不同产地黄精中多糖含量的比较.doc

不同产地黄精中多糖含量的比较【摘要】目的比较不同产地黄精（Polygonatum sibiricum）中多糖的含量。方法改进的硫酸苯酚比色法。结果以葡萄糖计，泰山生黄精、安徽生黄精、浙江生黄精、泰山熟黄精、浙江熟黄精中多糖含量分别为12.56%、9.92%、8.54%、7.36%、2.33%。结论不同产地黄精中多糖含量差异明显，其中以泰山生黄精多糖含量为最高；炮制黄精多糖含量低于生黄精。 【关键词】 黄精；多糖;含量 Comparison of polysaccharide in Polygonatum sibiricum from different placesWANG Xiaodan1, TIAN Fang2 , SHI Guiyun2 , HAO Jifu1, LI Tongde1 (1. Dept. of Pharmacology, Taishan Medical College, Taian 271000, China; 2. Affiliated Hospital of Taishan Medical College, Taian 271000, China) Abstract:Objective: To compare the content of polysaccharide in Polygonatum sibiricum derived from different places. Methods: Modified phenolsulfutic acid method was used. Results: The content of polysaccharide in raw Polygonatum sibiricum from Mountain Tai was12.56%，raw Polygonatum sibiricum from Anhui was 9.92%，raw Polygonatum sibiricum from Zhejiang were 8.54%，Polygonatum sibiricum after processing from Mountain Tai was 7.36%，Polygonatum sibiricum after processing from Zhejiang was 2.33%. Conclusion: The contents of polysaccharide in Polygonatum sibiricum from different places are significantly different, and the one of raw Polygonatum sibiricum from Mountain Tai is the highest. Key words:polygonatum sibiricum; polysaccharide; contain 黄精（Polygonatum sibiricum Red.）为百合科多年生草本植物，别名鸡头黄精、鸡头根、黄鸡菜，常生长在山地林下，灌丛或山坡半阴处。黄精可食部分是地下横生的肉质根茎，具有补中益气、滋润心肺、强壮筋骨等作用，久服可以延年益寿，为常用传统中药之一1。本草纲目记载：黄精补诸虚，填精髓，可使五脏调和，肌肉充盛，骨髓坚强，其力倍增，多年不老，颜色鲜明，发白更黑，齿落更生。药理研究表明，黄精具有抗菌、降压、降血糖及防止动脉粥样硬化等作用2。近年来研究还证明黄精多糖具有抗病毒及免疫激发作用34，说明多糖是黄精的主要活性成分之一。黄精药用资源丰富，分布较广，为评价不同产地黄精的质量，强调道地药材的开发和利用, 重视中药产地与质量的关系, 本文采用改良的苯酚硫酸比色法测定不同产地黄精中多糖的含量5，为黄精的合理应用提供依据。 1 试剂与仪器： 1.1 试剂 黄精以及炮制黄精，分别产自于泰山，安徽，浙江等地，标本经鉴定保存于泰山医学院药学院药学综合实验室；苯酚、浓硫酸、无水乙醇、丙酮及乙醚均为分析纯。 1.2 仪器 S54紫外可见分光光度计，上海棱光科技有限公司。 2 方法与结果： 2.1 苯酚溶液的制备 取苯酚20.0 g，加铝片0.1 g与NaHCO3 0.05 g，干馏，收集182 馏分。称取此馏分5.0 g，加蒸馏水定容至100 ml棕色容量瓶中摇匀备用。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取105 干燥至恒重的葡萄糖标准品85.0 mg，置100 ml容量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得标准贮备液。 2.3 样品溶液的制备 分别称取60 干燥至恒重的泰山生黄精、安徽生黄精、浙江生黄精、泰山熟黄精、浙江熟黄精等各10.0 g，加100 ml蒸馏水煮沸提取3次，滤过，合并滤液，减压浓缩至20ml，加1% 活性炭脱色2次，抽滤，滤液加入95% 乙醇，使滤液含醇量达80%，静置，离心（5000 rpm）30 min，将沉淀依次用95% 乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，转移沉淀并定容至50ml容量瓶中，取0.5 ml稀释至100 ml, 得样品溶液。 2.4 最大吸收波长的选择 精密移取上述葡萄糖标准溶液及样品溶液各1 ml， 分别置于具塞刻度试管中，准确加入1 ml苯酚溶液，摇匀，然后迅速精密滴加浓H2SO4 5 ml，以涡漩混合仪快速混匀，静置5 min后于沸水浴中加热15 min，取出后迅速冷却至室温；另以蒸馏水1 ml按照上述操作方法加入苯酚溶液和浓H2SO4，以此溶液作为空白对照，在波长400800 nm扫描，样品溶液和对照品溶液均在490 nm处有最大吸收。如图1所示。 图1 最大波长的选择 2.5 标准曲线的制备 分别精密移取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml于10 ml具塞刻度试管中，依次加蒸馏水使最终体积为1.0 ml，按2.4项下操作方法在490 nm处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，葡萄糖浓度C为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=0.0121C0.0048（r=0.9991） 2.6 精密度试验 取样品溶液（泰山生黄精）0.2 ml于10 ml具塞刻度试管中，按2.4项下操作方法在490 nm处测定吸光度，计算，得泰山产黄精中多糖平均含量为12.56%，RSD=0.52% (n=5)，结果表明仪器的精密度良好。 2.7 重现性试验 分别吸取对照品溶液0.5 ml(5份)，置10 ml具塞刻度试管中, 按照2.4项下操作方法，测得吸光度分别为0.5958、0.5956、0.5951、0.5962和0.6004，RSD=2.16% (n =5)，结果表明重现性良好。 2.8 稳定性实验 取样品溶液（泰山生黄精）0.2 ml，按照2.4项下操作方法, 分别在0.5 h，1 h，1.5 h，2 h，2.5 h，3 h测定其吸光度，结果如表1所示，表明样品在室温下3 h内能保持较好的稳定性。表1 稳定性实验 2.9 回收率测定 取样品溶液(泰山生黄精)适量，分别加入同量的对照品溶液，按2.4 项下操作, 在490 nm 处测定吸收度，计算多糖含量，测得加样回收率为98. 6%。 2.10 样品测定 分别取样品溶液各0.2 ml，按2.4项下操作方法在490 nm处测定吸光度，结果见表2。 表2 样品分析结果 3 讨 论 本实验结果表明，泰山黄精生药样品中黄精多糖含量比其他两个产地的含量高。以水提乙醇沉淀法获取黄精多糖，用改进的硫酸苯酚比色法测定其含量，方法简便易行，结果准确，精密度好。对黄精的炮制研究表明，生品黄精经炮制后其多糖含量明显下降，可能是由于大的根茎经炮制过程不断反复的熏蒸，使其部分多糖和低聚糖水解转化为单糖，可溶性单糖部分流失，黄精多糖总量减少的缘故。本次实验不足之处是由于所获得的黄精样品较少，不能进一步比较其他产区的黄精多糖含量。【参考文献】 1黄芳，陈桃林，蒙义文,等. 黄精多糖对老龄大鼠记忆获得和记忆再现的影响J，应用与环境生物学报，1999，5（1）：3639.2王筠默,王恒芬,许长照. 中药研究与文献检索.上海:上海远东出版社，1994:797.3曾庆华.黄精多糖制剂治疗家兔单纯疱疹病毒性角膜炎的实验观察J.