急性髓系白血病患者原发性　ｍｄｒ１　基因产物Ｐ－１７０　与　ＣＤ３４表达及预后的关系.doc

急性髓系白血病患者原发性基因产物与表达及预后的关系【关键词】 急性髓系白血病；摘要 目的：观察急性髓系白血病（）患者原发性基因产物与抗原表达与预后的关系。方法：常规分离例急性髓系白血病细胞，然后分别进行细胞免疫化学检查，观察了细胞膜分化抗原变化和基因产物反应。结果：总体表达率为，以最高，最低；阳性的白血病患者临床耐药发生率较阴性者高（），表达者耐药发生率也很高（较阴性者，）。结论：和表达是急性髓系白血病患者对化疗抵抗的标志。关键词 急性髓系白血病；免疫表型；单克隆抗体 ，（，）：（）：（），；（）（），（） ：；：目前研究发现多耐药基因（）表达水平与白血病细胞分化程度有关，为此本文观察了例细胞原发性基因产物表达与髓系分化抗原表达的关系，并探讨了其临床意义。 对象与方法 对象 本组例均经分型确诊的初诊患者，其中例，例，例，例，例，男例，女例；年龄岁。 主要试剂 单克隆抗体（单抗）、检测试剂盒即链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶连接法（）检测试剂盒和显色试剂盒购自福建迈新公司，多耐药细胞系和敏感细胞系细胞涂片由中科院天津血研所杨纯正教授提供，免疫表型检测所用单抗、由军事医学科学院基础所提供，、由中科院天津血研所免疫室提供，碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（）检测试剂盒由卫生部武汉生物制品所提供。 检测 取新鲜骨髓标本，肝素抗凝，常规分离单个核细胞涂片，空气干燥，用检测试剂盒检测。染色过程如下：先以丙酮固定，冲洗液（）洗次，依次滴加过氧化酶阻断液，非免疫动物血清，抗（）、生物素标记的二抗、链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶溶液。每加一种试剂或抗体均置于湿盒内室温孵育（除一抗孵育外）。取出洗涤后再加下一种试剂或抗体。最后加，后清水冲洗，苏木素复染。每次操作均设多耐药细胞系和分别为阳性和阴性对照。镜检至少个细胞，计算阳性细胞百分率。阳性细胞为表达（或称基因表达）阳性。 细胞免疫表型检测 用方法，取新鲜骨髓标本，肝素抗凝，常规分离单个核细胞涂片，空气干燥，丙酮固定，（缓冲液）冲洗后，依次滴加一抗、二抗、三抗，底物显色液，置湿盒内孵育，每加一种试剂或抗体后均置湿盒孵育（除一抗孵育外），然后取出，冲洗后再加另一试剂或抗体，最后滴加底物显色液。阳性反应为红色定位在胞浆和胞膜，计数个细胞，计算出阳性细胞百分率，以阳性细胞者为该抗原表达阳性，否则为阴性。 统计学处理 表采用精确概率法，表采用组内分组卡方检验。 结果 在的表达 例患者中例（）具有基因表达（见图、和表）。不同亚型的表达阳性率以最高（），最低。也有很高比例表达，但因病例数较少，与总体比较未见显著差异（）。图 多耐药细胞系 阳性细胞 （略） 图 阴性细胞（略）图 原代细胞阳性细胞 （略）表 例亚型与表达的关系（略） 表达与免疫表型 表达与免疫表型的关系见表和图、。组中表达率显著高于组（），并且表达和表达呈正相关（）。表 表达与表型的关系（略）图 表达与表型相关关系图（略）图 原代细胞阳性细胞 （略） 表达与临床耐药的关系 按照的白血病耐药产生标准：急性白血病使用一线抗白血病药物，常规剂量全量全程诱导缓解方案，个疗程未达完全缓解（）者定为耐药组，个疗程内达者为组。例患者首次诱导缓解方案为（代表柔红霉素，代表阿糖胞苷）。作者追踪观察了例患者表达与否与临床疗效之间关系。总体耐药发生率为（），例者中耐药发生率（），而例者耐药发生率为（），显著高于者（）。 表型与临床耐药的关系 经统计学处理发现，表达与耐药产生明显有关，者耐药发生率为（），而者例中无例发生耐药。 和协同表达与化疗反应的关系 和单独表达者耐药发生率分别为（）和（），显著高于（）和阴性组（）；和协同表达者耐药产生率更高达（），但同或单独表达者比较未显统计学差异（）。见表。表 免疫表型与预后的关系（略）总 ， ， ，交互 讨论多耐药（，）现象就是指肿瘤细胞基因过度表达，目前公认是的基因产物。作用原理就是利用提供的能量，将被动扩散入细胞内的天然亲脂类抗肿瘤药物主动泵出胞外，使靶细胞内始终维持较低的药物堆积，细胞由此逃避抗癌剂的杀伤。作者利用单抗检测了例初诊患者细胞基因产物的表达情况，以阳性细胞为，正常骨髓的细胞为，据此标准，本组的患者具有基因表达；按急性白血病使用一线抗白血病药物全程全量个疗程以上未完全缓解者为耐药标准划分，基因表达者耐药产生率很高，显著高于组。关于初治的基因表达阳性率国外报告范围为，本组在此范围内。等人观察了例初治患者，其中表达，组与组率显著不同（），并且，组易复发，无病生存期短，易早期死亡，说明基因表达是细胞本身固有特性，是原发性的。并提示患者原发性表达增加能导致耐药，预后差。关于白血病细胞基因来源，认为很可能是由于发病初斯出现突变所致。基因在各亚型的表达频率不同，等发现基因在、和的表达率高，以表达率最高（），则不表达。本组病例基因在不同亚型表达趋势与报告结果相近，即在最高，最低。虽然组表达比例也很高，但由于观察例数少，不足以说明问题，有待进一步研究。关于细胞和的阳性表达，等报道了细胞中基因高表达与阳性显著相关，本组结果也显示表达与呈正相关，表达也有独立预后意义即单独表达者耐药发生率也很高。以上结果提示，表达的髓系白血病细胞具有多能干细胞的特征。或来自分化不好的细胞群体，因此，临床上可把细胞作为急性髓系白血病细胞化疗不敏感的指标，实行化疗方案个体化或及时使用逆转剂联合化疗，以提高化疗效果。 参考文献 ，（）：，： 杨纯正，奕风君，刘炳仁，等，白血病多药耐药检测，中华血液学杂志，： 李惠芳，孙桂香，卢薇薇，等白血病多药耐药基因表达与细胞表面分化抗原的关系中华血液学杂