动物繁殖控制技术.doc

第六节 动物繁殖控制技术一、诱发发情二、同期发情三、胚胎移植胚胎移植：是指将一头良种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到同种的生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成新个体，所以也称作借腹怀胎。提供胚胎的个体为供体，接受胚胎的个体为受体。胚胎移植实际上是产生胚胎的供体和养育胚胎的受体分工合作共同繁殖后代的过程。胚胎移植产生的后代，遗传物质来自供体母畜和与之交配的公畜，而发育所需的营养物质则从养母（受体）获得，因此供体决定着它的遗传特性（基因型），受体只影响它的体质发育。（一）供、受体母畜的选择1.供体的选择1) 具备遗传优势，在育种上有价值：应选择生产性能高，经济价值大的母畜作为供体。2) 具有良好的繁殖能力：既往繁殖史正常，易配易孕，没有遗传缺陷，分娩顺利正常无难产。3)健康无病：特别是无繁殖疾病和传染性疾病。4)营养良好，体质健壮。2.受体的选择受体母畜可选用非优良品种的个体，但应具有良好的繁殖性能和健康体况，可选择与供体发情同期的母畜为受体，一般二者发情同步差不超过24小时。（二）供体和受体的发情同期化供、受体的同期化是胚胎移植的关键，只有当供、受体的生殖器官处于相同的生理状态，移植的胚胎才能正常发育。若不同期，胚胎处于不同生理环境，受体母畜不能产生促黄体作用，不能分泌足量的孕酮，胚胎就不能附植。一般供受体同期化发情时间不得超过一天，同期化越近成功率越高。当前比较理想的同期发情药物是前列腺素及其类似物，其用量根据药物的种类和用法而有不同，如子宫灌注的剂量要低于肌肉注射的剂量。在注射PGF2后24小时，配合注射促进卵泡发育的PMSG或FSH，可明显提高同期发情效果。（三）供体母畜的超数排卵1超数排卵的概念在母畜发情的适当时间内利用外源性激素，促进卵巢机能，激发卵巢一次有较多卵泡发育成熟并排卵。（四）胚胎采集采胚是指借助工具利用冲胚液将胚胎由生殖道（输卵管或子宫角）中冲出，并收集在器皿中。胚胎采集有手术法和非手术法两种方法，手术法适用于各种动物，非手术法仅适用于牛、马等大动物，且只能在胚胎进入子宫后进行。1.胚胎采集前的准备（1） 冲胚液、培养液的配制为了保证胚胎在离体条件下不受损伤，冲胚液必须符合一定的渗透压和PH值。现在多采用杜氏磷酸缓冲液（PBS）、布林斯特氏液、合成输卵管液（SOF）以及199培养液（TCM199）等，它们除含各种盐类外，还含有多种有机成分，不但可用于冲洗、采胚，还可用于体外培养、冷冻保存和解冻胚胎等。冲胚液和培养液在使用前都要加入血清白蛋白，含量一般为0.3-1%，也可用犊牛血清代替，犊牛血清需加热（56水浴30分钟）灭活，使血清中的补体失去活性，以利胚胎存活。冲胚血清含量一般为3%（1-5%），培养血清含量为20%（1-50%）。（2） 采胚时间的确定采胚时间的确定应根据配种时间、发生排卵的大致时间、胚胎的运行速度、胚胎的发育阶段、畜种、胚胎所处部位、采胚方法等因素来确定。1.采胚方法（1）手术法采胚：在沿腹部中线作一切口，找出输卵管和子宫角，引出切口外，用注射器吸取冲洗液注入输卵管或子宫角内。从另一方向插入塑料细管或针头，用表皿接取冲洗液，胚胎即随冲洗液一起流出。两侧应分别冲洗。由于子宫角与输卵管峡部接合处结构上的不同，一般牛羊是将冲洗液从子宫角注入，由输卵管的伞接取。猪马相反。（2）非手术法采胚：非手术法是利用三路导管的采胚器瘵冲洗液通过中管注入子宫角内，然后通过内管导出冲洗液，外管前端连接一气囊，当将采胚器插入子宫角后，充气使气囊胀大，堵住子宫颈内口，以免冲洗液经子宫颈流出。也可用二路导管采胚器，冲洗液的注入和导出是通过同一导管。非手术法采胚每侧子宫角用冲洗液100-500ml。（五）胚胎的检查和鉴定检查胚胎应在20-25的无菌操作室内进行，可采用以下两种方法：一是静置法把盛冲胚液的容器静置20-30分钟，因胚胎比重大，会下沉到容器底部，然后将上面的液体弃去，将下面的几十毫升冲胚胎液倒入平皿，在立体显微镜下进行检查。二是用带有网格（直径小于胚胎直径）的过滤器放入冲胚液中，由上而下吸出冲胚液，最后只检查下面的几十毫升冲胚液即可。检出的胚胎用吸胚器移入含有20%犊头血清PBS培养液中进行鉴定。（七） 胚胎的移植1. 手术法移植：在进行采胚和检查的同时或之后，立即在受体腹部作一切口，找到排卵一侧的卵巢，用注射器或移植器将胚胎注入同侧的子宫角或输卵管内。2 非手术法移植：适用于牛马等大动物。移植前将可移植的胚胎吸