草乌炮制前后成分及抗炎和毒理作用的比较.doc

草乌炮制前后成分及抗炎和毒理作用的比较吴鹏摘要：本实验主要探讨了草乌生品和制品中生物碱含量的变化，以及炮制前后抗炎作用和毒性的变化。关键词：草乌，生物碱，抗炎，毒理。草乌为毛茛科植物北乌头Aconitum kusnezoffii Reichb. 的干燥块根。性味辛、苦，热，有大毒。归心、肝、肾、脾经。主要功效为祛风湿，温经止痛，主要用于风寒湿痹；心腹冷痛，寒疝疼痛；跌打损伤，麻醉止痛。毒性较大，内服应炮制用，且宜先煎、久煎。1 草乌炮制前后的成分变化1.1 实验材料和仪器三号筛、容量瓶（5ml、25 ml）、电子分析天平（1/10000）、具塞锥形瓶（50 ml）、移液管（1 ml、25 ml）、100 ml烧杯、超声处理机（功率500 W，频率400 Hz）、电子秤、漏斗、脱脂棉、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪（美国Waters公司）；草乌生品。1.2 实验步骤1.2.1草乌的生品和制品粉末的制备取净草乌，大小分档，用水浸泡至内无干心，取出，加水煮至取大个切开内无白心，口尝微有麻舌感时，取出，晾至六成干，切薄片，干燥。取生草乌和制草乌饮片，真空干燥箱中至恒重后粉碎，过三号筛，备用。1.2.2对照品溶液的制备乌头碱对照品溶液：取乌头碱对照品适量，精密称定，加异丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液制成每1 ml含乌头碱0.3102 mg的溶液，过0.45m微孔滤膜，即得。苯甲酰乌头碱对照品溶液：取苯甲酰乌头碱对照品适量，精密称定，加异丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液制成每1 ml含苯甲酰乌头碱0.0203 mg，0.45m微孔滤膜，即得。1.2.3 供试品溶液的制备取生草乌、制草乌粉末（过三号筛）各约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液1 ml，精密加入异丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液25 ml，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 Hz；水温在25 以下）15 min，放冷，再称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15 ml，40以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液5 ml溶解，取1ml，2500-3000n/min离心5min，取上清液，即得。1.2.3 进样测定色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂；柱温：30 ；以乙腈-四氢呋喃（25:15）为流动相A，以0.1 mol/L醋酸铵溶液（每1000 ml加冰醋酸0.5 ml）为流动相B，按下表所示进行梯度洗脱；检测波长为235 nm；进样量：10l；理论塔板数分别按乌头碱峰和苯甲酰乌头碱峰计算，应均不低于2000。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0-4848-48.148.1-5858-6515262635353515857474656565851.2.4实验数据处理试样A乌头碱A苯甲酰乌头碱C乌头碱（mg/ml）C苯甲酰乌头碱(mg/ml)乌头碱对照品36427110.3102 苯甲酰乌头碱对照品2123880.0203生品1585816316966600.49890.1322生品2634069112569450.53990.1201制品11436742983970.01220.0285制品21101482916130.00940.0279结论：炮制过后，草乌中的乌头碱和苯甲酰乌头碱含量明显下降。2 草乌炮制前后抗炎及毒理作用比较2.1 实验材料和器械 草乌生品、制品，生理盐水，阿司匹林，二甲苯；锅，电磁炉，灌胃针，手术剪，打孔器，榔头，手术板,ICR小鼠。2.2 样品提取 分别取生制草乌15g，煎煮两次，第一次加8倍水煎煮30min，第二次加6倍水煎煮20min，合并煎液，浓缩至没ml含生药0.3g，即50ml，即得生制品水煎液。2.3 抗炎实验2.3.1 实验步骤 取ICR小鼠，并禁食不禁水一天，随机分成6组，每组3只，按组分别灌胃生理盐水，4mg/10g阿司匹林药液，生品6mg/10g,生品12mg/10g，制品6mg/10g，制品12mg/10g，给药两次，分隔4小时。第二次给药30min后，在小鼠右耳涂布致炎剂二甲苯50l/只，左耳不作任何处理，30min后处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用6mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，即时称重，计算肿胀度，以及给药组的肿胀抑制率。2.3.2 实验数据与处理 组别给药量mg/10g左耳重/g右耳重/g肿胀度/%平均肿胀度/%肿胀抑制率/%0.01090.020487.2生理盐水0.01180.0236100.084.716.69-0.01270.021266.940.01250.015020.0阿司匹林40.01250.020664.835.935.4957.640.01230.015122.860.01270.017840.2生品60.01360.024680.967.233.0720.760.01180.021380.5120.02250.028426.2生品120.01550.0395154.884.492.140.354120.01190.020572.360.01080.018470.4制品60.01180.0275133.181.968.803.3160.01160.016542.2120.01250.016834.4制品120.01070.0234118.796.977.7014.4120.01170.0278137.62.3.3 结论草乌生品与制品的肿胀度与空白组没有明显差异，甚至部分组别肿胀度较空白组高，实验失败。2.3.4 讨论草乌生品引进时间为两年前，可能药效已较弱；草乌煎煮过程中，煎煮时间过短，可能无法完全发挥药效；灌胃时可能操作不当，未能将药液完全灌入小鼠胃中；耳廓肿胀实验本身可变因素过多，小鼠之间有个体差异的存在，打孔器所打的耳片也不能完全保证是同一部位，很难保证不产生差异。2.4 毒理实验 取ICR小鼠8