曲普瑞林微球的制备及质量控制.doc

曲普瑞林微球的制备及质量控制第28卷第2期(第11页)2011拄湖北民族学院?医学版JournalofHubeiUniversityforNationalities?MedicalEditionV01.28No.2P.112011曲普瑞林微球的制备及质量控制龙镭,王仁友,唐样明,周长华,陈健文1.深圳翰宇药业股份有限公司(广东深圳518057)2.中山大学药学院(广东广州510006)【摘要】目的制备曲普瑞林微球并建立其质量控制标准.方法以聚乳酸一羟基乙酸为载体,采用改良的W/O/w复乳一液中蒸发法制备曲普瑞林微球;以包封率为指标,优化微球的制备工艺,建立微球的质量标准.结果优化后的曲普瑞林微球载药量大于6%,粒径小于100m,28d累积释放度超过90%.结论成功制备了曲普瑞林微球并建立了其质量控制标准.【关键词】曲普瑞林;微球;制备;质量控制【中图分类号】R977.1【文献标识码】A【文章编号】10088164(2011)020011-03PreparationandQualityControlofTriptorelinAcetateMicrosphereLONGLei,WANGRen-you,TANGYang-ming,ea1.(HybioPharmaceuticalCo.,Ltd,Shenzhen518057,China)【Abstract】ObjectiveTopreparetriptorelinacetatemicrosphereandsetupthestandardofqualitycontro1.MethodsTriptorelinmicrospherewaspreparedbymodifiedW/O/Wdoubleemulsioninliquidevaporationprocess,usingthepolyIacticcOglycOIicacidascarrier.Theencapsulationefficiencywasusedasthemainindextooptimizethepreparationofmicrospheresandevaluatethequalitycriteria.ResultsTheoptimizedmethodofmicrosphereswasestablished.Theamountofdrugloadingwasover6%,theparticlediameterwaslessthan100m,andthereleaserateofaccumulationwasmorethan90%intheperiodof28days.ConclusionTriiptorelinmicrospherewasprepared,anditsstandardofqualitycontrolwasestablishedaccordingly.【Keywords】triptorelin;microsphere;preparation;qualitycontrol曲普瑞林(Triptorelin)是人工合成的十肽,是天然GnRH(促性腺激素释放激素)的类似物.研究表明,曲普瑞林长期使用可使促性腺激素分泌,从而抑制睾丸和卵巢的功能.曲普瑞林临床上用于治疗转移性前列腺癌,性早熟,生殖器内外的子宫内膜异位症(I至IV期);在体外受精一胚胎移植程序(IVFET)中,与促性腺激素(hMG,FSH,hCG)联合使用,可以诱导排卵.目前曲普瑞林制剂存在半衰期短,稳定性差,口服难吸收,副作用大的缺点-2J.针对以上缺点,我们研制了醋酸曲普瑞林微球,并对其生产工艺进行了优化,为下一步产业化奠定基础.1.仪器与试剂1.1仪器超声波细胞破碎仪,美国BRANSON;高速均质机,英国SILVERSON;旋转蒸发仪,上海申科;真空冷冻干燥机,上海东富龙;LC一2010A高效液相色谱仪,日本SHIMADUZU;C18分析色谱柱,美国沃特斯(4.6nlmx150m/n,5m);激光粒度仪,岛津(北京)公司;CP一3380气相色谱仪,美国瓦里安.1.2试剂曲普瑞林原料和对照品,深圳翰宇药业股份有限公司提供;PLGA75252.5A,香港法穆生物有限公司;PVA,湖北潜江制药厂;明胶,罗赛洛(广东)明胶有限公司;甘露醇,广东省新宁制药厂;乙腈,色谱纯;其余试剂均为分析纯.作者简介龙镭(1965一),男,贵州六盘水人,工程师,从事新药开发工作;通讯作者陈健文.12湖北民族学院?医学版第2期2方法与结果2.1微球制备参照文献3,4.2.1.1制备采用复乳一液中干燥法制备微球,具体工艺为:将曲普瑞林加入明胶水溶液中溶解制成内水相,加入PLGA二氯甲烷溶液适量超声乳化1min,形成W/O混合相,将W/O混合相注入0.25%PVA溶液中,4000rpm高速搅拌乳化,形成W/O/W复乳,旋转蒸发2h,2000rpm离心5min,沉淀物用10%甘露醇溶液洗下,冷冻干燥机干燥,分装,辐照灭菌即得.2.1.2筛选采用不同来源,不同规格的PLGA辅料进行工艺制备药品辅料的筛选,其结果见表1.表1不同来源PLGA微球样品的释放度(9O%释放)规格来源级别时间(d)PLGA75:25山东医疗器械研究所化工级6OPLGA75:25一,e删.药用级281nerapeutlesmencanl1.APLGA50:50BoehringerIngelheim,GermanY药用级45PLGA75:25Ph珊一BLiio.yst.(HK药用级28miteLla.由于醋酸曲普瑞林微球的释放时间为1个月,选择28d释放的PLGA75:25为宜.2.1.3工艺优化以包封率作为考察指标,设计4因素(明胶用量,PLGA用量,乳化温度,搅拌速度)3水平的正交试验(表2),对曲普瑞林微球的制备工艺进行了优化.表2曲普瑞林微球制备工艺优化L9(3)正交试验设计表曲普瑞林微球制备工艺优化实验结果见表3.根据均值大,工艺优的原则,A,B因素中均值2大,C,D因素中均值3大,因此,微球制备工艺以A2B2C3D3为优.2.2微球质量控制参照文献3,5.2.2.1载药量测定有机相和水相的制备取氯化钠约0.5g,置于250mL分液漏斗中,加水100mL溶解后,再加入二氯甲烷100mL,摇匀,放置过夜.分别收集有机相和水相,备用.测定方法:取醋酸曲普瑞林对照品适量,加水溶解并定量稀释成每1mL中约含0.05mg的溶液作为对照品溶液.取醋酸曲普瑞林微球适量,置5mL具塞离心管中,加人有机相及水相各2mL,漩涡剧烈振荡15rain,10000rpm离心15min,使两相分离,精密量取上层水相lmL,置10mL容量瓶中,流动相稀释至刻度,摇匀,得供试品溶液.高效液相色谱仪测定对照品和供试品溶液曲普瑞林浓度(方法详见2.2.4),计算载药量(表4).表3曲普瑞林微球制备工艺优化结果2.2.2释放度测定稀释液的制备:精密称取磷酸二氢钠4.6g,苯扎氯铵0.1g,加水至1000mL,摇匀,用lmol/L的氢氧化钠调pH至7.1,即得磷酸二氢钠一苯扎氯铵一水(4.6:0.1:1000)(w/w/V)混合溶液.测定方法:取醋酸曲普瑞林对照品适量,加水稀释成每1mL中含0.05mg的溶液作为对照品溶液.取醋酸曲普瑞林微球约10mg,置15mL具塞试管中,加入溶剂10mL,置于37恒温箱中,在4,24,48,72h分别取出0.5mL,0.22I.Lm滤膜过滤,得供试品溶液,并及时补充0.5mL稀释液.高效液相色谱仪测定对照品和供试品溶液曲普瑞林浓度(方法详见2.2.4).7,14,2l,28,35d时继续取样,测定累积释放率.释放度曲线见图1,曲普瑞林微球的28d累积释放率大于90%.2.2.3微球粒径分布采用湿法测定,即醋酸曲普瑞林微球均匀分散在蒸馏水中并以一定流速通过激光束,衍射光由检测器收集,将信号转换为粒度分布.中值粒径21.315txm,小于100m微球占99.5%,粒径基本符合正态分布.2.2.4含量测定制备有机相和水相取氯化钠约0.5g,置于250mL分液漏斗中,加水100mL溶解后,精密量取三氟醋酸0.1mL,再加入二氯甲烷100摇匀,作为供试品溶液.20L样品进样.色谱条件流动相:乙腈一0.05mol/L磷酸溶液(用三乙胺调pH至3.0)=75.5:24.5,流速为1.0mL/min,检测波长为210nm,柱温3O.以此方法测定三批样品(n=10)中曲普瑞林的含量,平均含量如下:第一批(98.960.45)%,第二批(99.83+0.22)%,第三批(101.05+0.42)%,各批次间含量无差异.3讨论随着生物技术的发展,大量生物大分子药物应用于临床,该类药物的生物活性强,剂量小,治疗指数高,已经成为临床上十分重要的一类药物.近年来此类药物制剂的研究取得了很大的进展,特别是用聚乳酸类生物可降解聚合物将药物包被成微球,通过肌注或皮下给药,使药物在体内缓慢释放已成为开发此类药物长效剂型的一个发展方向【3J.生物可降解聚合物是指一些能够在水,酶作用下降解的高分子材料.目前最常用的生物可降解聚合物有聚乳酸(ploylacticacid,PEA),聚乳酸一羟基乙酸(polylactic-co-glycolicacid,PLGA),聚丙交酯(ployLactide),聚丙交酯一乙交酯(polyLactideCOglycolide,PLCG),聚己内酯(PCL),聚羟丁酸等J.以PLGA为载体制备的长效微球注射剂是国外上市最早,开发最成功的缓释多肽微球,注射一次可持续释药一个月,避免的常规制剂长期频繁给药患者顺应性差,副作用大的缺点-6J.目前曲普瑞林普通制剂也存在稳定性差,口服难吸收,患者需频繁给药而顺应性差,副作用大的缺点.针对以上缺点,我们以PLGA为载体制备了醋酸曲普瑞林微球,并对其生产工艺进行了优化.我们的研究发现曲普瑞林微球制备影响因素较多,如明胶用量,PLGA用量,复乳化温度,搅拌速度等.经优化后的曲普瑞林微球载药量在6%9%之间,粒径小于100txm的占99.5%,大部分粒径在l050m,粒径基本符合正态分布,28d的累积释放率大于90%,符合临床使用要求.同时曲普瑞林微球制备过程中我们注意到:二氯甲烷极易挥发,操作时间长易导致实验过程受阻或中断,故操作要求熟练,迅速,准确;微球产品的无菌性和热原比较难控制,仅能通过把好原辅料购买的质量关及操作现场的维护来实现.参考文献】IGallaqhercJ,OliverRT,OramDH.eta1.Anewtreat?mentforell-dometrialcancerwithgonadotrophin-relea-singhormoneanalogueJ.BrJObstetGynaeco1.1991,98(10):1037-1041.2杨日丽,郭健新.睾酮放免测定法研究醋酸亮丙瑞林口服在大鼠体内的吸收J.中国医药导报,2008,5(21):3132.3瞿文,陈庆华,