免疫学练习题7.pdf

免疫细胞的分离与检测免疫细胞的分离与检测 一 选择题一 选择题 一 单项选择题 A 一 单项选择题 A 型题 型题 1 外周血中的单个核细胞主要是指 A 淋巴细胞 B 嗜酸性粒细胞 C 单核细胞 淋巴细胞 D 单核细胞 E 中性粒细胞 2 分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为 A 1 030 B 1 035 C 1 092 D 1 020 E 1 077 3 用 Ficoll hypaque 分层液分离 PBMC 分离的 PBMC 层位于试管的 A 血浆层之上 B 血浆层之中 C 血浆层与分层液之间 D 分层液之中 E 试管底部 4 用玻璃纤维或葡聚糖凝胶 Sephadex G10 柱分离细胞时 从柱上洗脱下的细胞主要是 A 粒细胞 B 淋巴细胞 C 单核细胞 D T 细胞 E B 细胞 5 能与 SRBC 结合形成 E 花环的细胞主要是 A T 细胞 B B 细胞 C 单核细胞 D 粒细胞 E 血小板 6 用小鼠抗人 CD3 单克隆抗体检测 T 细胞 其结果代表的是 A T 细胞总数 B Th 细胞数 C Ts 细胞数 D CD4 细胞数 E CD8 细胞数 7 用尼龙棉柱分离细胞时 不易黏附尼龙棉纤维而被洗脱的细胞是 A 粒细胞 B B 细胞 C 单核细胞 D T 细胞 E 血小板 8 表示淋巴细胞的活力常用 A 活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比 B 活细胞浓度 C 淋巴细胞浓度 D 活细胞和总细胞的比值 E T 细胞和 B 细胞的比例 9 用腹腔渗出法可从动物的腹腔渗出液中分离出 A 血小板 B B 细胞 C 单核细胞 D T 细胞 E 巨噬细胞 10 活细胞经台盼蓝染色后呈 A 蓝色 B 棕色 C 红色 D 不着色 E 天青色 11 荧光标记法计数外周血 B 淋巴细胞 检测的特有的表面标志是 A CD19 B CD20 C 补体受体 D SmIg E FcR 12 NK 细胞特有的表面抗原是 A CD2 B CD16 C 无特异的表面抗原 D CD23 E CD56 13 仅能使 T 细胞发生淋巴母细胞转化的因子是 A PHA B PWM C LPS D ConA E EBV 14 能使 B 细胞和 T 细胞发生淋巴母细胞转化的因子是 A PHA B PWM C LPS D SPA E EBV 15 检查体液免疫功能最常用的方法是 A 血清免疫球蛋白定量测定 B 溶血空斑试验 C B 淋巴细胞计数 D 淋巴母细胞转化试验 E SmIgG 测定 16 溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能 A T 细胞 B B 细胞 C 中性细胞 D 吞噬细胞 E NK 细胞 17 测定 T 淋巴细胞功能的体内试验是 A 锡克试验 B 狄克试验 C 结核菌素试验 D 天然血型抗体滴度 E 血清 IgG 测定 18 正常人外周血 T 淋巴细胞转化率为 A 40 B 40 50 C 60 80 D 80 E 90 19 常用检测细胞毒效应的方法是 A 3 H TdR 掺入法 B 125 I释放法 C 51 Cr 释放法 D 形态学检测法 E CD8 检测法 20 包被有抗 Ig 抗体的亲和板 其吸附的是 A T 细胞 B B 细胞 C NK 细胞 D NKT 细胞 E 吞噬细胞 21 Ficoll hypaque 液分离淋巴细胞是一种 A 不连续密度梯度离心法 B 连续密度梯度离心法 C 亲和层析法 D 离子交换层析法 E 自然沉降法 22 Ficoll hypaque 淋巴细胞分离液的主要成分是 A 聚蔗糖 B 泛影葡胺 C 聚乙二醇 D 聚蔗糖 泛影葡胺 E 聚蔗糖 聚乙二醇 23 Percoll 分离液的主要成分是 A 聚蔗糖 B 泛影葡胺 C 聚乙二醇 D 聚乙烯吡咯烷酮 E 经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒 24 检测中性粒细胞杀菌功能的方法是 A NBT 还原试验 B 白细胞计数 C 溶血空斑试验 D 淋巴母细胞转化试验 E 补体介导的细胞毒试验 25 MTT 比色法检测 IL 2 活性 下列哪项是错误的 A 需要 IL 2 依赖细胞株 B 增殖细胞具有吸收 MTT 的能力 C 颜色的深浅代表细胞代谢活性的强弱 D 可反映 B 细胞的功能 E 可反映 T 细胞的功能 二 多项选择题 二 多项选择题 X 型题型题 1 淋巴细胞分离液要求符合的条件有 A 对细胞无毒 B 高渗 C 不溶于血液 D 无色 E 有合适的比重 2 与 T 细胞计数有关的表面抗原是 A CD2 B CD3 C CD4 D CD8 E CD19 3 与 B 细胞计数有关的表面标志是 A SmIg B CD19 C CD20 D CD21 E CD2 4 符合淋巴母细胞转化的形态学特征有 A 细胞体积变小 B 核仁明显 核染质疏松 C 可见有丝分裂 D 胞浆极少 呈天青色 E 胞内可见空泡 5 用酶联免疫斑点试验检测 B 细胞功能的优点有 A 稳定 特异 B 可检测抗体分泌细胞 C 可检测抗体的分泌量 D 可同时进行 B 细胞计数 E 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体的分泌 6 细胞免疫功能测定包括以下哪些 A T 细胞计数 B B 细胞计数 C T 细胞功能测定 D Tc 细胞效应测定 E 细胞因子测定 7 检测淋巴细胞亚群常用的方法有 A 免疫荧光法 B 流式细胞仪测定 C 酶免疫组化法 D 放射免疫法 E 免疫金染色法 8 细胞免疫功能体内试验方法有 A 细胞毒试验 B 混合淋巴细胞反应 C 皮肤试验 D 淋巴细胞增殖试验 E 接触性过敏试验 9 T 细胞增殖试验常用的检测方法有 A 流式细胞仪法 B 形态学方法 C 51 Cr 释放法 D MTT 检测法 E 3 H TdR 掺入法 10 检测吞噬细胞功能的方法有 A 吞噬试验 B 杀菌试验 C NBT 还原试验 D 化学发光测定法 E 趋化功能测定法 11 淋巴细胞亚群的分离方法有 A E 花环分离法 B 尼龙棉柱分离法 C 亲和板结合分离法 D 免疫磁珠分离法 E 超速离心分离法 12 T 细胞数量检测包括 A T 细胞增殖试验 B 间接荧光免疫法 C 酶免疫组织化学法 D 微量细胞毒试验 E 花环技术 13 检测 T 细胞数量的花环试验有 A 酵毌菌花环试验 B 补体 C3b 花环试验 C E 花环试验 D 葡萄球菌花环法 E 抗体致敏细胞花环法 14 B 细胞表面具有 A mIg B CD 抗原 C Fc 受体 D 补体受体 E EB 病毒受体 15 B 细胞数量检测的方法包括 A mIg 的检测法 B CD 抗原检测法 C Fc 受体检测法 D 补体受体检测法 E 小鼠红细胞受体检测法 16 B 淋巴细胞功能的测定方法有 A B 细胞增殖试验 B 溶血空斑试验 C 酶联免疫斑点法 D 体内测定法 E 形态学检查法 17 中性粒细胞吞噬和杀菌功能的测定方法 A 形态学检查法 B 显微镜检查法 C 溶菌法 D NBT 还原试验 E 化学发光测定法 18 巨噬细胞功能的检测方法包括 A 炭粒廓清试验 B 吞噬功能检测 C 巨噬细胞溶酶体酶测定 D 细胞毒作用测定 E 巨噬细胞促凝血活性测定 二 填空题二 填空题 1 PBMC 包括 和 2 在反相溶血空斑试验中 每一个空斑代表一个 3 B 细胞表面特异的标志有 4 常用的测定淋巴细胞活力的方法是 5 淋巴细胞转化情况的判定方法有 和 6 淋巴细胞转化试验应用的同位素是 细胞毒试验应用的同位素是 7 分离外周血白细胞常用的方法是 和 8 去除白细胞悬液中残留红细胞的常用方法有 和 9 去除单个核细胞悬液中单核细胞的常用方法有 和 10 检测 T 细胞数量的花环技术包括 和 检测 B 细胞数量的花环技 术主要有 和 三 名词解释三 名词解释 1 外周血单个核细胞 peripheral blood mononuclear cell PBMC 2 E 花环试验 erythrocyte rosette test 3 淋巴母细胞转化试验 lymphoblast transformation assay 4 溶血空斑试验 hemolytic plaque assay 5 四唑氮蓝还原试验 nitroblue terazolium recovery assay NBT 还原试验 四 问答题四 问答题 1 简述 T 淋巴细胞转化的试验原理和镜下淋巴细胞转化形态学特征 2 简述 Ficoll hypaque 分离液分离 PBMC 的原理 步骤和注意事项 3 叙述 T 细胞介导的细胞毒试验的原理 意义和方法分类 4 测定吞噬细胞功能有哪些常用方法 参考答案与题解 参考答案与题解 一 选择题 一 选择题 一 单项选择题 一 单项选择题 A型题 型题 1 C 2 E 3 C 4 B 5 A 6 A 7 D 8 A 9 E 10 D 11 D 12 C 13 A 14 B 15 A 16 B 17 C 18 C 19 C 20 B 21 A 22 D 23 E 24 A 25 D 二 多项选择题 二 多项选择题 X 型题型题 1 ACDE 2 ABCD 3 ABCD 4 BCE 5 ABCDE 6 ACDE 7 ABCE 8 CE 9 BDE 10 ABCDE 11 ABCD 12 BCDE 13 CDE 14 ABCDE 15 ABCDE 16 ABCD 17 BCDE 18 ABCDE 二 填空题二 填空题 1 淋巴细胞 单核细胞 2 分泌 Ig 的细胞 3 SmIg 4 台盼蓝染色法 5 形态学方法 3 H TdR 掺入法 MTT 检测法 6 3 H 51 Cr 7 自然沉降法 聚合物加速沉降法 8 无菌蒸馏水低渗裂解法 0 83 氯化铵处理法 9 粘附去除法 羰基铁粉吞噬去除法 10 E 花环试验 葡萄球菌花环法 抗体致敏红细胞花环法 EA花环试验 EAC 花环试验 三 名词解释三 名词解释 1 PBMC 外周血单个核细胞主要指淋巴细胞和单核细胞 是免疫学实验中最常用的细胞群 也是进行 T 细胞和 B 细胞分离纯化的重要环节 2 E 花环试验 T 细胞表面有特异性绵羊红细胞 SRBC 受体 即 E 受体 将 T 细胞与 SRBC 按一定比 例混匀 置 4 至少 2h 或过夜 T 细胞表面的 E 受体能与 SRBC 结合形成以 T 细胞为中心 四周环绕 SRBC 的花环样结构 镜检计数可得总花环 Et 形成率 亦即 T 细胞的百分率 3 淋巴母细胞转化试验 细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后 细胞出现一系列的增殖反应 主要 表现为胞内蛋白质和核酸合成增加 并发生形态返祖变化 如细胞变大 胞质增多 胞质出现空泡 核染 色质疏松 核仁明显 这种淋巴细胞增殖反应又称淋巴细胞母细胞转化 lymphoblast transformation 4 溶血空斑试验 该方法用于检测实验动物抗体形成细胞数目 其基本原理是抗体形成细胞分泌的 Ig 与 SRBC 上的抗原结合 在补体作用下出现溶血反应 方法是将 SRBC 与其免疫的小鼠脾细胞 补体及适量 琼脂糖液混合倾注平板 或者将吸附有已知抗原的 SRBC 与待检 B 细胞 补体及适量琼脂糖液混合倾注平 板 温育一定时间 抗体形成细胞释放的抗体会使周围 SRBC 致敏 并在补体作用下出现肉眼可见的溶血 空斑 每一空斑中央含有一个抗体形成细胞 因此空斑数量即代表抗体形成细胞数 5 NBT 还原试验 活化的中性粒细胞与 NBT 一起温育 由于中性粒细胞吞噬杀菌过程中产生超氧阴离子 O 2 使被吞进细胞内的 NBT 由原来呈淡黄色还原成不溶性的蓝黑色颗粒 沉积在细胞浆中 称为 NBT 阳性细胞 光学显微镜下计数 NBT 阳性细胞 其百分率可反映中性粒细胞的杀菌功能 四 问答题四 问答题 1 T 淋巴细胞转化试验原理 T 淋巴细胞在受到非特异性有丝分裂原或特异性抗原刺激后能发生增殖反应 细胞代谢旺盛 蛋白质和核酸合成增加 与此同时细胞体积增大 分裂呈母细胞样 此为淋巴细胞转化现 象 因此可借助形态学方法观测淋巴细胞形态变化情况 3 H 胸腺嘧啶核苷 3 H TdR 掺入法测定 DNA 合成 情况 或 MTT 比色法测定线粒体代谢活性即可判定淋巴细胞转化程度 镜下淋巴细胞形态可以见到以下几种类型 1 淋巴母细胞 胞体比未转化淋巴细胞大 3 4 倍 呈圆形或椭圆形 胞浆染色淡蓝 可有伪足 空泡 细胞核增大 核质疏松 呈细网状 可见分裂现象 2 过渡型淋巴细胞 形态介于淋巴母细胞和正常淋巴细胞之间 体积稍大 多为 12 15 m 胞浆稍多 淡蓝色 核稍大 核质疏松 注意与大淋巴细胞区别 后者虽然体积较大 但核质致密 胞浆较少 嗜碱 性强 3 正常淋巴细胞 与未经刺激的淋巴细胞一样 体积小 核质致密 胞浆少 嗜碱性强 2 Ficoll hypaque 分离液分离 PBMC 的原理 血液单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞 人外周血单个核 细胞的密度为 1 050 1 077 而粒细胞和红细胞的密度在 1 080 1 110 利用密度为 1 077 0 001 的 Ficoll hypaque 分层液 将待分离的细胞悬液小心铺于其上 经离心后单个核细胞悬浮于分层液上层界面 而红细胞与粒细胞沉于管底 据此可将血液中的单个核细胞与其他细胞分离开 Ficoll hypaque 分离液分离 PBMC 的步骤 1 取静脉血 加肝素溶液抗凝 再加入等量 Hanks 液 混匀 2 取分层液置于离心管中 将稀释血液沿管壁缓缓叠加于分层液上 形成清晰界面 稀释血液与分 层液的容积比例以 2 1 3 1 为宜 3 置水平离心机中离心 2000r min 20min 4 离心后从离心管底部到液面分为五层 依次为红细胞沉淀层 粒细胞层 分层液层 白雾状单 个核细胞层 血浆层 含血小板和破碎细胞 5 用滴管直接吸出单个核细胞层 置于另一离心管中 6 加入 5 倍量以上的 Hanks 液 充分混匀 离心 1000r min 10min 离心后倾弃上清液 再用 Hanks 液洗涤 2 次 7 用含 10 20 灭活小牛血清的 Hanks 液或培养液配制细胞悬液 计数 并分别计