正交实验法从黄芩中提取总黄酮.doc

正交实验优选黄芩中总黄酮的提取工艺林春莲（江西中医药大学330004） 伍振峰（江西中医药大学重点实验室330004）中文摘要目的:优选黄芩中总黄酮的提取工艺并测定其含量。方法：利用酶解法选取加液量、提取时间、提取次数为考察因素，通过L9（33）正交实验筛选最优提取工艺；采用紫外分光光度法，以芦丁为对照品测定黄芩中总黄酮的含量。结果：优选得到的工艺条件为采用14倍量水提取两次，每次90分钟。结论：优选的提取工艺简单、方便、提取率高，可达到实验要求。关键词：正交实验 ; 黄芩; 总黄酮 ; 提取工艺 ; 紫外分光光度法AbstractPurpose: to optimizing extraction technology and determination of the content of total flavonoids in scutellaria baicalensis georgi. Methods: by using enzymatic hydrolysis and fluid volume, extraction time, extraction times to examine factors, through L9 (33) orthogonal experiment to screen the optimal extraction process.Using ultraviolet spectrophotometry, with rutin as reference substance determination of the content of flavonoids in radix scutellariae. Results: the optimization of process conditions for the extraction of 14 times the amount of water used twice, 90 minutes at a time. Conclusion: the optimal extraction process is simple, convenient, high extraction yield and can meet the experimental equirements. Keywords:Oorthogonal test; Rradix scutellariae ; Flavonoids ; Eextraction technology ; UVspectrophotometry前言黄芩是常用的中药,为唇形科植物黄芩(Scutellariae baicalensis)的干燥根，黄芩味苦性寒，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。用于湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安1。其主要有效成分为黄酮类化合物，包括黄芩苷（baicalin)、汉黄芩苷、黄芩苷元(baicalein)等,其中以黄芩苷含量最多，具有抗菌消炎、解热、抗肿瘤、抗流感病毒、抗动脉粥样硬化等作用2-5。本文以总黄酮含量为考察目标，利用酶解法，采用单因素实验和正交试验优选了黄芩中总黄酮的提取工艺，用紫外分光光度法测定了黄芩提取物中总黄酮的含量。正文1、 总黄酮的提取 本实验的所采取的提取方法为水提醇沉回流提取法，有文献报道【6-8】还可采用醇提酸沉法、超滤法、微波提取法等提取黄酮类化合物，考虑到实验条件及操作的简便性，最终选择实验室较为常用和简便的水提醇沉法回流提取法。1 实验仪器、药品与试剂1.1实验仪器： 可调式电热套MH-250型 250ml （北京科伟永兴仪器有限公司）；恒温水浴锅HH-S6 双列六孔（郑州长城科工贸有限公司）；SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城）；热风循环烘箱DZF-6020MBE（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；岛津UV- 240型紫外-可见光分光光度仪（日本岛津公司）1.2药品与试剂：黄芩饮片 芦丁标准品（中国药品生物制品检定所） 60%乙醇 5%亚硝酸钠（广东汕头市西陇化工厂 分析纯） 10%硝酸铝（广东台山化工） 4%氢氧化钠（天津市福晨化学试剂厂 分析纯） 蒸馏水（实验室自制）2 方法和结果2.1 因素水平设计根据提取工艺要求，选取加液量、提取时间、提取次数作为三个考察因素，各取三个水平，以总黄酮为考察指标，选用L9(33)正交实验表。表1 因素水平表因素加水量A/倍提取时间B/min提取次数C/次1103012126023149032.2总黄酮的含量测定2.2.1供试品溶液的制备 称取黄芩药材样品5g，置250ml的圆底烧瓶中，按照水平因素表1的条件置于电热套中进行回流提取，滤过，提取液移至250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，作为样品溶液。用移液管精密量取20ml样品溶液置蒸发皿中放于水浴锅中蒸干，残渣加60%乙醇溶解，过滤，移至25ml容量瓶中，用60%乙醇定容至刻度。用移液管精密量取5ml溶液置25ml容量瓶中，加入质量分数为5%亚硝酸钠1.0ml摇匀，静置6 min再加入质量分数为10%硝酸铝1.0ml摇匀，静置6min加入质量分数为4%氢氧化钠10.0ml，用60%乙醇定容至25ml摇匀，即得供试品溶液。2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品20.8mg置100ml容量瓶中，加60%乙醇溶解，定容，即得。2.2.3 标准曲线的制备 分别精密吸取2.2.2项下的对照品0、2、3、4、5、6、7ml置25ml容量瓶中，按2.2.1项下的方法操作。用可见-紫外分光光度计与510nm出测吸光度。以芦丁对照品的浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，的回归方程：2.2.4 含量测定 取供试品溶液，按2.2.3项下的方法操作，测定吸光度值，计算样品中总黄酮的含量。2.3正交试验设计 在单因素的基础上，按表1选取的三