输血科常用免疫试验标准操作程序YGC.doc

ABO正反定型和Rh D定型操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。样本准备：5%样本红细胞制备：压积红细胞25 l或全血50 l悬浮于0.5 ml达亚美2号稀释液中。配套试剂：ABO正反定/Rh定型卡 2号稀释液标准红细胞A1和B操作步骤：1) 取50l A1,B 标准细胞（0.8%）分别加入A1,B管中。2) 取50l 血清或血浆加入A1,B管中。3) 取10l 5% 样本红细胞加入A, B, D, Ctl管中。4) 离心10 分钟。判读结果。记录。结果解释：1、阳性（）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。阴性（）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、ABO血型判断血型抗原与抗血清反应与A1、B细胞反应抗-A抗-BA1BAA+/+BB+/+ABA，B，AB+0H+/+/+3、 Rh D血型判断+阴性Rh D阳性Rh D弱阳性Rh D阴性抗 体 筛 选 操 作 程 序 操 作 规 程（间 接 抗 人 球 法IAT）样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。配套试剂：低离子/抗人球卡，抗体筛选标准红细胞，抗原格局图 操作步骤：1) 取50 l试剂红细胞悬液至低离子/抗人球卡各微管中。2) 取25 l待检血浆/血清加入各管中。3) 37孵育15 min。4) 离心10 分钟。判读结果。记录。结果解释：1、阳性（）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。阴性（）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、抗体筛选结果：阴性表示被检血浆/血清未发现不规则抗体；阳性表示有不规则抗体。将结果与试剂红细胞的抗原格局图比对，初步确定抗体类型，并进一步检测以鉴定抗体。交 叉 配 血 操 作 程 序 操 作 规 程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。样本准备：0.8样本红细胞制备：取10l压积红细胞至1ml达亚美2号稀释液中。配套试剂：低离子/抗人球卡，2号稀释液 操作步骤：1) 取0.8供体红细胞悬液50 l至低离子/抗人球卡主侧管中；取0.8病人红细胞悬液50 l至低离子/抗人球卡次侧管中。2) 取25 l病人血浆/血清加入主侧管中；取25 l供体血浆/血清加入次侧管中。3) 37孵育15 min。4) 离心10 分钟。判读结果。记录。结果解释：1、阳性（）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。阴性（）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、交叉配血结果：阴性表示配血成功；阳性表示配血不成功，需进一步检测。 新生儿溶血症的“三项试验”操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。样本准备：0.8样本红细胞制备：取10l压积红细胞至1ml达亚美2号稀释液中。配套试剂：低离子/抗人球卡，2号稀释液，A1、B标准红细胞，抗体筛选标准红细胞，DiaCidel洗涤液（用前以蒸馏水1：10稀释），DiaCidel放散液，DiaCidel缓冲液操作步骤：红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)1 取新生儿脐带血，用达亚美2号稀释液（ID-Diluent2）配0.8%的红细胞悬液。2 在低离子/抗人球卡中加入50l上述红细胞悬液。3 离心10分钟，判读结果。记录。游 离 试 验(IAT)1 取新生儿脐带血，离心，取血浆。2 在低离子/抗人球卡中分别加入50l 0.8%的标准红细胞。3 各孔均加入25l新生儿脐带血清。4 37孵育15分钟，离心10分钟。判读结果。记录。 释 放 试 验(IAT)1 用等渗生理盐水洗涤红细胞一次，至少需要压积红细胞1ml。2 用DiaCidel洗涤液（工作浓度）洗红细胞4次。3 最后一次洗涤后，小心倾除上清液。可另用试管保留部分上清液，以检测是否存在不规则抗体。4 将1ml DiaCidel放散液加至红细胞中，充分混匀。5 立即离心1分钟，转速900g（3000 rpm）。6 将放散液移入干净试管。7 加5滴（250l）DiaCidel缓冲液于放散液中，混匀。若有兰色出现，表明达到中性，即pH 6.57.5；如为出现兰色，则需再加入更多DiaCidel缓冲液（每次一滴，边加边摇匀）。8 将放散液再次离心1分钟，转速900g（3000 rpm）。以完全清除残存细胞。9 现在放散液可用于检测了（可以根据临床实际情况用A1、B标准红细胞和/或抗体筛选标准红细胞）。10 在低离子/抗人球卡中分别加入50l 0.8%的标准红细胞。11 各孔均加入25l放散液。12 37孵育15分钟，离心10分钟。判读结果。记录。结果解释：1、 红细胞直接抗球蛋白试验(DAT)阳性：红细胞被致敏。 阴性：红细胞未被致敏。2、游离试验(IAT)阳性：血浆中有游离抗体。 阴性：血浆中无游离抗体。3、释放试验(IAT)阳性：红细胞表面有抗体包被。 阴性：红细胞表面无抗体包被。孕妇血清IgG抗体水平检测操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。配套试剂：低离子/抗人球卡，2号稀释液，标准红细胞（A1、B和/或抗体筛选），0.2 M二巯基乙醇液（17 l 2-Me原液加入1ml 2号稀释液中，混匀）操作步骤：1配制中和血浆：取母亲血浆与0.2 M二巯基乙醇液（2-Me）各100 l，充分混匀。置37水浴30分钟，以充分破坏血清中的IgM类抗体。2把孕妇的中和血浆用生理盐水倍比稀释效 价1：321：641：1281：256中和血浆（l）20200200200生理盐水（l）3002002002003取50 l的标准红细胞（用何种细胞取决于父方血型）加入低离子/抗人球卡。4分别加入25 l不同效价的稀释血浆（一般为1：64、1：128、1：256三种）。537孵育15分钟。6离心10分钟，判读结果。记录。结果解释：1ABO新生儿溶血病：美国血库协会（AABB）认为1:128滴度为有临床意义；根据P.L.Mollison所著教材临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）,将1:512或更高滴度作为有临床意义抗体。2Rh新生儿溶血病：根据现代血库和输血实践第20章427页,各实验室应建立自己的滴度决定水平。18-20周检测Rh D滴度，如：（1）如Rh D滴度为1:32或更高，应重复检测，在20-24周行羊膜穿刺或抽脐带血进行检测（2）如Rh D滴度为1:16或更低，应在妊娠第4-6个月，每月检测一次，第7个月至预产期前，每2周检测一次Rh D滴度新生儿ABO/Rh血型鉴定操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。 若需要用血清替代血浆进行检测时，应在用前离心，1500g10min，以免纤维蛋白残余干扰反应结果。样本准备：0.8样本红细胞制备：取10l压积红细胞至1ml达亚美2号稀释液中。配套试剂：达亚美新生儿血型卡，2号稀释液 操作步骤：1取新生儿脐带血或静脉血，用达亚美2号稀释液（ID-Diluent2）配0.8%的红细胞悬液。2在达亚美新生儿血型卡所有6根微管中，均分别加入50l上述红细胞悬液。3离心10分钟。判读并记录结果。结果解释：1、阳性（）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。阴性（）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、 新生儿由于免疫系统的发育不完全，体内尚不能自主形成相应的抗体。此时体内抗体多来自母亲，反定型没有临床意义。因此，在达亚美新生儿血型卡中去掉了反定型检测，增加了抗-AB孔和AHG孔。抗AB可作为对抗-A和抗-B的对照监测；AHG则可进行直接抗人球检测，初步进行新生儿溶血症的筛查。ABO/D血型复检卡操作规程样本要求：血样最好用枸橼酸、EDTA或CPD-A抗凝。为了得到可靠的结果，必须强调一定要使用新鲜采集的血液。样本准备：配制5红细胞悬液：取25l压积红细胞至0.5 ml达亚美2号稀释液中。配套试剂：达亚美ABO/D血型复检卡，2号稀释液 操作步骤：1、 在达亚美ABO/D血型复检卡上标上病人的姓名/编号,撕开铝箔；2、 将10 l患者的红细胞悬液，分别加入达亚美卡相应的三个微管中；3、 将达亚美卡在达亚美离心机上离心 10分钟；判读及记录反应结果。结果解释：1、阳性（）：细胞在凝胶表面凝集成一条红线或散布在凝胶中。阴性（）：细胞沉积在管底。双相（d.p.）：既有阳性结果，同时也有阴性结果。溶血（Hemo）：红细胞溶解，作为阳性结果对待。2、ABO血型判断 3、Rh D血型判断抗-A抗-B血 型+/+-A-+/+B+/+/+AB-O+/+/+RhD阳性RhD弱阳性RhD阴性4、本卡用于在血型已知的情况下，对红细胞ABO血型系统和Rh系统中D抗原进行复检。如两个检测结果一致，则基本证实血型鉴定无误，检测的操作和解释正确。5、本卡中的单克隆抗-D抗体，不与部份DVI表型红细胞发生反应。为了保证给予患者适当的治疗措施，我们应将患者DVI红细胞定为“Rh阴性”。相反，献血者的血液应该用可检测到DVI表型的试剂和将其定为“Rh阳性”，以避免将该血液输给Rh D阴性或不完全Rh D的病人。达亚美离心机(ID-Centrifuge 12S II)操作规程1. 打开机器电源开关(开关在机箱后部、电源插头上方)。2. 屏幕出现如下字幕，表示机器进入可使用状态： Ready3. 按面板上的 STOP/OPEN 键，打开机器盖子。4. 将达亚美卡对称放入离心机转头内，关上机器盖子。5. 按面板左侧的 START 键，机器开始运转。6. 当屏幕出现如下字幕，机器自动进入10分钟倒计时：1030rpm 10:007. 机器发出警报声，并同时自动开启盖子。8. 取出达亚美卡。达亚美孵育器(ID-Incubator 37S I)操作规程1. 打开机器电源开关(开关在机箱后部、电源插头上方)。2. 待机：预热15-30分钟，温度自动上升到372(注意在此过程中温度会有回降)。3. 当屏幕出现如下字幕，表示机器进入可使用状态：（如未出现该字幕，则机器不能使用，需再等待数分钟） * * Ready * *4. 掀开机器盖子，将装有达亚美卡的卡架放入孵育室内，关上盖子。5. 按面板左侧的 START(+) 键，屏幕闪动如下字幕：* * START * *37.2 15:006. 机器自动进入15分钟倒计时。7. 机器发出警报声，表示孵育时间已到。或按 STOP/TIMER(-) 键，随时中止孵育过程。8. 掀开机器盖子，取出达亚美卡架。注意事项：1、每日实验前，先取出2号稀释液及标准细胞，放置至室温，以防冷凝集现象。2实验前将卡离心34分钟，必须标记卡。3、卡封口已损坏，管中干涸或有气泡时，卡不可使用。4、用2号液保证反应结果可靠，常规正定细胞浓度为5%，新生儿正定细胞浓度为0.8 %，定量配