戴安U3000-HPLC操作流程国产软件.pdf

戴安戴安 Ultimate 3000 系列系列 HPLC 标准操作规程标准操作规程 一 准备工作准备工作 1 面板操作指南 面板操作指南 1 1 如何进入菜单 如何进入菜单 使用仪器中配置的感应笔在仪器前面板显示屏下的白色定位点前约 0 5cm 处悬停约 1 秒或轻触 四个定位点的上方将显示相应的菜单功能 按需要进 行相应的选择即可 常规参数的选择 或进入 使用 SELECT或或OK 返回上一 层按 BACK 分别为光标移动键 感应笔触任一定位点将直 接显示出 常用功能菜单 对于未显示的功能 则需要先选择 MENU 进入主菜 单 再进一步进行选择 1 2 各设备的主要功能 各设备的主要功能 1 2 1 泵 泵 A 泵开关 泵开关 使用感应笔调出现常用功能菜单后 直接选择 FLOW ON 功能 即开启泵马达 在启动后 再次调出菜单后显示的 FLOW OFF 为关闭泵选项 B 溶剂选择 溶剂选择 使用感应笔调出常用功能菜单后 选择 MENU 进入后再选择 CONTROL 功能 进入子菜单后 移动选项到相应的溶剂 A B C D 进入后再调节相应的值即可 在当前设置流动相比例不足 100 系统会自动与前 一项进行分配 总和为 100 C 流速的调节 流速的调节 使用感应笔调出常用功能菜单后 直接选择 SET FLOW 然后 通过移动选项进行流速的设置 注 数值不能自动进位 故设置时应确认显示的值 为最终的值 D PURGE 使用感应笔调出常用功能菜单后 直接选择 PURGE 即执行 再 次选择时即为关闭 当未做选择时系统会在执行 5 分钟后自动停止 1 2 2 紫外检测器 紫外检测器 A 灯开关 灯开关 在使用感应笔调出常用功能菜单后 选择 MENU 进入子菜单后 再选择 GENERAL SETTING 进入后 再进入下一级子菜单 通过感应笔移动 选择 UV LAMP 进入后再选择 TOGGLE 则打开氘灯 再选择 Vis LAMP 时 相应的操作打开钨灯 B 波长选择 波长选择 在调出常用功能菜单后 选择 WAVELENGHT 选择 再选择 WAVELENGHT 1 进入 通过感应笔移动光标选择修改检测波长 C 自动调零 自动调零 在调出常用功能菜单后 选择 AUTOZERO 即执行自动调零 D 启动 启动 停止采集 停止采集 在调出常用功能菜单后 选择 RUN STOP 启动或停止数据 信号的采集 仅用于国产工作站 波长改变后必须重新执行一次启动 1 2 3 柱温箱 柱温箱 A 温度控制 温度控制 在调出常用功能菜单后 选择 TEMP 即进入温度设置子菜单 其中可通过 ON OFF 控制柱温箱的启动和停止 同时通过移动选择进行温度的 值设置 B 阀切换控制 阀切换控制 在调出常用功能菜单后 选择 VAVLE 进入阀控制子菜单 设 置流路连接及阀位置的切换 1 2 4 自动进样器 自动进样器 A 进样针清洗 进样针清洗 在调出常用功能菜单后 选择 WASH 即执行针的清洗 B 进样针排气泡 进样针排气泡 在调出常用功能菜单后 选择 PRIME 即自动执行针的排气 泡 2 各部件的准备操作 各部件的准备操作 2 1 泵 泵 A 流动相 流动相 流动相是否充足 主要是有机相或者是单一通道的缓冲盐体系 一般应在所预计的 消耗量之上加 150 200ml 以保证仪器运行过程中不会出现流动相短缺 流动相是否新鲜 主要是高纯水及缓冲盐流动相 一般情况下一次制得的纯水或 缓冲盐流动相应在连续的 24 小时内使用完 如未使用完也应弃去不用 并重新配制新鲜 的流动相 特殊情况至少应重新过滤并脱气 B 柱塞清洗液 B 柱塞清洗液 清洗液是否新鲜及匹配 对于常规的流动相 一般指不含盐或离子对等 添加剂的流动相 配制 50 甲醇作为清洗液 在连续不超过 4 天工作的情况下可以两周 一换 若超过 4 天 则一周一换 对于含盐或其它添加剂的流动相 配制 5 甲醇 或高纯 水 作为清洗液 在连续使用时 应每日更换 中间如有较长时间不用 则应将清洗液瓶 清空 或改为 50 甲醇作为保存液 并在下次使用时 根据所使用的流动相配制适宜的清 洗液 若泵超过半个月以上不用 应将柱塞清洗溶剂管 蠕动泵下压部分 抽出 清空清洗液 瓶 再次使用时 将溶剂管放回原位并添加新的清洗液 以保证清洗管道的正常使用 C 溶剂管道C 溶剂管道 管道中的气泡 在泵长期不用时 由于脱气机停止工作 流动相会重新溶解环境中 的气体 而产生的气泡会对柱 泵及检测器产生不同程度的影响 因此要求在停泵后重 新使用时应先观察 A B C D 四溶剂管道进比例阀部分是否存在气泡 如无 在泵启动 后等待 5 分钟后 脱气机自动脱气 再启动泵流速 若有 则选择相应的通道 通过感应 笔 在仪器前面板菜单中将相关通道比例设为 100 打开 PURGE 阀后 点击泵面板上的 Purge 命令执行流动相自动脱气 再次点击该键命令关闭 或等待 5 分钟后仪器命令 运行完成后自动停止 完成脱气后 先关闭 PURGE 阀 再启动泵并逐步升高流速流速 流动相快速替换 由于流动相通道数量有限 当需要对通道中流动相进行更换时 应首先打开 PURGE 阀 选择相应通道比例为 100 执行 Purge 命令 等待命令自动执 行完成后 关闭 PURGE 阀 按要求进行系统的过渡或平衡 2 2 自动进样器2 2 自动进样器 A 进样针排气及清洗 进样针排气及清洗 当自动进样器非连续使用时 间隔一天或以上 应在仪器启动前 尤 其是泵 先对进样针执行排气 在自动进样器前面板菜单中 选择 Prime Syringe 设置排 气操作的循环次数 通常设置为 3 5 次 Wash buffer loop 清洗定量环 按 OK 开始 Wash Needle Externally 进样针外壁冲洗 通常在当天 或批次 样品分析完成后执行 若使用针清洗液瓶中清洗液冲洗 则应使用与流动相组成一致 一般与流动相一致 如 果流动相使用到盐等添加剂 清洗液中盐溶剂使用水代替盐即可 且有效脱气有溶剂 B 进样针清洗 进样针清洗 当连续使用中需要更换样品类型或流动相粘度较大时 应在每次进样完 成后进行针 Buffer loop 和 Needle 清洗 2 3 柱温箱 柱温箱 柱温箱应在打开电源且柱连接好后 及时启动 ON 并设置方法要求的温 度及平衡温度偏差 在温度到达设置温度的正负平衡温度偏差点时 系统会自动检测温 度是否平衡 在达到稳定的平衡后 继续以 0 1 度的步进速度升温 2 4 检测器 检测器 为减少灯能量浪费 通常检测器在样品准备工作完成后 或基本完成时 即样品准备工作能在 30 分钟以内完成 同时仪器按方法要求流动相比例及流速平衡至 少 30 分钟以上后打开 在完成自检 20 分钟以后方可开始样品的进样分析 二 仪器平衡 二 仪器平衡 1 泵 泵 应在完成准备工作后 以 0 2ml min 的步进速度 每个平衡点保持 0 5 分钟以上时 间 进行流速的升降 在达到 0 6ml min 以上的流速时进行等度流动相比例或梯度流动相初始平 衡比例调整 根据准备样品的准备情况 及时将流速调整到方法要求的值 并等待压力稳定 后平衡 30 分钟以上时间方可进样样品的分析 当比例调整幅度大于 40 的变化时 应进行过 渡 选择两步或两步以上调整后达到需要的比例 通常 先调节待加入流动比例为 5 10 平衡约 5 分钟以上 后再调节比例到要求的浓度 梯度泵开机时通常选择有机相调节平衡流 速 再进逐步加入水相 含盐流动相系统应以调节有机相比例 5 10 平衡约 30 分钟以上 再逐步转换到盐通道 2 检测器 检测器 常规情况 设定方法要求的波长 UV PDA 或激发及参比波长 RF 并调 整检测器显示范围为 5 100mV mAU 查看基线 考虑到在连续的 20 分钟 基线在设置 的显示范围内基本平直即可开始样品进样分析 3 柱温箱 柱温箱 在方法要求使用柱温箱时 应在仪器电源打开后 及时将柱温箱温度设置到 预定值并启动 4 进样器 进样器 手动进样在系统平衡过程中应扳至 Inject 位置 以保证系统充分平衡 三 关机及注意事项 三 关机及注意事项 1 关机 关机 样品分析最终最终完成后 应首先关闭检测器的灯 以减少灯能量的损失 其次 根据流动相的组成是否含有缓冲盐或离子对等添加剂 选择以纯甲醇 不含添加 剂流动相 不含添加 剂流动相 或 5 甲醇水溶液 含添加剂流动相含添加剂流动相 除盐 或酸或酸 碱碱 后以纯甲醇进行柱及系统的 清洗 连续使用情况下每日至少清洗 30 分钟以上时间 非连续使用应增长清洗时间 具体以 相关的样品性质作为参考 含盐流动相至少以 5 甲醇水溶液清洗 60 分钟以上 再逐步改换 到纯甲醇清洗 再者 选择自动进样器相关的清洗 Buffer loop 和和 Needle 如果样器溶剂含有添加剂 则应先用纯水冲洗去除添加剂后 再用甲醇清洗保存 如果是手动进样器 需使用随机配置 的专用接头对手动进样阀在 Load 位进行清洗按上述选择相应的溶剂进行清洗 完成后扳至 Inject 位用清洗液充填管道 上述工作完成后再将柱温箱关闭或降至室温 如果所用的温度较高 在关闭电源后 最 好是先将柱温箱盖打开 确认柱温箱内温度己降到室温后 再关闭 2 注意事项 注意事项 A 新柱子活化时最好断开检测器管道直接排除清洗液 活化对于普通 C18 ODS 柱 建议使用纯甲醇以 0 2ml min 的流速 冲洗柱子 12 个小时以上 过夜过夜 再逐步将流速提升到 0 5 1 0 1 2ml min 并在每个条件下保持约 20 分钟 执行完成后降下流速 换上实验要求 的流动相平衡系统 B 一次开灯相当于 30 小时灯寿命