不同产地茯苓中茯苓酸含量的比较研究.doc

不同产地茯苓中茯苓酸含量的比较研究作者：赵英博,徐斌,昝俊峰,苏玮,王克勤,刘焱单位：1.湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室,湖北 武汉 430065；2.湖北省中医药研究院,湖北 武汉 430074【摘要】 目的 建立茯苓中茯苓酸含量的测定方法,比较9个不同产地茯苓中茯苓酸的含量,为评价不同产地茯苓的品质提供参考依据。方法 采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),Kromasil 100-5 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温30 ,流动相为乙腈-0.4%乙酸(8020),流速1.0 mL/min,检测波长242 nm。结果 茯苓酸在0.482.40 μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,r0.999 7,平均回收率99.96%,RSD1.85%。9个产地茯苓中茯苓酸的含量有所差异。结论 该方法简便、专属、稳定,可用于茯苓药材中茯苓酸的含量测定。 【关键词】 茯苓；茯苓酸；反相高效液相色谱法；含量测定 Study on the Content Comparison of Pachymic Acid in Poria cocos from Different AreasZHAO Ying-bo, XU Bin, ZAN Jun-feng, et alKey Laboratory of TCM Resource and Compound Prescription, Ministry of Education, Hubei College of TCM, Wuhan 430065, China Abstract：Objective To establish a method for determining the content of Pachymic acid in Poria cocos, and compare the content of Pachymic acid of Poria cocos from nine different areas, in order to provide a basis to evaluate the quality of Poria cocos from different areas. Methods RP-HPLC method was used on Kromasil 100-5 C18 column (4.6 mm×200 mm, 5 μm), with acetonitrile-0.4% ethanoic acid (8020) as mobile phase, flow rate of 1.0 mL/min, column temperature at 30 , and detection wavelength at 242 nm. Results Pachymic acid showed a fine linear relationship with the peak areas between 0.482.40 μg (r0.999 7). The average recovery was 99.96% with RSD1.85%. There was a difference in the content of Pachymic acid in Poria cocos from nine areas. Conclusion The method is proved to be convinient, stable, and feasible for quality assessment of Pachymic acid which is the main effective content in Poria cocos. Key words：Poria cocos；Pachymic acid；RP-HPLC；content determination 茯苓为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核,具有利水消肿、渗湿、健脾、宁心的功效,为我国常用中药,是多种方药及中成药的原料,有“十药九茯苓”之说。以茯苓为原料配伍的中成药约有300多种1。茯苓主要含多糖、三萜酸类等化学成分,其中茯苓酸是其主要有效成分之一。2005年版中华人民共和国药典(一部)未收载茯苓的含量测定项。本试验采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对茯苓中茯苓酸进行了含量分析,建立了简便快捷、准确可靠的含量测定方法,进一步完善了茯苓药材的质量控制标准。1 仪器与试药 Agilent1100液相色谱仪,紫外检测器,Agilent色谱工作站；KQ3200DE型超声波清洗仪；sartonus型电子天平(十万分之一)。茯苓酸对照品为本实验室自制,经面积归一化法测定后确认其纯度大于98%；茯苓药材由本课题组分别采自湖南、河南、四川、浙江、贵州、安徽、湖北、广州、福建9个地区,共9批,经湖北省中医药研究院王克勤教授鉴定为多孔菌科真菌茯苓。乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。2 方法及结果2.1 色谱条件 参考文献2方法。色谱柱：Kromasil 100-5 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；柱温：30 ；流动相：乙腈-0.4%乙酸(8020)；流速为1.0 mL/min；检测波长：242 nm。在上述色谱条件下能达到基线分离,HPLC色谱图见图1。2.2 对照品溶液的制备 精密称取茯苓酸对照品2.40 mg,置于10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,得0.240 mg/mL的茯苓酸对照品溶液。2.3 供试品溶液的制备 精密称取茯苓粗粉(过60目筛)约1.0 g,置于50 mL具塞锥型瓶中,加甲醇30 mL,加塞称定,浸泡30 min,超声90 min,途中及结束时用甲醇补足减失的重量,冷却,过滤；用甲醇洗涤滤渣,洗液合并于滤液中,置蒸发皿中水浴蒸干,残留物用甲醇定容至10 mL容量瓶中,即得。2.4 线性关系考察 分别精密吸取茯苓酸对照品溶液2、4、6、8、10 μL,注入液相色谱仪中,测定其峰面积值。以对照品进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,得回归方程：Y202.99X17.185(r0.999 7),表明茯苓酸在0.482.40 μg范围内呈良好线性关系。2.5 精密度试验 精密吸取同一批样品溶液10 μL,重复进样6 次,测定茯苓酸峰面积积分值,结果RSD0.50%(n6),表明仪器精密度良好。2.6 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液,分别于0、1、2、4、8、24 h各进样10 μL,测定茯苓酸峰面积积分值,RSD1.20%(n6)。表明供试品溶液在24 h内稳定。2.7 重复性试验 精密称定同一批茯苓粉末1.0 g,共6份,按“2.3”项下方法操作,各精密量取10 μL进样,测定茯苓酸含量,RSD1.02%,表明该法重复性好。2.8 加样回收率试验精密称取已知含量的样品0.5 g,共6份,分别加入一定量的茯苓酸对照品,按“2.3”项下方法制备并测定含量,RSD1.85%(n6),结果见表1。表1 加样回收试验结果（略）2.9 样品测定 取不同产地茯苓粗粉,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,用0.45 μm微孔滤膜过滤,滤液密封备用。分别精密吸取各供试品溶液10 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,并计算样品溶液中茯苓酸的含量。结果显示,四川西昌和湖北罗田产茯苓中茯苓酸的含量明显高于其他产地,结果见表2。表2 各产地茯苓中茯苓酸的含量测定结果（略）3 讨论 经反复试验,建立了茯苓药材主要有效成分茯苓酸的含量测定方法,该方法重复性好,可靠性强,完善了2005年版中华人民共和国药典(一部)収载茯苓药材的质量标准,为再版药典补充茯苓药材质量标准“含量测定”内容提供了依据。这对于进一步有效控制茯苓药材的质量具有重要意义。 9个产地所产茯苓中茯苓酸的含量测定表明,不同产地茯苓中茯苓酸含量有较大差异,四川西昌和湖北罗田产茯苓中茯苓酸的含量明显高于其他产地,表明其质量品质较优。这可能与繁殖菌种和生态环境有关