CEB代谢产物对Ｔ淋巴细胞的激活作用.doc

CEB代谢产物对淋巴细胞的激活作用作者：范纯武,聂小梅单位：100073 北京,北京电力总医院【摘要】目的探讨内生菌（CEB）代谢产物提高免疫功能的生物效应。方法取CEB纯培养代谢产物用小白鼠进行体内试验，并设培养基、免疫抑制和生理盐水为对照。取小鼠血涂片，进行淋巴细胞酸性酯酶染色，分别检测总淋巴细胞、酸性酯酶阳性大颗粒及小颗粒淋巴细胞，进行统计学处理。结果CEB代谢产物组总淋巴细胞、大颗粒、小颗粒淋巴细胞分别为54.80%、38.20%、16.90%；显著高于对照组（41.90%、27.80%、14.10%，P<0.010.05）。结论支持CEB培养代谢产物作为生物免疫激活剂，能促进淋巴细胞增值，提高免疫功能的理论。【关键词】 内生菌 T淋巴细胞 酸性酯酶 有丝分裂因子中国科学院武汉植物研究所张政铨、聂开印两位教授在世界上首次发现单子叶植物百合组织中与其互利共生的内生菌（Cell Endophyte Bacteria ）1，其代谢产物富含天然维生素、天然维生素、维生素、多糖、谷胱甘肽、类SOD及生物碱等主要抗氧化物活性成分2。这一重大发现引起了国内外学者的广泛关注。为了弄清它们对淋巴细胞的激活作用以及发挥这种作用的内在联系，我们设计并进行以下研究，企图探讨CEB代谢产物作为一种免疫增强剂的可能性，现将研究方法与结果整理报告如下。 1材料与方法 1.1实验材料CEB代谢产物：系从CEB纯培养提取，由中国科学院武汉植物研究所内生菌研究室提供。内生菌生长液体培养基对照（以下简称培养基）：提供单位同上。环磷酰胺：200mg/ml。实验动物：昆明小白鼠，一级实验动物。 1.2实验方法 1.2.1对小鼠细胞激活作用的观察取2024 g小鼠40只，雄雌廉用，随机分成4组：1组为内生菌0.2ml/只；2组为培养基0.2ml/只；3组为环磷酰胺10mg/kg；4组为生理盐水0.2ml/只，各组均为每日腹腔注射1次,共7次,第8日摘眼球放血，涂片、干燥进行细胞酸性醋酸酯酶染色3（染色育液：将4%付品红加入4%亚硝酸钠及9倍体积的1/15 M PBS,pH 7.6混匀,再加入α醋酸奈酯，pH 5.2混匀备用），育染3h后取出流水冲洗，干燥后甲基绿染色1min。酸性醋酸酯酶染色阳性淋巴细胞为淋巴细胞；并在油镜下计数紫红色大颗粒及小颗粒淋巴细胞，分别记录百分率。 1.2.2统计学处理将资料分类整理后录入Excel表格进行统计。计数资料进行χ2检验，计量资料进行t检验。以<0.05为差异有显著性。 2结果 CEB培养的代谢产物注射小鼠后，刺激小鼠的免疫系统致总淋巴细胞显著增高，与生理盐水对照组比较，差异有非常显著性（P<0.01）；培养基对照组未见淋巴细胞总数增多（P>0.05），可见总淋细胞的激活与培养基无关。第三组为环磷酰胺即免疫抑制组，淋巴细胞明显低于生理盐水对照组（P<0.05），提示本组实验设计灵敏可靠，见表1。表1对小鼠总淋巴细胞活化的影响注：表中统计学处理为各组与第四组比较一般认为在淋巴细胞酯酶染色中，大颗粒阳性细胞为辅助型淋巴细胞，具有辅助淋巴细胞及抑制细胞的功能。在小鼠血片中表现为细胞增生活跃，数量明显增加，颗粒粗大；第二组（培养基组）与生理盐水对照组其酯酶阳性大颗粒细胞数量基本一致（P>0.05）；第三组（环磷酰胺）则明显被抑制（P<0.01）。见表2。 表2对小鼠酸性醋酸酯酶阳性大颗粒型细胞的影响注：表中统计学处理为各组与第四组比较一般认为酸性醋酸酯酶染色阳性中小颗粒型细胞为具有免疫抑制功能的细胞亚群。本研究（表3）证明，CEB代谢产物不仅能刺激辅助型细胞活化（表2），亦能使抑制型细胞活化，与对照组比较差异有显著性（P<0.05），提示内生菌作为一种生物免疫刺激剂或细胞激活剂的作用，可能为非特异性或非选择性（详见表3）。表3对小鼠酸性醋酸酯酶阳性小颗粒型细胞的影响注：表中统计学处理为各组与第四组比较 3讨论 S淋巴细胞是活动静止的细胞，但是当其受到适当刺激而活化时，它将发生急剧的改变。这些改变常按一个特征性的时间顺序进行，所以这些变化中的任何一个环节都能作为检测活化的指标。通常应用的试验是测定：（1）淋巴因子的产生；（2）淋巴细胞的增殖；（3）抗体的合成；（4）细胞毒性4。本研究采用的是检测淋巴细胞增殖试验。 淋巴细胞依靠特殊的表面受体首先接触免疫激活剂（抗原），这些受体是按照与抗原特异地相互作用而设计的。当抗原结合到特殊的受体即导致免疫活性细胞的活化，并以最大的效能和强度去执行免疫效应功能。 在体内或体外把抗原引入到淋巴细胞群中，将引起能识别抗原的那些细胞克隆活化。由抗原诱导的活化是非常特异的，一个特定的抗原只能活化随机的淋巴细胞群体中的一小部分。现已发现大多数抗原只能活化不到1%的随机的、未致敏的淋巴细胞4。很显然，内生菌代谢产物所致的淋巴细胞活化不属于抗原类。 还有一类物质能活化淋巴细胞，那就是致有丝分裂因子。致有丝分裂因子不像抗原那样只对少数淋巴细胞（特异性的）起活化作用，而是具有对很多种动物包括人在内的高百分比的淋巴细胞起激活作用。大多数致有丝分裂因子来源于植物或微生物4。因此，本实验研究的结果支持CEB培养代谢产物作为生物免疫激活剂，能促进淋巴细胞增值，提高免疫功能的理论。【参考文献】1新华社.我发现单子叶植物细胞“内生菌”.北京：人民日报，1986，3：16.2美国博思维科实验室，给武汉德润生物技术有限公司的测试报告，Testing perfomed by:T.Zhang,Approved by:Boxin Ou,Ph.D.B-6904/12-1-07 Hpji.3杨景山.医学细胞化学与细胞生物技术.北京：北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，1990，47-52.4M