（法医学专业论文）广西都安瑶族线粒体dna控制区及ystr多态性研究.pdf

法医 2 0 0 1级刘莹硕士论 文 第一部分 广西都安瑶族线拉体d n a控制区多态性研究食 研究生刘莹 导师陈国弟 到 教授 四川大学华西基袖医学 与法医学 院 四川成都 ( 6 1 0 0 4 1 ) 漪要 l 目 的 为 线 粒 体d n a ( m it o c h o n d r ia ) d n a , m t d n a ) 法 医 学 应 用提供群体遗传学数据， 扩大m t d n a 在个体识别中的应用范围。 方法 以 南方民族瑶族为研究对象，根据 m t d n a控制区及周围区域的序列设计 引物， 用p c r产物直接测序对 ， 0 5 份无关瑶族样本m t d n a控制区进 行了 测序， 通过s e q u e n c i n g a n a ly s is 3 .4和s e q / e d e 软 件分析比 对， 得到的序列结果，计算瑶族m t d n a单倍型的识别率，并应用m e g a 2 软件对数据做进化距离分析， 构建系统发育树。 结果 对样本的m t d n a 控制区序列进行了 统计分析，共检出 1 4 1个变异点， 平均变异数 ， 0 . 5 个，发现 3处点异质性。整个序列个体识别率为 0 .9 7 4 7 ，变异度为 0 .9 8 4 1 。除了h v i 、h vi i 及 h v i ii 外，发现瑶族 m t d n a控制区还存 在其它的相对高变区。瑶族 m t d n a控制区序列与其他民族相比，均存 在一定差异。 系统发育树显示，瑶族大体出现5 个聚类簇， 每个聚类簇 各有特点。结论瑶族 m t d n a控制区检出3 个点异质性，并发现存在 其他相对高变区。 群体遗传学数据提示瑶族与蒙古人种有较近的亲缘关 系。本研究为法医学及系统发育学研究提供了基础的群体遗传学数据。 关键词】线粒体d n a ， 控制区，多态性，瑶族， 法医学 * 本研究为2 0 0 1年北京市科学技术委员会 “ 线粒体 d n a测序技术在法医学中的 应用” 立项的 子课题。 第一部分广西都安璐族线粗体d n a 控制区多态性研究 s e q u e n c e v a r ia t i o n o f m it o c h o n d r ia l d n a c o n t r o l r e g i o n i ny a o e t h n i c g r o u p f r o m d u a n o f g u a n g x i g r a d u a t e y n g l i u t u t o r a s s o c i a t e p rof . gu o d i ch e n c o lle g e o f p r e - c l i n i c a l a n d f o r e n s ic m e d i c i n e s i c h u a n u n iv e rs it y c h e n g d u 6 1 0 0 4 1 , p r . c h in a a b s t r a c t o b j e c t iv e i n o r d e r t o o b t a in t h e d a t a o f s e q u e n c e v a r ia t io n o f y a o e t h n ic g r o u p m t d n a f r o m d u a n o f g u a n g x i a n d e x t e n d t h e a p p l ic a t io n s c o p e o f m t d n a i n id iv id u a l id e n t if ic a t io n . m e t h o d 1 0 5 u n r e la t e d i n d iv id u a ls o f y a o e t h n ic g r o u p w a s s e le c t e d a s t h e in v e s t ig a t e d o b j e c t . d ir e c t s e q u e n c in g o f d n a a m p lif ie d b y p c r w a s u s e d w it h t h e p r im e r s d e s ig n e d a c c o r d i n g t o t h e s e q u e n ce o f c o n t r o l r e g io n a n d t h e n e i g h b o r r e g io n . s e q u e n ces w e r e a n a ly z e d a n d c o m p a r e d b a s e o n s e q u e n c in g a n a ly s is 3 .4 a n d s e q / e d e s o f t w a r e . d p o f m t d n a in y a o e t h n ic g r o u p w a s c a lc u la t e d . m a g a 2 s o f tw a r e w a s a ls o e m p lo y e d t o a n a ly z e t h e g e n e t ic d is t a n ce b e t w e e n s a m p le s a n d c o n s t r u c t t h e p h y lo g e n e n t ic t r e e . r e s u l t 1 4 1 v a r ia t io n s it e w a s f o u n d . t h e m e a n n u m b e r o f b a s e p a i r w it h d iff e r e n ce w a s 1 0 . 5 . 3 s it e s o f p o in t h e t e r o p la s m y w e r e d e t e c t e d . t h e g e n e t ic d iv e r s 衍 o f p o p u la t io n s a m p le s a n d t h e d is c r im in a t i o n p o w e r w e r e 0 . 9 m t - 0 ( n t 1 6 0 3 0 - n t 1 6 4 8 1 ) : h 5 - ca t ggg gaa gc a ga t t t g- 3 l 5 . 下 丁 agc t a c c c c c a a g t gt - 3 ; 法医 2 0 0 1 级夕 莹 硕士论文 m t - 2 ( n t l 6 4 1 9 - n t l 6 5 6 9 - n t 2 7 0 ) : h 5 - c a a t a t c cc gc a c a a ga g t g- 3 l 5 一g g a a a g t g g c t g t g c a g a c a t - 3 ; m t - 3 ( n t l 3 2 - n t 4 4 4 ) : h 5 - c t t t g a t t c ct g c c t c a t c c - 3 l 5 - t t a g t t g gg g g g t g a c t g t t - 3 ; m t - 4 ( n t 3 7 4 - n t 6 7 2 ) : h 5 - c ac c a g c c t a a c c a g a t t t c- 3 l 5 ，一 ag a a a g g c t a g g a c c a a a c c t - 3 ; 2 . 2主要试剂: a m p l i t a q酶 ( p r o m e g a ) , d n t p ( p h a r m a c ia ) , wiz a r d p c r产物 纯 化 试 剂 盒( p r o m e g a ) ; a g r o s e ( p r o m e g a ) ; b ig d y e t m t e r m in a t e v 2 .0 试剂盒( a b i ) ; 丙 烯酞 胺( p r o m e g a ) ; n , n 一 二甲 双丙 烯酞 胺( p r o m e g a ) , 尿素 ( p r o m e g a ) ; t e m e d ( s e r v a ) ; 其余试剂均为国 产分析纯。 3 .主要仪器设备 d n a序列分析仪 a b i 3 7 7 ( a b i ，美国) :p e 9 6 0 0 d n a扩增仪 ( a b i ， 美国) ; 离心机 ( s ig m a ，德国) ; 超净z作台 ( e s c o ， 新加 坡) ; 小型潜水式凝胶电泳仪( a d v a n c e ， 日本) : 透射型紫外灯( b io - r e d , 美国) ;宝利来一次成像照相机 ( 尸 o la r o id ， 美国) ; 干热器 ( 日 e l lc o ，美 国) :微量可调加样器 ( g ills o n ，法国) 。 4 .分析软件 d a t a c o lle c t io n 软件 ( a b i ，美国) ;s e q u e n c e a n a ly s is 3 .4 软件 ( a b i ，美国) ; s e q / e d e t 匕 对软件 ( a b i ，美国) ，m e g a 2( 美国) 。 第一部分广西都安璐族线粗体d n a 控制区多态性研究 二、方法 ， .m t d n a提取 酚一 氯仿法( 见附录2 ) 提取d n a ， 千燥后溶于， 0 0 阔t e 缓冲液中， - 2 0 保存备用。 2 . m t d n a的 扩增 每个样本分别在5 个扩增管中同时扩增不同大小的5 个片段。 p c r 反应体系为 5 0 阔 ，反应混合物中包括以下成分:3 端及 5 端引物各 1 2 .5 p m o l , 1 0 x p c r缓冲液5 p 1 , 7 5 m m o l m g c l2 , 4 0 n m o l d n t p s , 2 u t a q d n a聚合酶及d n a模板约1 n g o 循环参数为:9 5 c 3 min 2 0 s ; 9 4 c 3 0 s , 5 5 v 3 0 s , 7 2 0c 1 mi n 3 0 s , 3 5 个循环;7 2 0c 7 mi n o 3 . p c r扩增产物的半定量 m t d n a p c r扩增产物通过2 %琼脂糖凝胶( 含。 .5 %e b ) 电泳分离， 判断 产物的 有 无， 并用已 知浓度d n a ( k 5 6 2 , 浓度为， o n g 扣 i ) 进行 产 物d n a的半定量。电 极间距离1 5 c m ，加样5 n i ( 4 p l 样本， 0 . 8 p l 6 x lo a d in g b u f f e r ) 。电 泳条件:1 0 o v , 1 0 -1 5 m i n ; 电 极缓冲 液1 x t a e . 凝胶成像系统记录结果。 4 . p c r扩增产物的纯化 ( 1 ) 将p c r 扩增产物移至， 5 m 1 离心管内， 加入1 0 0 u 1 纯化缓冲 液 和， ml 纯化树脂， 室温放置1 0 分钟， 期间振荡3 次， 每次振荡 间隔 ，分钟以上。 ( 2 )将wiz a r d 纯化柱装在3 m 1 注射器上， 拔除注射器栓， 移入d n a i 树脂混合物，装上栓子，缓慢推动，使树脂进入纯化柱。 法医2 0 0 1 级刘莹硕 士论 文 ( 3 ) 用2 m 1 8 0 % 异丙醇清洗纯化柱。 ( 4 ) 将 纯 化柱 移 至1 .5 m 1 的 离 心 管， 1 0 0 0 0 g 离 心2 分 钟， 彻底 清除 异丙醇。 ( 5 ) 将纯化柱 移至 新的， . 5 m 1 离 心管， 根 据琼脂 糖凝胶小电 泳荧光亮 度加2 0 p l - 4 0 p l 消 毒去 离 子水， 调整浓 度在1 0 0 - 2 0 0 n g / p l 之m- 室温放置5 分钟后，1 0 0 0 0 g 离心2 0 秒， 移去纯化柱。 ( 6 ) 纯化后的d n a进行半定 量 ( 方法同上) 。 4 或一 2 0 保存备用。 5 . m t d n a的测序 5 . 9 测序反应 反 应 体系为2 0 训 ， 反 应 混合 物中 含: t e r m in a t o r r e a d y r e a c t io n m ix 8 .o p l , 5 或3 端引 物3 .2 5 p m o l , p c r 扩增后产 物1 0 0 - 2 0 0 n g e 反应条件为: 9 6 c 1 0 s , 5 0 0c 5 s , 6 0 0c 4 m in , 2 5 个循环。 5 . 2测序反应后产物的 沉淀 将测序反应后产物移入 1 . 5 m 1 的离心管内， 加入无水乙醇 5 5 训和 2 m m的m g c 12 2 0 p l ， 振荡混匀， 室温静置1 0 分钟， 1 2 0 0 0 r p m离心1 6 分钟，弃上清，干燥备用。 5 . 3聚丙烯酞胺凝胶电泳分离产物 见附录 3 0 6 .序列分析 利 用s e q u e n c e a n a ly s is 3 .4 软 件分 析原 始图 象文 件， 使 用s e q / e d e 比对软件， 将分析后得到的样品序列结果与a n d e r s o n 序列进行比 较， 找出变异碱基1 3 . 1 9 7 统计计算 第一 部分广西都安璐族线粒体 d n a控制区多态性研究 按 照d p = 1 一 e f 2 ( f 为 单 倍 型 频 率) ， 变 异 度( g e n e t ic d iv e r s ity ) = n ( 1 一 e f 2 ) / ( n - 1 ) ( n 表 示 群 体 样 本 数) ， 标准 差s e = 2 e f - ( i : f fl / n ) 2 进行统计学计算12 0 1 8 .系统树的完成 采用n e ig h b o r j o in i n g m e t h o d ( n j ) 方法， 构建基于1 0 5 个瑶族个 体d n a 序 列的 系 统 进 化 树， 操作由m e g a 2 11 3 1 软 件 完成。 结果 一、 测序结果 1 . p c r扩增及产物的半定量 2 % 琼脂糖e b 凝胶证实， 0 5 份样本全部成功扩增，并进行半定量。 扩增产物必须经过纯化，以去除剩余的引物和 d n t p s以及其他可能影 响测序反应的因子。图 ， 一为扩增产物纯化前后 2 %琼脂糖凝胶电泳照 片。 图1 - 2 扩增产物纯化前后2 % 琼脂糖凝胶电 泳图 k为k 5 6 2 . 1 - - 6 道为未纯化的各段扩增产物，7 -1 2 道为纯化后产物，m孔为m a r k e r . 2 . a b i - 3 7 7 序列分析仪测序扫描结果 ( 见图1 -3 ) 法医 2 0 0 1级刘莹硕 士论文 参考文献: 1 . a n d e r s o n s , b a n k ie r a t , b a r r e l l b g , 以a l . s e q u e n c e a n d o r g a n iz a t io n o f t h e h u m a n m it o c h o n d r i a l g e n o m e . n a t u r e , 1 9 8 1 , 2 9 0 ( 5 8 0 6 ) : 4 5 7 - 6 5 . 2 . b a l l i n g e r s w, s h o f f n e r j m , h e d a y a e v , e t a l . m a t e rn a l ly t r a n s m itt e d d i a b e t e s a n d d e a f n e s s a s s o c ia t e d w it h a 1 0 .4 k b mit o c h o n d r ia l d n a d e le t io n . n a t g e n e t , 1 9 9 2 , 1 ( 1 ) : 1 1 - 5 . 3 . b a ll i n g e r s w, s h o f f n e r j m , g e b h a r t s , e t a l . m it o c h o n d r i a l d ia b e t e s r e v i s it e d n a t g e n e t , 1 9 9 4 , 7 ( 4 ) : 4 5 8 - 9 4 . l a m m in e n t , m a j a n d e r a , j u v o n e n v , e t a l . a m it o c h o n d h a l m u t a t io n a t n t 9 1 0 1 i n t h e a t p s y n t h a s e 6 g e n e a s s o c ia t e d w it h d e fi c i e n t o x i d a t iv e p h o s p h o ry la t io n i n a f a m i 扮w it h l e b e r h e r e d it a ry o 两c n e u r o r e t in o p a t h y . a m j h u m g e n e t , 1 9 9 5 , 5 6 ( 5 ) : 1 2 3 8 礴0 . 5 . k o b a y a s h i y , s h a r p e h , b r o w n n . s i n g l e - c e l l a n a ly s is o f in t e r cell u l a r h e t e r o p l a s m y o f rn t d n a i n l e b e r h e r e d it a ry o p t i c n e u r o p a t h y . a m j h u m g e n e t , 1 9 9 4 , 5 5 ( 1 ) : 2 0 6 - 9 . 6 . l e s t i e n n e p , n e ls o n j , r ie d e r e r p , 以a l . n o r m a l m i t o c h o n d r i a l g e n o m e i n b r a i n f r o m p a t ie n t s w it h p a r k i n s o n s d is e a s e a n d c o m p le x i d e f e c t . j n e u r o c h e m , 1 9 9 0 , 5 5 ( 5 ) : 1 8 1 0 - z 7 . d i m o n t e d a . m it o c h o n d r i a l d n a a n d p a r k i n s o n s d is e a s e . n e u r o lo g y , 1 9 9 1 , 4 1 ( 5 s u p p l 2 ) : 3 8 - 4 2 . 8 . g r e e n b e r g b d , n e w b o ld ie , s u g in o a . i n t r a s p e c ifi c n u c le o t id e s e q u e n c e v a r i a b il it y s u r r o u n d in g t h e o 内in o f r e p l ic a t i o n i n h u m a n m it o c h o n d r ia l d n a . g e n e t , 1 9 8 3 , 2 1 : 3 3 - 4 9 . 9 . c r e s p il l o m , l u q u e j a , p a r e d e s m , e t a l . m i t o c h o n d r i a l d n a s e q u e n c e s f o r 1 1 8 in d iv id u a ls f r o m n o r t h e a s t e rn s p a in . i n t j l e g a l m e d , 2 0 0 0 , 1 1 4 ( - 2 ) : 1 3 0 - 2 1 0 . p e r e i r a l . t h e s la v e t r a d e t o e u r o p e a n d b r a z i l f r o m t h e w e s t e n a n d e a s t e n a f r ic a c o a s t s a s r e g is t e r e d i n t h e m t d n a p o o l . p r o g r a m a n d a b s t r a c t s 1 9 i n t e r n a t i o n a l c o n g r e s s i s f g , 2 0 0 1 . 1 1 . c a r r a c c d o a , b a r w, l i n c o l n只以 a l . d n a c o mm i s s io n o f t h e i n t e rna t i o n a l s o c ie t y f o r f o r e n s ic g e n e t i c s : g u id e l in e s f o r m it o c h o n d r ia l d n a t y p i n g , f o r e n s ic s c i i n t , 2 0 0 0 , 1 1 0 : 7 9 - 8 5 . 第一部分广西都安瑶族线粒体d n a 控制区多态性研究 1 2 . t u lly g , b a r w, b r in k m a n n b , e t a l. c o n s id e r a t io n s b y e u r o p e a n d n a p r o f i l i n g ( e d n a p ) g r o u p o n t h e w o r k i n g p r a c t ices , n o m e n c la t u r e a n d i n t e r p r e t a t i o n o f m it o c h o n d r ia l d n a p r o f il e s . f o r e n s i c s c i i n t , 2 0 0 1 , 1 2 4 : 8 3 - 9 1 . 1 3 . wils o n m r , a l la r d m w, m o n s o n k , e t a l . r e c o m m e n d a t i o n s f o r c o n s is t e n t t r e a t m e n t o f le n g t h v a r i a n t s i n t h e h u m a n m it o c h o n d r ia l d n a c o n t r o l r e g i o n . f o r e n s i c s c i i n t , 2 0 0 2 , 1 2 9 : 3 5 - 4 2 . 1 4余跃生， 姚永刚， 孔庆鹏， 等. 贵州水族人群线粒体d n a序列多态分析一 遗传 学报， 2 0 0 1 , 2 8 ( 8 ) : 6 9 1 - 6 9 8 . 1 5袁志刚， 姚永刚， 马志雄， 等. i 一 西壮族人群线粒体d n a 序列遗传多态性分析. 遗传学报， 2 0 0 1 , 2 8 ( 2 ) : 9 5 - 1 0 2 . 1 6 一 李永念， 左丽， 文波， 等. 中国 布依族人的起源及迁移初探一一 来自y染色体 和线粒体的线索. 遗传学报， 2 0 0 2 , 2 9 ( 3 ) : 1 9 6 - 2 0 0 . 1 7钱亚屏， 褚嘉佑， 初正韬， 等. 应用线粒体d n a d -lo o p 区遗传多样性分析云 南4 个少数民 族的 遗传关系 . 遗传学报， 2 0 0 1 , 2 8 ( 4 ) : 2 9 1 - 3 0 0 . 1 8 . 唐晖， 刘雅诚， 马 万山 ， 等， 北京 汉族群体 线粒体d n a高变区的 多 态性. 中国 法医学杂志， 2 0 0 2 , 1 7( 1 ) :3 2 - 3 3 1 9 . s a la s a , r a s m u s s e n e m , l a r e u m 丫e t a l . f l u o r e s cen t s s c p o f o v e r l a p p i n g f r a g m e n t s ( f s s c p - o f ) : a h ig h ly s e n s it iv e m e t h o d f o r t h e s c r e e n i n g o f m it o c h o m d r ia l d n a v a r ia t io n . f o r e n s i c s c i i n t , 2 0 0 1 , 1 2 4 ( 2 - 3 ) : 9 7 - 1 0 3 . 2 0 . m n e i , , f t a j i m a . d n a p o ly m o r p h is m d e t e c t a b le b y r e s t r i c t i o n e n d o n u c le a s e s . ge n e t i c s , 1 9 8 1 , 9 7 : 1 4 5 - 6 3 2 1 瑶族简史编写组. 瑶族简史， 南宁: 广西人民出版社. 1 9 8 3 年 2 2张有隽 瑶族历史与文化 南 j : 厂 西人民出版社. 1 9 8 3 年. 2 3都安瑶族自治县志编纂委员会. 都安瑶族自治县志_ 南宁; i - 西人民出版社. 2 0 0 1 . 2 4 . k - j . 萨 姆布鲁克. d . w. 拉塞尔著. 黄 培堂等 译. 分子克隆 实 验 指南， 第三 版 北京二 科学出版社 2 0 0 2 . 6 9 9 . 2 5 . l u n d b e r g k s , s h o e m a k e r d d , a e t a m s m ww, e t a 一h ig h - f id e l it y a m p l if i c a t io n u s i n g a t h e r m o s t a b le d n a p o ly m e r a s e is o la t e d f r o m 尸 y roc o c c u s f u r i o s u s . ge n e , 1 9 9 1 , 1 0 8 : 1 - 6 . 法医2 0 0 1 级刘莹硕士论 文 2 6 . m a tt i l a p , k o r p e l a j , t e n k a n e n不e t a l . f id e l it y o f d n a s y n t h e s i s b y t h e t h e r m o c o c c u s f t o r a l is d n a p o ly m e r a s e - a n e x t r e m e ly h e a t s t a b le e n z y m e w it h p r o o f r e a d i n g a c t iv it y . n u c le ic a c id s r e s , 1 9 9 1 , 1 9 : 4 9 6 7 - 4 9 7 3 2 7 . s a n g e r f , n ic k le n s , c o u ls o n a r . d n a s e q u e n c in g w it h c h a in - t e r m in a t in g i n h i b it o r s . p r o c n a t l a c a d s c i u s a , 1 9 7 7 , 7 4 ( 1 2 ) : 5 4 6 3 - 7 . 2 8 . c a r r a c e d o a , a lc j a e d , d u p u y b , e t a l . r e p r o d u c ib i lit y o f m t d n a a n a ly s is b e t w e e n la b o r a t o r ie s : a r e p o r t o f t h e e u r o p e a n d n a p r o fi l i n g g r o u p ( e d n a p ) . f o r e n s i c s c i i n t , 1 9 9 8 , 9 7 : 1 6 5 - 1 7 0 . 2 9 . g a b r ie l m n , c a llo w a y c d , r e y n o ld s r l , e t a l . p o p u la t i o n v a r ia t io n o f h u m a n m it o c h o n d r i a l d n a h y p e rv a r ia b le r e g io n s i a n d 1 1 i n 1 0 5 c r o a t i a n in d iv id u a l d e m o n s t r a t e d b y i m m o b i l iz e d s e q u e n c e - s p e c if ic o l ig o n u c l e o t id e p r o b e a n a ly s is . c r o a t m e d j , 2 0 0 1 , 4 2 ( 3 ) : 3 2 8 - 3 5 . 3 0 . r o s s p l , l e e k , b e l g r a d e r只 d i s c r i m i n a ti o n o f s i n g le - n u c l e o t id e p o ly m o r p h i s m s i n h u ma n d n a u s i n g p e p t id e n u c le ic a c id p r o b e s d e t e c t e d b y m a l d i- t o f m a s s s p e c t r o m e t ry . a n a l c h e m , 1 9 9 7 , 6 9 ( 2 0 ) : 4 1 9 7 - 2 0 2 . 3 1 . v a n d e n b o s c h b j , d e c o o r f , s c h o lt e h r , e t a l . m u t a t i o n a n a ly s is o f t h e e n t i r e m i t o c h o n d r i a l g e n o m e u s i n g d e n a t u r i n g h ig h p e rf o r m a n c e l iq u id c h r o m a t o g r a p h y . n u c le ic a c id s r e s , 2 0 0 0 , 2 8 ( 2 0 ) : e 8 9 . 3 2 . v ig i la n t l , p e n n i n g t o n r , h a r p e n d i n g h , 以a l . m it o c h o n d r ia l d n a s e q u e n c e s i n s i n g le h a i r s f r o m a s o u t h e r n a f r i c a n p o p u la t io n . p r o c . n a t l . a c a d . s c i . u s a , 1 9 8 9 , 8 6 ( 2 3 ) : 9 3 5 0 - 5 4 3 3 . 马万山、唐晖、刘雅诚等 中国海南黎族群体 m t d n a控制区多态性. 中国法 医学杂志，2 0 0 3 , 1 8 ( 1 ) : 4 1 一 2 3 4唐晖著， 法医线粒体 d n a分型及中国不同民族多 态性研究t 博十论文】 ， 侯一 平教授指导. 3 5 . 美 m a s a t o c h i n e i, s u d h ir k u m a r 著，吕 宝忠等译 分子 进 化与 系统发育. 北 京: 高等教育出版社. 2 0 0 2 , 6 9 3 6曹显明 t . 克松. 贵州 8个民族 6种不对称行为特征的群体遗传学研究. 黔南 l i : 族医专学报. 2 0 0 2 , 1 5 ( 3 ) : 1 2 5 - 1 2 8 3 7 . 吴融四_ 瑶族体质形态的初步研究. 见: 中国人类学学会编， 中国八个民族体 质调杏报告昆明:昆明人民出版社 1 9 8 2 第一部分广西都安瑶族线拉体 d n a控制区多态性研究 吴立扑主编. 中国西南少数民 族皮纹学. 贵州: 贵州科技出 版社， 1 9 9 1 . k o y a m a h , iw a s a m , m a e n o y , 以a l , m it o c h o n d r ia l s e q u e n c e h a p lo t y p e i n noou 33 t h e j a p a n e s e p o p u la t i o n . f o r e n s i c s c i i n t , 2 0 0 2 , 1 2 5 : 9 3 - 9 6 . 4 0 . a n n e b a a s n e r , b u r k h a r d m a d e a . s e q u e n c e p o ly m o r p h is m o f t h e m it o c h o n d r ia l d n a c o n t r o l r e g i o n i n 1 0 0 g e r m a n c a u c a s ia n s . j f o r e n s ic s c i , 2 0 0 0 , 4 6 ( 6 ) : 1 3 4 3 4 1 . m o u n t a i n j l , h e b e rt j m , b h a t t a c h a r y y a s , e t a l . d e m o g r a p h ic h i s t o ry o f i n d i a a n d m t d n a - s e q u e n c e d iv e r s it y . a m . j . h u m. g e n e t , 1 9 9 6 , 5 6 : 9 7 9 - 9 9 2 4 2 . l u t z s , j o a c h i m h , h e iz m a n n wj , e t a l . m it o c h o n d r ia l h e t e r o p l a s m y a m o n g m a t e r n a l ly r e l a t e d i n d iv id u a ls . i n t j l e g a l m e d , 2 0 0 0 , 1 1 3 : 1 5 5 - 1 6 1 4 3 . t u ll y l a , p a r s o n s t j , s t e ig h n e r r j , e t a l . a s e n s it iv e . d e n a t u r i n g g r a d ie n t - g e l e le c t r o p h o r e s i s a s s a y r e v e a l s a h ig h f r e q u e n c y o f h e t e r o p la s m y in h y p e r v a r ia b le r e g i o n 1 o f t h e h u m a n m t d n a c o n t r o l r e g io n a m j h u m g e n e t , 2 0 0 0 , 6 7 ( 2 ) : 4 3 2 - 4 3 . 4 4 . h u h n e j , p f e iff e r h , b r i n k m a n n b . h e t e r o p l a s m i c s u b s t it u t i o n s i n t h e m it o c h o n d r ia l d n a c o n t r o l r e g io n i n m o t h e r a n d c h il d s a m p le s . i n t j l e g a l m e d , 1 9 9 9 , 1 1 2 ( 1 ) :2 7 - 3 0 . 4 5 . n ic k e r s o n d a , t o b e v o , t a y lo r s l . p o ly p h r e d : a u t o m a t i n g t h e d e t e c t io n a n d g e n o t y p i n g o f s in g l e n u c l e o t i d e s u b s t it u t io n s u s in g fl u o r e s c e n c e - b a s e d r e s e q u n c i n g . n u c le i c a c id s r e s , 1 9 9 7 , 2 5 : 2 7 4 5 - 5 1 4 6 . c a llo w a y c d , r e y n o ld s r l , h e r r in g l j r , e t a l . t h e f r e q u e n c y o f h e t e r o p l a s m y i n t h e h v l r e g i o n o f m t d n a d iff e r s a c r o s s t i s s u e ty p e s a n d in c r e a s e s w it h a g e . a m j h u m g e n e t , 2 0 0 0 , 6 6 ( 4 ) : 1 3 8 4 - 9 7 . 4 7 . s ig u r 6 a r d e tt i r s ig r d n , a g n a r h e l g a s in , j e ff r e y r . g u l c h e r . t h e m u t a t io n r a t e i n t h e h u m a n m t d n a c o n t r o l r e g io n . a m. j . h u m. g e n e t , 2 0 0 0 , 6 6 : 1 5 9 9 - 1 6 0 9 4 8 . b e n d a l l k e , m a c a u l a y v a , s y k e s b c . v a r i a b l e le v e ls o f a h e t e r o p la s m i c p o i n t m u t a t io n i n i n d iv id u a l h a ir r o o t s . a m j h u m g e n e t , 1 9 9 7 , 6 1 ( 6 ) 1 3 0 3 - 8 4 9 . iv a n o v p l , wa d h a m s m j , r o b y r k , e t a l . m i t o c h o n d r i a l d n a s e q u e n c e h e t e r o p l a s m y i n t h e g r a n d d u k e o f r u s s ia g e o r g ij r o m a n o v e s t a b lis h e s t h e 一3 a- 法 医 2 0 0 1 级 刘莹硕 士论文 a u t h e n t ic it y o f t h e r e m a in s o f t s a r n ic h o la s n a t g e n e t 1 9 9 6 , 1 2 ( 4 ) : 4 1 7 - 2