天狼猩红―偏振光法检测子宫内膜异位症中ⅠⅢ型胶原.doc

天狼猩红偏振光法检测子宫内膜异位症中，型胶原【关键词】 子宫内膜异位症关键词: 子宫内膜异位症;胶原;荧光偏振;天狼猩红 摘 要:目的 探讨子宫内膜异位症中，型胶原的含量和作用. 方法 对20例子宫内膜异位症（EM）患者的异位内膜组织（红色病变组和黑色病变组）和11例非子宫内膜异位症患者的在位内膜组织（对照组）用天狼猩红染色，偏振光观察，photoshop分析，半定量研究，型胶原的含量. 结果 ，型胶原在对照组中含量最低（P0.05，P0.05），胶原在红色病变组中含量最高（P0.05），型胶原在黑色病变组中含量最高（P0.05）. 结论 子宫内膜异位症患者的异位组织中有，型胶原的表达.，型胶原的异常表达可能在EM的发病机制和病程进展方面有重要作用. Picrosiriuspolarization determination of type，collagen in endometriosis implant LI Jie ，XIN Xiao-Yan ，CUI Geng 1 Department of Gynecology& Obstetrics，2 Department of Orthopedics，Xijing Hospital，Fourth Military Medical University，Xian710033，China Keywords:endometriosis;collagen;fluorescence polariza-tion;sirius red Abstract:AIM To determine type，collagen present in ectopic endometrium and in the connective tissue surround-ing ectopic endometrial implant，and to valuate the degree of fibrosis in the endometriosis.METHODS Normal eutopic endometrium，red lesion and black lesion were collected and type，collagen detected by sirius red and polarization microscopy.The percentage of the stained area in the tissue was measured with a computerized image analysis system.RESULTS There was significant difference in the mean per-centage of the total stained area among the three groups（A，B，C）.Amount of，type collagen was the lowest in group C（P0.05，P0.05），and the stained area of type-collagen in group A was the highest among the three groups（P0.05）.The amount of type-collagen was sig-nificantly higher in group B than in group A and group C（P0.05）.CONCLUSION This study demonstrates the presence of type，collagen in the intrauterine and ec-topic endometrium of patient with endometriosis.And type，collagens play important roles in occurrence and devel-opment of endometriosis. 0 引言 研究表明，约有10%的育龄妇女患有子宫内膜异位症（Endometriosis，EM）1 ，且近些年来有逐渐升高的趋势.目前为多数研究者所接受的是1927年Sampson2 提出的经血逆流种植理论，根据这一理论，在子宫内膜种植和增生之前，它们必须到达盆腔，粘附在腹腔间皮的表面.为了种植和生长，子宫内膜细胞必须与腹膜建立细胞-细胞或细胞-胞外基质之间的相互作用.近来有证据表明，EM早期损伤中最初脱落的细胞可侵入腹膜的胞外基质（extracellular matrix，ECM）3 .ECM是一种活泼的动态物质，它们影响着细胞的分化、增殖、粘附、形态发生和表型表达的生物学过程，因而与组织修复、肿瘤侵润转移、脏器硬化等多种病理过程有关.胶原是一种重要的ECM4 ，其在EM的发生与发展方面可能有重要作用.我们拟通过苦味酸天狼猩红偏振光方法（Pi-crosirius-Polarization）半定量检测，型胶原在EM患者和正常育龄妇女中的表达情况，探讨其在EM中的作用. 1 材料和方法 1.1 材料 随机选取1998-01/2000-03在我院妇产科住院手术并经病理检查确诊为EM的病理标本20例.根据手术所见和病理学检查分组，A组为红色病变期12（增生期7，分泌期5）例（病变部位有丰富血管网，肉眼见为红色），B组为黑色病变期8（增生期4，分泌期4）例（病变部位有色素沉着，典型黑色、紫色结节）.C组为子宫肌瘤行全子宫切除术患者的子宫内膜组织11（增生期5，分泌期6）例，病理诊断为正常宫内膜.3组研究对象在术前3mo内均无激素治疗史.平均年龄EM组为（33.24.7）岁，对照组为（32.45.5）岁.经统计学检查两者之间无明显差异. 1.2 石蜡切片的制作 组织均经40g?L-1 甲醛固定，石蜡包埋，切片厚35m，HE染色后经病理组织学检查逐一确认，选取含有子宫内膜腺体、基质、粘连组织的病变标本和正常的子宫内膜标本备用. 1.3 ，型胶原的天狼猩红染色 取0.1g天狼猩红（美国Sirius Red.F3D）溶于100mL苦味酸饱和液中.切片脱蜡至水，苦味酸天狼猩红染液浸染1h，自来水洗苏木精复染核，封片. 1.4 偏振光显微镜观察 在偏振光显微镜（Olym-pus公司产品）下观察，型胶原分布情况，并采用photoshop软件的Histogram功能的分析统计各组织内，型胶原所占面积的百分数（像素数Pixels）. 统计学处理:实验数据以x s表示，用2 分析. 2 结果 2.1 偏振光镜下观察胶原的表现 经苦味酸天狼猩红染色，普通光镜下所有组织切片染色均呈鲜红色，C组的颜色较浅，A组和B组的颜色较深，肉眼即可区分出两组.在偏振光显微镜下观察，型胶原纤维显示很强的双折光性，为红色或黄色纤维.型胶原显示弱的双折光性，为绿色的细纤维.3组中都有，胶原.在A组的腺体和基质周围，型胶原呈交叉状分布（Fig1），而在其周围的粘连组织中只有型胶原出现，主要呈纤维状排列（Fig2），B组中，型胶原的分布与A组相似，但在病变周围的粘连组织中型胶原含量明显增高，呈粗纤维状，甚至可以融合成团块状（Fig3），C组中，型胶原成散点状分布（Fig4）.2.2 3组中型和型胶原的含量 3组的增生期和分泌期中，型胶原的含量无明显差异. 2.3 3组中，型胶原含量的比较 3组都有，型胶原表达.而3组之间，型胶原的含量有明显的差异.在偏振光显微镜下观察，C组中，型胶原含量在3组中最低（P0.05）.A组的，型胶原含量明显多于C组.在B组中型胶原的含量最高（P0.05），型胶原的含量低于A（P0.05）组. 3 讨论 胶原分子多呈有序的排列，它有正常的双折光，由于其富含碱性氨基酸，常可与酸性染料起强烈的反应.天狼猩红是一种很强的酸性染料，每个分子内有6个磺基酸，它可以和胶原反应，并可明显地增强胶原的双折光现象.这是由于许多染料分子以在长轴方向彼此平行排列的方式附着于每个胶原分子上的缘故5，6 .由于上述原理，苦味酸天狼猩红偏振光方法可揭示组织内的胶原类型和分布状态.表1 ，型胶原在3组中的含量（略）胶原是体内含量最多的ECM，遍布于各种组织和器官中.胶原家族包括至少15种胶原，其结构和功能有很大差异.胶原蛋白纤维化是许多疾病的病理表现之一，胶原的异常聚集和降解是其纤维化的基础.Stovall等7 和Matsuzaki等8 研究发现在EM患者中主要有，型胶原表达，这与本研究结果一致.有研究发现，肉芽组织中出现炎症细胞时，呈纤维细胞往往高表达型胶原mRNA，而减少表达胶原的mRNA，这说明炎症反应可能通过某种介质产生型胶原.还有研究认为当子宫内膜脱落到腹腔时引起一定程度的炎症反应.本研究发现A组，也就是红色病变组，型胶原为3组中最高的，B组中（黑色病变组）型胶原的含量最高.这说明红色病变是EM的病变早期，病灶处于活跃阶段，组织代谢旺盛，产生大量的型胶原，随着病情发展，病灶逐渐变得不活跃，代谢减慢，型胶原减少，型胶原增多，形成稳定的支持组织，病变部位纤维化.，型胶原的这一分布特点支持红色病变期为EM的早期病变9，10 .3组研究对象中，月经增生期和分泌期的，型胶原的含量都无异常（P0.05），分析原因可能是，胶原是一类较稳定的大分子物质，类固醇激素对它的调节作用较弱，不能引起它的周期性变化. ，型胶原作为一种重要的ECM，它与细胞的相互调控作用，主要是通过位于细胞膜上的ECM受体介导完成的，CAMs整合素家族（Integrin family）是最受关注的.其中主要以1亚群为主的 CAMs与，型胶原等ECM分子结合，参与细胞与细胞间粘附作用，在此基础上调节细胞与基膜结合及细胞移行.它们之间的接触和相互作用主要是通过“ECM-粘附分子-细胞骨架”的介导途径，进行着跨膜联系，并决定着生物细胞的形态.现已证实，整合素与胶原等胞外基质的结合主要是识别后者中的特定氨基酸序列，在EM患者中CAMs的表达是异常增高的11 .由此我们推测，当经血逆流时，子宫内膜碎屑脱落到腹腔时由于某种原因，型胶原合成量异常，它作为细胞粘附支架，可促进细胞移动，以利子宫内膜细胞表面粘附分子与胶原结合并在胞外基质表面铺展，变换细胞形态，同时利用胶原细胞骨架将各种信息传至细胞内，促进异位的内膜细胞得以在非正常位置生长、增殖，与周围组织发生粘连，病灶纤维化.因此，我们认为，型胶原的合成量异常升高在子宫内膜异位症的发生和发展方面有重要作用，但它是EM发病的起始因素还是促进病情发展的一个继发因素还需进一步实验证明. 参考文献: 1Giudice L，Tazuke S，Swiersz L.Status of current research on endomettiosis J.J Reprod Med，1998;43（3Suppl）:252-262. 2Sampson J.Peritoneal Endometriosis due to mentral dissemina-tion of endometrial tissue into the peritoneal cavity J.Am J Obstet Gynecol，1927;14:422-469. 3Spuijbroek M，Dunselman G，Menheere P，Evers J.Early en-dometriosis invades the extracellular matrix J.Fertil Steril，1992;58:929-933. 4Juliano R，Haskill S.Signal transduction from the extracellular matrix J.J Cell Biol，1993;120:577-585. 5Zhang J，He JW，Wang TL，Zhao JB.Indentification collagen typeandby sirius red and polarization microscopy J.Zhonghua Bingli Xue Zazhi（Chin J Pathol），1996;25（3）:180-181. 6Junqueria L，Cossermli W，Brentani W.Differential staining of collagen type，andby sirius red and polarization mi-croscopy J.Arch Histol Jap，1978;41:267-274. 7Stovall D，Anners J，Halme J.Immunohistochemical detection of type，andcollagen in endometriosis implants J.Fertil Steril，1992;57:984-989. 8Matsuzaki S，Canis M，Darcha C，Dechelotte P，Pouly J，Bruhat M.Fibrogenesis in peritoneal endometriosis.A semi-quantitative analysis of type-I collagen J.Gynecol Obstet In-