自发突变是造成菌种退化的原因，因此要创造代谢不活泼的状态（包括休眠态和干燥、低温、缺氧、缺营养环境）。方法：斜面保藏法和穿刺保藏法沙土管干燥保藏法真空冷冻干燥保藏法液氮保藏法悬液保藏法低温保藏法。9、改善基因工程菌不稳定性的策略 改进载体受体系统选择复合培养基提高比生长速率维持一定的pH和溶氧水平遏制外源基因的表达施加选择压力分阶段控制培养控制目的基因的过量表达优化基因工程菌的培养工艺控制培养条件固定化11、影响质粒稳定的因素宿主菌载体选择压力质粒的复制功能和分配功能培养条件宿主菌是否固定化13、种子活化 用一定的条件和方法使细胞器和酶活化，呼吸增强，RNA、蛋白质代谢活跃，线粒体活性明显提高。14、融合蛋白 通过生物学或化学方法融合的两个或两个以上蛋白质。17、植物诱导子是一类能引起植物细胞合成积累次生代谢物活性的物质。诱导子对植物具有专一性，在生产次生代谢物时就要选择一种适宜的诱导子。21、包涵体在某些生长条件下，大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子，它们致密地集聚在细胞内，或被膜包裹或形成无膜裸露结构，这种水不溶性的结构称为包涵体25、动物细胞培养的要求 1无菌无毒的环境 2营养与体内基本相同 3适宜的温度和酸碱度 4气体环境26、抗体生产的发展趋势 筛选新抗原，靶向出发不同的靶点和治疗机制。增强ADCC效应全长抗体基因治疗人源化抗体29、包涵体表达形式的优缺点。优点：1能简化外源基因表达产物的分离操作：包涵体的水难溶性及其密度远大于其它细胞碎片和细胞成分，菌体经超声波裂解后，直接通过高速离心即可将重组异源蛋白从细菌裂解物中分离出来 2能在一定程度上保持表达产物的结构稳定 在形成包涵体之