化学发光法与酶联免疫吸附分析法联合测定甲胎蛋白的应用.doc

化学发光法与酶联免疫吸附分析法联合测定甲胎蛋白的应用作者：陈灿锋单位：深圳市宝安区西乡人民医院，广东 深圳 518102【摘要】 目的：通过酶联免疫吸附分析法（ELISA）与磁粒子捕获免疫发光法(ICA)联合测定血甲胎蛋白(AFP)进行分析和探讨。方法：预先用ELISA对检测AFP的血清标品进行分组。然后根据浓度级别分组再进行检测血清AFP的浓度。结果：ELISA法可快速进行检测，发出检验报告。结论：可大大节约非常昂贵的ICA试剂，又能快速发出检验报告，无论是医院或者病患者都带来了非常可观的经济效益。 【关键词】 酶联免疫吸附分析法 化学发光法 甲胎蛋白 血清 随着经济的发展，人民生活条件的改善，为及早发现异常体征，将疾病消灭于萌芽时期，人们日益重视定期体检和产前检查，而检测血清AFP是体检和和产前检查必须设的检验项目。我院日常检测血清AFP标本量大约有100个，特别在年度体检高峰时，检测血清AFP标本量经常超过300个；由于化学发光法仪器自身固有的缺陷，项目检测速度比较慢，并且试剂昂贵1；ELISA测定血清AFP是一种定性或半定量的方法，它具有灵敏度高、特异性强、操作简易快速和价格便宜等的优点。我们对这两种方法联合测定血清AFP进行分析和探讨如下。1 材料和方法1.1 样本由本院门诊、住院患者和体检者共3456例，年龄20岁80岁，平均年龄(35±5.3)岁，男性1 923例，女性1 533例；AFP浓度从0 ng/ml54 320 ng/ml。1.2 仪器和试剂 ICA测定仪为美国贝克曼库尔特公司生产的ACCESS全自动化学发光测定仪，试剂为其配套试剂；ELISA检定仪为深圳雷杜生命科学股份有限公司RT21000C酶标仪，其试剂为郑州市博赛生物技术股份有限公司甲胎蛋白诊断试剂盒。1.3 AFP质控品和标准品 AFP定值质控品：质控品1(7.0 ng/ml)、质控品2(80 ng/ml) 和质控品3(1 725 ng/ml)，均购于美国贝克曼库尔特公司(批号：33219)；AFP定值标准品为美国贝克曼库尔特公司提供配套标准浓度分别为0 ng/ml、2.5 ng/ml、 5 ng/ml、25 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml和3 000 ng/ml。1.4 试验方法 均严格按照试剂说明书操作。2 结果2.1 ICA标准曲线和灵敏度 分别取0 ng/ml、2.5 ng/ml、5 ng/ml、25 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml和3 000 ng/ml标准血清，根据实验步骤测定发光强度的变化，绘制标准曲线(见图1)。其检出限为0.50 ng/ml，线性范围为0.50 ng/ml 3 000 ng/ml。2.2 ICA和ELISA检测AFP敏感性 用AFP质控品配成0 ng/ml1 725 ng/ml的不同浓度，用ELISA检测与浓度级别标记，结果见表1。表1 ICA和ELISA检测AFP敏感性与浓度级别标记方法AFP（略）2.3 ICA和GICA检测3 456例本院门诊、住院患者和体检者血AFP浓度，并用GICA浓度级别标记 结果见表2。表2 ICA和GICA检测3 456例本院门诊、住院患者和体检者血AFP浓度及浓度级别标记（略）3 讨论 AFP是人体在胚胎时期血液中含有的一种特殊蛋白，系肝细胞内粗面内网核糖颗粒所合成，在胎儿血清中正常存在的一种特殊蛋白。一般在妊娠后开始上升，至胎龄16周20周时达到最高峰，然后逐渐下降，胎儿出生后，血清AFP浓度下降，几个月至1年内降至正常，正常成人肝细胞失去合成AFP的能力；原发性肝癌患者，血清中AFP阳性率常明显升高，超过400 ng/ml，甚至达1 000 ng/ml以上或呈进行性升高；AFP的检测不仅有助于原发性肝癌的诊断，而且可以作为原发性肝癌的疗效考核标准，并可判断预后；此外，还可作为原发性肝癌的普查方法，通过普查，早期治疗，可以改善预后，甚至获得治愈，除在肝细胞癌可显著升高外，胚胎癌如睾丸癌、卵巢癌和极少数胃、胰、胆管、结肠直肠癌也可升高2。 化学发光检测分析法是灵敏、特异、线性范围宽、高准确性分析方法3；从图1的标准线可知，用ICA方法检测血清AFP，没有作样品稀释时其检测范围为 0.50 ng/ml 3 000 ng/ml，其检测范围非常宽，可检测AFP超过1 000 ng/ml的血清样品；但根据贝克曼库尔特公司的ACCESS全自动化学发光测定仪检测AFP检测原理和化学发光法仪器自身固有的缺陷，其检测AFP项目速度比较慢，无法进行大批量的检测活动。无法满足我院大批量（日常大约为100个AFP测试）的血清AFP检测任务；特别在年度体检高峰时（血清AFP标本量经常超过300个），根本无法完成AFP检测任务。 从表2结果研究表明，随着AFP标准血清浓度从低到高时，ELISA反应颜色变化为从无色，淡蓝色到深蓝色有规律的变化，根据颜色变化，浓度级别标记为-、±、+、+；AFP标准血清浓度在80 ng/ml时，ELISA反应色带为蓝色，我们标记为+。表2结果研究表明，当妊娠或肝细胞癌患者进行ELISA检测时其反应色带为蓝色，标记为+时，其AFP浓度范围为41 ng/ml200 ng/ml。 在作血清AFP检测时，只要我们预先用ELISA试剂对血清进行检测，根据颜色变化，浓度级别标记为-、±、+、+、+；再根据标记，然后将血清分为三组，1组：血清AFP≤40 ng/ml组，2组：41 ng/ml≤血清AFP≤200 ng/ml组，3组：血清AFP≥200 ng/ml组；最后，符合1组的样品量占了绝大数（90%以上）直接报AFP≤40 ng/ml，不须要进行ICA检测；剩下符合2组与3组样品量总和只占原来样品最多为10%，再进行ICA检测。因为ELISA试剂成本非常低廉，反应速度非常快最多只需要40 min，非常简便；经过ELISA试剂预先把样品进行分组，可大大节约了非常昂贵的ICA试剂，又能快速发出检验报告，无论是医院或者患者都带来了非常可观的经济效益。【参考文献】 1陈新瑞，李涛，潘佑明，等.全白动酶免疫分析系统对AFP定量的精密度影响分析J.实用预